Summary
פרוטוקול זה מתאר את שיטות ההתערבות של Tuina במודל חולדה הנגרמת על ידי הזרקת נתרן מונויודואצטט של דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA), המספק התייחסות ליישום של Tuina במודלים של בעלי חיים KOA. פרוטוקול זה גם לומד את המנגנון היעיל של Tuina עבור KOA, והתוצאות יסייעו לקדם את יישומו.
Abstract
דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA), הפרעת מפרקים ניוונית נפוצה, מאופיינת בכאב כרוני ונכות, שיכולים להתקדם לנזק מבני בלתי הפיך של המפרק. מחקרים על הקשר בין סחוס מפרקי, שרירים, סינוביום, ורקמות אחרות סביב מפרק הברך ב- KOA הם בעלי חשיבות רבה. כיום, ניהול KOA כולל שינויים באורח החיים, פעילות גופנית, תרופות והתערבויות כירורגיות; עם זאת, הבהרת המנגנונים המורכבים העומדים בבסיס כאב הקשור ל- KOA עדיין חסרה. כתוצאה מכך, כאב KOA נותר אתגר קליני מרכזי ועדיפות טיפולית. טווינה נמצאה כבעלת השפעה רגולטורית על המערכת המוטורית, החיסונית והאנדוקרינית, מה שהוביל לחקירה האם טווינה יכולה להקל על תסמיני KOA, הנגרמים על ידי הגברת הרגולציה של גורמים דלקתיים, ויתרה מכך, אם הגורמים הדלקתיים בשרירי השלד יכולים להגביר את התקדמות KOA.
חילקנו באקראי 32 חולדות זכרים מסוג Sprague Dawley (SD) (180-220 גרם) לארבע קבוצות של שמונה בעלי חיים כל אחת: antiPD-L1+Tuina (קבוצה A), מודל (קבוצה B), Tuina (קבוצה C) וניתוחי דמה (קבוצה D). עבור קבוצות A, B ו-C, הזרקנו 25 מיקרוליטר של תמיסת נתרן מונויודואצטט (MIA) (4 מ"ג MIA מדולל ב-25 מיקרוליטר של תמיסת מלח סטרילית) לחלל מפרק הברך הימני, ובקבוצה D הוזרק אותו כמות של מלח פיזיולוגי סטרילי. כל הקבוצות הוערכו באמצעות הבדיקות הכי פחות מלחיצות ביותר (סף נסיגה מכני של כפה, חביון תרמי של נסיגת כפות, נפיחות במפרק הברך הימני, ציון Lequesne MG, טמפרטורת העור) לפני ההזרקה ו -2, 9 ו -16 ימים לאחר ההזרקה.
Introduction
דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA) היא דלקת מפרקים ניוונית נפוצה, המאופיינת בכאב כרוני ונכות, ו- KOA חמור יחסית יוביל לנזק מבני בלתי הפיך למפרק1. השכיחות העולמית הגבוהה של KOA הפכה לאתגר עולמי גדול בתחום בריאות הציבור 2,3, הפוגע קשות באיכות החיים של חולים 4,5. מחקרים הראו כי KOA משפיע על יותר מ -260 מיליון אנשים ברחבי העולם6. עם הזדקנות האוכלוסייה, שיעור השכיחות הכולל של KOA בסין הוא גבוה עד 17.0% מעל גיל 40, מה שמטיל נטל כבד על משפחותיהם של אלה שנפגעו 7,8.
