L’électronique de von Frey associée à l’échelle de grimace de la souris pour évaluer l’allodynie et la douleur chez les souris infectées par Trypanosoma evansi
Summary
Ici, nous présentons un protocole pour évaluer la nociception chez les souris infectées par Trypanosoma evansi, en utilisant l’appareil électronique de von Frey comme outil, mesurant les seuils mécaniques de la patte arrière et des viscères.
Abstract
La pathogenèse des maladies infectieuses reste un domaine complexe à étudier. L’évolution de plusieurs signes cliniques, tels que l’allodynie et la douleur, peut être observée chez les animaux domestiques. Cependant, la connaissance de leurs voies et le traitement correct nécessitent des expériences contrôlées, dont beaucoup utilisent des animaux de laboratoire. La mesure des changements dans les seuils mécaniques de la patte arrière et des viscères est une technique utile pour observer les changements dans la perception de la douleur chez les rongeurs. La réponse de sevrage peut être mesurée en premier dans les tests de base, ce qui crée un meilleur contrôle des groupes expérimentaux. Des tests ultérieurs peuvent être effectués après avoir induit l’infection et ajouté des médicaments au protocole. L’utilisation d’un appareil électronique de von Frey associé à l’utilisation d’une échelle faciale pour observer les changements semblables à la douleur permet une évaluation simple, précise et cohérente de l’allodynie et de la douleur chez la souris. Ainsi, les expériences utilisant la méthodologie actuelle pour l’infection à Trypanosoma evansi représentent une méthode utile pour évaluer l’allodynie et la douleur chez les animaux infectés en laboratoire, qui peut être appliquée au traitement conventionnel des animaux d’élevage.
Introduction
Trypanosoma evansi est l’agent étiologique de la maladie appelée « surra » ou « mal-das-cadeiras » en Amérique du Sud 1,2. Il affecte généralement les équidés et les bovins, mais aussi la faune sauvage, étant transmis par les chauves-souris hématophages, les tabanidés et les morsures de mouchesstomoxes 1,3. Surra est une maladie majeure chez les animaux domestiques, qui peut être mortelle en l’absence d’un traitement approprié, présentant des signes cliniques non spécifiques tels que l’anémie, la perte d’appétit et de poids, la faiblesse musculaire et l’avortement, qui peuvent varier selon l’hôte et la région géographique 2,4,5,6.
L’expression de l’allodynie et de la douleur chez les animaux infectés au cours de la maladie est encore un sujet nouveau 2,7. L’envie de comprendre la pathogenèse derrière ces signes est une étape importante pour améliorer et affiner le traitement actuellement utilisé en ajoutant des analgésiques efficaces au protocole trypanocide classique 5,6. Dans ce scénario, la possibilité de reproduire la maladie à l’aide d’un modèle murin représente un avantage, car les souris peuvent être facilement maintenues dans des environnements contrôlés en laboratoire et donnent donc des résultats plus cohérents que les expériences sur le terrain avec du bétail.
Un seuil mécanique est couramment obtenu à l’aide d’un appareil électronique de von Frey (EvF) pour l’évaluation de l’allodynie dans un grand nombre d’expériences 2,8,9. Cet appareil est utilisé pour évaluer la sensibilité des tissus à la stimulation mécanique : une fois que l’appareil touche la patte de l’animal, à travers une pointe de 20 à 200 μL fixée à l’appareil, la force avec laquelle l’animal retire la patte est enregistrée.
Les rongeurs sont généralement utilisés comme animaux standard dans ces expériences, et la plupart des résultats sont extrapolés à d’autres espèces, car la plupart des maladies étudiées proviennent d’autres espèces sur lesquelles il serait difficile de mener une étude contrôlée. De plus, l’allodynie et la douleur sont intimement liées. L’utilisation d’une échelle faciale spécifique pour évaluer la douleur chez les souris infectées joue un rôle important en tant qu’adjuvant de confirmation pour affirmer la présence de la douleur au cours de l’infection à T. evansi 2,10.
Dans ce protocole, nous démontrons un nouveau modèle pour évaluer l’allodynie et la douleur chez des souris infectées expérimentalement par T. evansi, montrant une forte corrélation entre les variables, s’avérant ainsi être un modèle solide. De plus, il faut un petit nombre de chercheurs pour effectuer l’ensemble de la procédure, ce qui réduit le risque d’interférence humaine pendant l’expérience. Il permet également à l’investigateur de reproduire la maladie cible au cours d’une phase aiguë et d’ajouter plusieurs médicaments de traitement différents dans la conception expérimentale, obtenant ainsi des résultats cohérents dans un court laps de temps.
Protocol
Representative Results
Discussion
Une étape critique dans les expériences impliquant des animaux infectés est le contrôle des niveaux de parasitémie. Différentes souches de T. evansi peuvent se comporter de manière divergente chez la souris, conduisant à des infections aiguës à des infections chroniques 2,4,5,6. De plus, les changements dans la dose d’infection peuvent diminuer ou prolonger la durée de sur…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs remercient tout particulièrement l’Université d’État de Santa Catarina pour son soutien financier, le Laboratoire de pharmacologie pour les animaux et l’espace, et le Laboratoire de biochimie des hémoparasites et des vecteurs pour l’échantillon de sang cryoconservé infecté par T. evansi utilisé dans ces expériences.
Materials
| 26 G 1/2" needle coupled to insulin syringe | TKL | 80288090100 | Used to infund solutions on laboratory animals |
| Accessories for von Frey analgesimeter | INSIGHT | EFF 303 | Containment box with support for digital analgesimeter assessment |
| D-(+)-Glucose | SIGMA-ALDRICH | G7021 | A monosaccharide which is the main source of energy in the form of ATP for living organisms |
| Digital analgesimeter | INSIGHT | von Frey Wi-Fi | The von Frey Wi-Fi is a portable device used to assess tissue sensitivity to mechanical stimuli |
| Gilson type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18261 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for hind paw allodynia assessment |
| Laboratory water bath | BEING INSTRUMENT | BW-22P | Used to heat liquid and semi-solid substances contained in appropriate recipients to specific temperature |
| Phosphate buffered saline | SIGMA-ALDRICH | 806552 | A balanced salt solution buffer used for a variety of cell culture applications |
| Swiss mice (Mus musculus) from both gender | UFSC | Swiss Webster | Laboratory animals used for controlled experiments |
| Trypanosoma evansi cryiopreserved sample | UDESC | – | Sample used to infect all mice, ceded by the Hemoparasites and Vectors Biochemistry Laboratory |
| Universal type 10 µL polypropylene tip | CRALPLAST | 18171 | Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for visceral allodynia assessment |
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