על פי הרפואה הסינית, KOA שייך לקטגוריה של "שיתוק"9, והקלאסיקה של הקיסר הצהוב לרפואה פנימית מקשרת גידים, עצמות ובשר עם שיתוק. לכן, אנחנו צריכים לשים לב לקשר בין הסחוס, שריר, סינוביום, כמו גם רקמות אחרות סביב מפרק הברך ב KOA. ברפואה המודרנית, הן דלקת שרירים והן דלקת עצמות, שהם המרכיבים העיקריים של ההומאוסטזיס החיסוני של דלקת פרקים, מניעים את התקדמות כאבי KOA. עם זאת, מרבית המחקרים מתמקדים בדלקות סחוס ודלקות סינוביאליות במפרקי העצם, וקיים מיעוט מאמרים הבוחנים תופעות דלקתיות בשרירי השלד. לכן, יש צורך במחקר נוסף על תפקיד שרירי השלד בדלקת כדי להשיג הבנה מקיפה יותר של KOA ולספק רעיונות לשיטות טיפול יעילות יותר. בסקירת הספרות, מצאנו כי עיכוב של ליגנד המוות המתוכנת של גורם הקשור למערכת החיסון 1 (PD-L1) החמיר את ההתקדמות של KOA10,11 וכי היה ביטוי דיפרנציאלי של IL-15 ו- FOXO1 בשרירי השלד של חולים עם KOA12, כמו גם דלקת שרירי שלד משמעותית בחולים עם KOA סופני, אשר היה קשור גם עם שינויים בהליכה. הוכח כי שריר השלד יכול גם להפריש גורמים הקשורים קשר הדוק לחסינות דלקתית כגון IL-6, וכי TNF-α קשור קשר הדוק גם למסלול PD-L1 ו- KOA13,14,15.
נכון לעכשיו, טיפולים זמינים עבור KOA כוללים בקרת משקל, פעילות גופנית, תרופות, וניתוח, אשר בדרך כלל כוללים זריקות תוך מפרקיות, תרופות משככי כאבים, ניתוח ארתרוסקופי, אוסטאוטומיה periprosthetic של הברך16. נכון לעכשיו, לא ניתן לעצור או להפוך לחלוטין את התקדמות מחלת KOA, וללא הבנה ברורה של המנגנונים המורכבים העומדים בבסיס כאבי KOA, חולי KOA נמצאים בסיכון לשימוש יתר בתרופות משככות כאבים ולשכיחות גבוהה של תופעות לוואי8. רוב אסטרטגיות הטיפול יעילות רק לתקופות קצרות ומתמקדות רק בהקלה זמנית של הסימפטומים ולא בפתוגנזה של המחלה. לכן, כאב KOA נשאר בראש סדר העדיפויות ואתגר לטיפול, ומציב אתגר קליני רציני. עם זאת, Tuina יכול ישירות לעורר את שרירי השלד סביב המפרק הפגוע בטיפול KOA והוא יכול לספק כמה יתרונות. בשילוב עם התיאור הקודם, זהו הטיפול האידיאלי ללמוד את תפקידה של רקמת שריר השלד ב- KOA, והבהרת תפקידה של רקמת שריר השלד בדלקת יכולה גם לספק תמיכה תיאורטית טובה יותר לטוינה של KOA.
מחקרים הראו כי טיפול בעיסוי, טיפול מניפולטיבי אוסטאופתי ומניפולציה בעמוד השדרה יכולים לעזור להקל על הכאב ולהחזיר את תפקוד הגוף17,18. מניפולציות אלה יכולות לפעול על דלקת מקומית ולהקל על עוויתות ושיכוך כאבים באמצעות פעולה מכנית חיצונית. הם יכולים להקל על הכאב לאחר ארתרופלסטיקה מלאה של הברך, להפחית את השימוש בתרופות משככי כאבים, לקדם התאוששות לאחר הניתוח, ולשפר את האיזון הביומכני19. עיסוי שוודי אפשרי בטיפול בדלקת מפרקים ניוונית ויכול להפחית מתח ולשפר את איכות החיים20. להשפעה הטיפולית של טווינה על KOA קדמו מחקרים מסוימים.
בניסוי זה, הצוות שלנו יחקור אם הביטוי של PD-L1 וגורמים דלקתיים קשורים בשרירי השלד יכול לגרום ל-KOA ויקדם את פיתוחו בהתבסס על מודל KOA המושרה על ידי MIA בחולדות. Tuina ייושם גם כדי לראות אם זה יכול להקל על תסמיני KOA הנגרמים על ידי ביטוי מוגבר של גורמים דלקתיים. Tuina ישולב עם עיכוב PD-L1 כדי להדגים את הקשר בין מסלול PD-1 בתיווך Tuina בדלקת שרירי השלד המשפיעה על התפתחות KOA וכאב, ותניח את הבסיס למחקרים רב-שכבתיים נוספים על המנגנונים הטיפוליים של התערבות Tuina ב- KOA.
לסיכום, מאמר זה מתאר את החקירה וההרחבה של מנגנוני דלקת שרירי השלד בהתפתחות KOA והכאב שלה, כמו גם את ההשפעות הטיפוליות של Tuina על KOA, מנקודת מבט של ביטוי גורמים דלקתיים חיסוניים, בשילוב עם אינדיקטורים הקשורים להתנהגות, כדי לספק ראיות מחקריות מודרניות לתיאוריית "חוסר האיזון של גידים ועצמות" ברפואה הסינית המסורתית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל הניסויים אושרו ופוקחו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית (מספר אישור: SYXK2018-0040), התואמת את התנאים בהצהרת הלסינקי של ההסתדרות הרפואית העולמית.
1. הכנת בעלי חיים
- בית 32 Sprague Dawley (SD) חולדות זכרים בני 8 שבועות ובמשקל 180-220 גרם במכשיר דיור ספציפי ללא פתוגנים תחת 12 שעות אור/12 שעות מחזורים כהים ב 24 ± 2 ° C ו 60% לחות עם דיאטה סטנדרטית כדורי מכרסמים. כל פעולות הניסוי בבעלי חיים עומדות באתיקה של רווחת חיות ניסוי ובתקנות בטיחות ניסויים בבעלי חיים.
- חילקו חולדות באופן אקראי לכלוב לארבע קבוצות של שמונה בעלי חיים כל אחת לאחר שבוע אחד של האכלה אדפטיבית: antiPD-L1+Tuina (קבוצה A), מודל (קבוצה B), Tuina (קבוצה C) וניתוח דמה (קבוצה D).
2. הזרקה תוך מפרקית של מונוסודיום יודואצטט (MIA) בברך
הערה: למעט קבוצה D, מודל חולדת KOA יוכן על ידי הזרקת חלל מפרק הברך של MIA בכל הקבוצות. עבור קבוצה D, יש להזריק 25 μL של מלח פיזיולוגי סטרילי לחלל מפרק הברך הימני.
- הרדימו את החולדה על ידי הכנסתה לכלוב הרדמה ולאחר מכן החדרת 2.5% איזופלורן עד להרדמה מלאה. ודאו שהחיה מורדמת לחלוטין על ידי המתנה לנקודה שבה החולדה הצעירה שוכבת על גבה, גפיה מפסיקות לזוז, ואין תגובה בצביטה בבוהן (רפלקס פדלים), רפלקס מישוש והרפיית שרירים.
- הוסיפו משחת עיניים לחיות מחמד וטיפות עיניים לחולדות הצעירות המורדמות כדי למנוע יובש בעיניים.
- לגלח את הגפה האחורית הימנית של החולדות ולחטא את מפרק הברך עם שלושה סיבובים לסירוגין של יודופור ו 75% אתנול.
- כדי לשמור על מצב ניסוי סטנדרטי, קבע בזהירות את כיפוף הברך בזווית מדויקת של 90°, וודא שהרצועה הפטלרית מכוונת כלפי מעלה. לאחר מכן, להזריק 25 μL של תמיסת MIA, המורכבת מ 4 מ"ג של MIA מדולל ב 25 μL של תמיסת מלח סטרילית לתוך חלל מפרק הברך הימני של החולדות.
הערה: הזרקה זו בוצעה עם מיקרו-מזרק מיוחד, המבטיח דיוק ועקביות בהליך21,22,23. החזירו את החולדות לכלובים עד שיתעוררו. בעל החיים שעבר ניתוח אינו מוחזר לחברתם של בעלי חיים אחרים עד להחלמה מלאה. - בסוף המחקר, הרדימו את החולדות על ידי הזרקת 1% נתרן pentobarbital כמינון של 100 מ"ג / ק"ג.
3. יישום טווינא
הערה: היישום של Tuina יונחה על ידי התיאוריה כי "עבור חולים עם חוסר איזון גידים ועצמות, גידים צריכים להיות מטופלים הראשון". שתי הקבוצות A ו-B החלו את ההתערבות ביום הראשון לאחר ההערכה המוצלחת של המודל, ושתי הקבוצות נותחו פעם ביום במשך 14 יום. שתי הקבוצות הנותרות נצפו במשך 14 יום בלבד ללא כל התערבות. מפעילי המניפולציה חייבים להיות מאומנים בקפידה לפני הניסוי כדי להבטיח את עקביות הכוח, התדר והקצב.
- אתר במדויק את נקודת הדיקור של החולדות, כולל EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 ו-GB34 (איור 1 וטבלה 1), שבה שיטות לישת אצבעות יבוצעו באמצעות דיקור ניסיוני24.
- תקן את החולדה במצב נוטה על ציוד קיבוע חולדה.
- לאחר שקט והגפיים התחתונות רגועות, לשו את EX-LE4 ו- ST35 של הגפה הפגועה עם האגודל והאצבע המורה בו זמנית למשך 4 דקות במהירות 120-140 פעמים לדקה.
- יש ללוש את השרירים הקדמיים והמדיאליים-צדדיים של הגפה הפגועה עם האגודל והאצבע המורה למשך 3 דקות במהירות של 120-140 פעמים לדקה, תוך התמקדות ב-SP10, ST34 ובשרירים הסמוכים למפרק הברך. הדגישו את המניפולציה של אותם שרירים נוקשים בעוצמה, כך שהחולדה לא תיאבק.
- ללוש את שרירי השוק האחוריים של הגפה הפגועה מלמעלה למטה במשך 3 דקות במהירות 120-140 פעמים לדקה באמצעות האגודל, האצבע המורה והאצבע האמצעית. כדי לחשוף באופן מלא את אזור הטיפול, השתמש באצבע הקמיצה ובאצבע הקטנה כדי להחזיק את מפרק הקרסול של הגפה הפגועה ולמשוך בעדינות את האיבר הפגוע. התמקדו ב-SP9, GB34 ובשרירים הסמוכים למפרק הברך עם דגש על השרירים הנוקשים והעוצמה כדי שהחולדה לא תתקשה.
4. מדידת מדד התנהגותי
- מדידת סף כאב מכני פלנטרי
הערה: יש למדוד את ספי הכאב המכניים של הכפית יום אחד לפני הזרקת MIA וכן 2, 9 ו-16 ימים לאחר ההזרקה.- הביאו את החולדות לחדר בדיקה פלנטרי עם תחתית רשת מנירוסטה וגוף כלוב פלסטיק בסביבה שקטה בטמפרטורת החדר (22 ± 2) מעלות צלזיוס למשך 30 דקות של הסתגלות.
- השתמש בבודק כאב מכני אלקטרוני עם מחט בדיקה פלסטית בקוטר 0.8 מ"מ כדי לגרות את האזור המרכזי של כף הרגל האחורית הימנית של החולדות בצורה אנכית. מגבירים באופן שווה והדרגתי את עוצמת הגירוי עד שהחולדות מראות תגובות של נסיגת כפות והימנעות.
- הקלט את קריאת המסך האלקטרוני כסף הכאב המכני של כף הרגל הפלנטרית הימנית של החולדה.
- מדדו כל חולדה פי 5 במרווחים של 5 דקות.
- הסר את ערכי המקסימום והמינימום מחמשת הערכים. קח את הערך הממוצע של שלושת הערכים האמצעיים בשיטת הממוצע החתוך כתוצאה (טבלה 2).
- מדידת סף משיכה מכני של כפות הרגליים
הערה: יש למדוד את סף המשיכה המכנית של כפות הרגליים יום אחד לפני הזרקת MIA, 2, 9 ו-16 ימים לאחר ההזרקה.- הביאו את החולדות לחדר בדיקה פלנטרי מחומם עם תחתית זכוכית בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס וגוף כלוב פלסטיק בסביבה שקטה בטמפרטורת החדר (22 ± 2) מעלות צלזיוס למשך 30 דקות של הסתגלות.
- עוררו את אזור מרכז הפלנטר האחורי הימני באמצעות מכשיר חימום מקור אור בטמפרטורת גירוי של 65 מעלות צלזיוס עד שהחולדה מראה תגובת נסיגה והימנעות מכפה.
- הקלט את קריאת הזמן של המסך האלקטרוני כסף הכאב התרמי הפלנטרי הנכון של החולדה.
- מדדו כל חולדה פי 5 ברציפות במרווחים של 5 דקות.
- הסר את ערכי המקסימום והמינימום מחמשת הערכים. קח את הערך הממוצע של שלושת הערכים האמצעיים בשיטת הממוצע החתוך כתוצאה (טבלה 3).
5. מדידת נפיחות במפרק ברך ימין
הערה: מדדו את הנפיחות של מפרק הברך הימני של חולדות יום אחד לפני הזרקת MIA, 2, 9 ו-16 ימים לאחר ההזרקה.
- מרדימים את החולדה על ידי הכנסתה לכלוב הרדמה וחשיפתה לאיזופלורן 2.5% עד להרדמה מלאה.
- הניחו את החולדה במצב שטוח על שולחן הניתוחים.
- מדדו את רוחב מפרק ברך ימין בעזרת קליפרים של ורנייה (איור 2 וטבלה 4).
6. מדידת ציון Lequesne MG
הערה: מדדו את ציון Lequesne MG בחולדות ב-2, 9 ו-16 ימים לאחר הזרקת MIA. Lequesne et al פיתחו מדד של חומרה עבור osteoarthritis עבור הירך (ISH), אשר ניתן להשתמש בו כדי להעריך את היעילות של התערבויות טיפוליות. אנו לוקחים בחשבון ארבעה פרמטרים: גירוי כאב, שינוי הליכה, תנועתיות מפרקים ונפיחות במפרקים.
- הביאו את החולדות לפלטפורמת מניפולציה בסביבה שקטה בטמפרטורת החדר (22 ± 2) מעלות צלזיוס.
- בקשו משני מפעילים, עיוורים זה לזה, למדוד את תגובת גירוי הכאב המקומי, שינוי ההליכה, תנועת המפרקים ונפיחות המפרקים.
- לגרות את הצד הצידי של מפרק ברך ימין עם מחט בדיקה פלסטית ולקבל ציון בסולם של 0-3 בהתאם לתגובה. 0 אין תגובה; 3 תגובה טובה; 1 התכווצות של האיבר הפגוע; 2 התכווצות ועווית של האיבר הפגוע, מלווה בתגובות כלליות קלות, כגון רעד, ליקוק ומציצה.
- הניחו את החולדה על שולחן הניתוחים והתבוננו בהליכה של גפיה האחוריות הימניות. ציון בסולם של 0-3 בהתאם לתגובה. 0 אין הפרעה בתנועת הגפה הפגועה, ריצה רגילה ועבודת רגליים חזקה; 3 האיבר הפגוע אינו יכול להשתתף בהליכה, לגעת בקרקע או לדרוך על הקרקע; 1 טרקים קלים במהלך ריצה עם דריכות חזקות; 2 האיבר הפגוע משתתף בהליכה, אך ההפרעה בתנועה של החולדות (טרקים) ברורה.
- כופפו והרחיבו את מפרק הברך הימני של החולדה ביד והתבוננו בניידות המפרק. ציון בסולם של 0-3 בהתאם לתגובה. 0 זווית ניידות משותפת של יותר מ-90°; 3 זווית ניידות משותפת של פחות מ-15°; זווית ניידות משותפת אחת או 45°-90°; 2 זווית תנועתיות מפרקים של 15°-45°.
- געו במפרק הברך הימני של החולדה והשוו את התגובה לזו של חולדה רגילה. ציון בסולם של 0-2 בהתאם לתגובה. 0 אין נפיחות ברורה וסימנים גרמיים גלויים; 2 נפיחות מסומנת וללא סימנים גרמיים; 1 נפיחות קלה וסימנים גרמיים שטחיים.
- הוסף ציונים אלה כדי להפיק את ציון Lequesne MG עבור כל חולדה וחשב את הערך הממוצע באמצעות שיטת החיתוך (טבלה 5).
7. מדידת טמפרטורת העור
הערה: יש למדוד את טמפרטורת העור יום אחד לפני הזרקת MIA ו-9 ו-16 ימים לאחר ההזרקה.
- מרדימים את החולדה על ידי הכנסתה לכלוב הרדמה ולאחר מכן החדרת איזופלורן עד שהיא מורדמת במלואה.
- הניחו את החולדה במצב רוחבי על שולחן הניתוחים, בטמפרטורת החדר (22 ± 2) מעלות צלזיוס.
- יישרו את מפרק ברך ימין על ידי אחיזה עדינה בכף הרגל עם היד. צלם כדי לקבוע את טמפרטורת העור באמצעות מצלמת אינפרא אדום Filr.
- קרא את טמפרטורת העור של מפרק הברך וסביב מפרק הברך של החולדה באמצעות תוכנת עריכה תומכת. הגדר נקודות בקרה במפרק הקרסול ובמפרק הברך שבהן הטמפרטורה יורדת בהדרגה.
8. ניתוח סטטיסטי
- השתמש בתוכנה סטטיסטית כדי לבטא את נתוני הניסוי ברביעונים.
- השתמש בשיטת ממוצע החיתוך כדי להתמודד עם החריגים. התוצאות של מבחנים התנהגותיים מצוינות כממוצע ± טעות התקן של הממוצע.
- ביצוע בדיקות t של דגימות בלתי תלויות להשוואה בין קבוצות. נתח את הנתונים ההתנהגותיים באמצעות ניתוח דו-כיווני חוזר של שונות (ANOVA), ואחריו מבחני השוואה מרובים של Bonferroni. כאשר הנתונים אינם מפגינים נורמליות או הומוסדסטיות, בצע בדיקה לא פרמטרית (Kruskal-Wallis k samples).
הערה: P < 0.05 מציין שההבדלים מובהקים סטטיסטית. כל הנתונים עומדים בהנחות היסוד של המבחנים הסטטיסטיים המיושמים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
הפרוטוקול המתואר יושם במסגרת קלינית בבית החולים Yueyang לרפואה סינית מסורתית ומערבית משולבת. איור 1 מראה את המיקום המדויק של נקודות הדיקור שנדחפו בחולדות, וטבלה 1 מדגימה את היתרונות המשותפים של גירוי הנקודות האלה. טבלה 2 וטבלה 3 מציעות ראיות משכנעות להקלה ניכרת בכאב המושגת באמצעות טיפול בטווינה, אפילו בהיעדר עיכוב מסלול PD-1. הממצאים המוצגים בטבלה 4, טבלה 5 ואיור 2 ממחישים גם את הקשר בין יישום Tuina לבין התקדמות של דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA), מה שמרמז על כך שטיפול ידני יכול לשמש כגישה משלימה לשיפור ניהול תסמיני KOA בחולדות. הזרקנו לכל חולדה בקבוצת הטיפול הידני Anti-PD-L1 (MTA) מינון של 200 מיקרוגרם של אנטי-PD-L1 כדי לחסום את המסלול לאחר 3 ימים מהשראת דלקת מפרקים ניוונית של MIA. לאחר מכן, החולדות היו נתונות לטיפול ידני בנקודות הדיקור של החולדות, כולל EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 ו-GB34, כל יומיים במשך שבועיים, תוך שימוש בשיטות לישה באצבע לאחר 3 ימים לאחר השראת דלקת מפרקים ניוונית.
איור 1: תרשים הנקודות בחולדות. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: דרגות שונות של נפיחות בברכיים אצל חולדות. הנפיחות יכולה להיות נשלטת באמצעות יישום של Tuina. לפני חסימת מסלול PD-L1 נמדדו קוטר מפרק ברך ימין (הברך שהוזרקה עם MIA) (ב-19בינואר) ונמדדו שוב לאחר שבוע. ההשפעות של טווינה על שליטה בנפיחות הברך הופכות חסרות משמעות לאחר חסימת PD-L1. מייצגים את P < 0.0001, ** מייצגים את P < 0.01, * מייצגים את P < 0.05). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
| נקודות דיקור | פונקציות |
| EX-LE4 | להקל על נפיחות וכאב בברכיים |
| ST35 | הקלה על דיספלקסיה במפרקים |
| SP10 | הקלה על כאבי עצם הירך המדיאלית |
| ST34 | התערבות בשיתוק מפרקים |
| SP9 | להקל על כאבי ברכיים |
| GB34 | להקל על שיתוק הגפיים התחתונות |
טבלה 1: ההשפעה של גירוי נקודות אלה.
| בסיסית | שבוע 1 | שבועיים | |
| בית א' | 58.01 | 29.61 | 27.9 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| בית ב' | 31.76 | 25 | 23.52 |
| (דגם) | |||
| בית ג' | 34.15 | 32.45 | 37.53 |
| (תל אביב) | |||
| בית ד' | 40.26 | 43.93 | 51.3 |
| (ניתוח בושה) |
טבלה 2: השוואה של ספי כאב מכניים בין קבוצות בתחילת המחקר (יום חסימת PD-L1), שבוע ושבועיים לאחר זירוז מוצלח. הנתונים בטבלה הם הערכים הממוצעים של כל קבוצה שנמדדה באותו יום. ערך P בין כל שתי קבוצות הוא <0.05 למעט ערך P בין קבוצות A ו- B.
| בסיסית | שבוע 1 | שבועיים | |
| בית א' | 9.67 | 6.72 | 7.82 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| בית ב' | 7.5 | 7.25 | 6.39 |
| (דגם) | |||
| בית ג' | 11.67 | 8.63 | 9.26 |
| (תל אביב) | |||
| בית ד' | 12.8 | 10.8 | 10.14 |
| (ניתוח בושה) |
טבלה 3: השוואה בין ספי הכאב התרמי בין קבוצות בתחילת המחקר, שבוע ושבועיים לאחר זירוז מוצלח. הנתונים בטבלה הם הערכים הממוצעים של כל קבוצה שנמדדה באותו יום. ערך P בין כל שתי קבוצות הוא <0.05 למעט ערך P בין קבוצות A ו- B.
| בסיסית | שבוע 1 | שבועיים | |
| בית א' | 10.96 | 11.68 | 10.56 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| בית ב' | 11.3 | 12.18 | 11.79 |
| (דגם) | |||
| בית ג' | 11.75 | 10.88 | 10.35 |
| (תל אביב) | |||
| בית ד' | 10.8 | 11.23 | 10.49 |
| (ניתוח בושה) |
טבלה 4: השוואה של נפיחות אוסטיאוארתריטיס בברך בין קבוצות בתחילת המחקר, שבוע ושבועיים לאחר זירוז מוצלח. הנתונים בטבלה הם הערכים הממוצעים של כל קבוצה שנמדדה באותו יום. ערך P בין כל שתי קבוצות הוא <0.05 למעט ערך P בין קבוצות A ו- B)
| בסיסית | שבוע 1 | שבועיים | |
| בית א' | 3.13 | 4.25 | 3.88 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| בית ב' | 2.63 | 4.5 | 4.75 |
| (דגם) | |||
| בית ג' | 2.75 | 1.88 | 2.25 |
| (תל אביב) | |||
| בית ד' | 0 | 0 | 0 |
| (ניתוח בושה) |
טבלה 5: השוואה של מדד Lequesne MG בין קבוצות בנקודת ההתחלה, שבוע אחד ושבועיים לאחר זירוז מוצלח. הנתונים בטבלה הם הערכים הממוצעים של כל קבוצה שנמדדה באותו יום. ערך P בין כל שתי קבוצות הוא <0.05 למעט ערך P בין קבוצות A ו- B.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מחקר זה נועד להעריך את השיפור של KOA לאחר התערבות Tuina באמצעות אינדיקטורים התנהגותיים סטנדרטיים ולחקור את המנגנונים של Tuina עבור KOA ואת הקשר בין שרירי השלד ו- KOA. שלא כמו טיפולים תרופתיים וכירורגיים, לטוינה יש השפעה רגולטורית חיובית על המערכת המוטורית, החיסונית והאנדוקרינית. Tuina יכול להקל על דלקת וכאב המיוצר על ידי מחלה על ידי פעולה על מטרות שונות. לדוגמה, על ידי ויסות מסלול TLR4 ו- miRNA, הוא יכול לעכב את ההפעלה של תאי גלייה, לווסת את תפקוד המוח שהשתנה, לווסת ציטוקינים דלקתיים במורד הזרם, ולדכא דלקת היקפית25,26,27. יחד עם זאת, טווינה יכולה גם להתערב במערכת העצבים האוטונומית ובציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-יותרת הכליה שאינם מתפקדים בהפרעות כאב כרוניות, ובכך לסייע בשיקום הומאוסטזיס של מערכת העצבים האוטונומית ולעורר תגובה אימונואנדוקרינית, שיכולה להקל על הכאב על ידי ויסות תהליכים אנדוקריניים ופיזיולוגיים28,29,30. בנוסף, כאשר טווינה מגרה חיצונית את השרירים, עירור פאראסימפתטי 31, ולחץ חוץ-כלי במבחנה גורמים להתכווצות שרירי השלד ולהרחבת כלי הדם, מה שתורם לתגובת הגודש ומקדם חילוף חומרים32,33. לכן, כטיפול לא תרופתי ולא כירורגי, טווינה הוא טיפול מבטיח להקלה על KOA.
סקרנו גם את הספרות על ההשפעות הטיפוליות של פעילות אירובית, רפואה סינית מסורתית (TCM) ודיקור אלקטרואקופונקטורי על מודל KOA המושרה על ידי מונוסודיום יודואצטט (MIA). פעילות אירובית יכולה לעכב אפופטוזיס כונדרוציטים על ידי ויסות הביטוי של TRPV5, והשילוב של פעילות אירובית וכמוסות גלוקוזאמין הידרוכלוריד עשוי להיות יעיל עוד יותר34,35. תרכובות מטוהרות מצמחי מרפא סיניים, כגון קסטיצין וחומצה ונילית, יכולות להפחית דלקת מפרקים ניוונית בברכיים והתנהגות/מתווך in vivo הקשורים לכאב. תרכובות מטוהרות מצמחי מרפא סיניים, כגון קסטיצין וחומצה ונילית36, יכולות להפחית דלקת סינוביאלית KOA והתנהגות/מתווך הקשורים לכאב בדלקת מפרקים ניוונית בברך. בנוסף, חומצה ונילית יכולה להגן על מפרקי הברכיים על ידי עיכוב הפעלה דלקתית NLRP337. יתר על כן, אלקטרואקופונקטורה הוכחה כמעכבת את דלקת NLRP3 ומפחיתה פירופטוזיס, מה שמוביל לשימור רקמת הסחוס ולטיפול ב- KOA38.
שלא כמו TCM, טווינה דורשת צורות שונות של תנועה לטיפול קליני, המשלבות טכניקות מרובות ותנועה פסיבית של המטופל, אשר לעתים קרובות מהווה בעיה עבור מתרגלים חדשים בבחירת הטכניקה המתאימה, אתר הפעולה וכוח הפעולה. בנוסף, הערכת היעילות לאחר הטיפול היא אתגר מרכזי בטיפול מניפולטיבי, שכן היא הוגבלה בעיקר לתיאורים סובייקטיביים של מטופלים, ללא נתונים אובייקטיביים להערכת שיטות ופרקטיקות. לכן, ביקשנו לחקור את המנגנונים של דלקת בשרירי השלד בהתפתחות KOA וכאב ולבחון את ההשפעות הטיפוליות של Tuina על KOA בהתבסס על מודל חולדה של KOA, המושרה עם MIA, בשילוב עם אינדיקטורים התנהגותיים וגורמים דלקתיים. יחד עם זאת, מכיוון שטווינה מונחה על ידי התיאוריה כי "עבור חולים עם חוסר איזון בגידים ובעצמות, יש לטפל בגידים תחילה", רשימת נקודות הדיקור של חולדות בדיקור ניסיוני תשמש לאיתור מדויק של EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 ו- GB34 כדי ליישם שיטות שפשוף לישה באצבעות. לכן, המפעילים המבצעים את המניפולציה צריכים להיות מאומנים בקפידה לפני יישום ההתערבות כדי להבטיח את עקביות הכוח, התדר והקצב.
טבלה 2 וטבלה 3 מספקות ראיות לכך שהכאב הוקל באופן משמעותי על ידי הטוינה ללא חסימת מסלול PD-1. התוצאות בטבלה 4, טבלה 5 ואיור 2 מדגימות עוד יותר את הקשר בין יישום Tuina לבין התקדמות KOA, ומצביעות על כך שטיפול ידני יכול להיות טיפול משלים עבור KOA כדי לשפר את תסמיני KOA של החולדות. לכן, טיפול עם Tuina עשוי להיות התערבות יעילה כדי להילחם בהתקדמות של KOA; עם זאת, נדרשים מחקרים מעמיקים יותר כדי להבהיר את המנגנון שלה.
יתר על כן, ישנן כמה מגבלות לפרוטוקול ניסיוני זה. ראשית, מכיוון שיש חולדות פעילות יתר או שקטות יתר על המידה וייתכן שיש טעות כלשהי במדידת כאב מכני, כל מדידה צריכה להיות מתוזמנת עם מרווחים קבועים בין כל מדידה. שנית, תכנון ניסויי זה נועד לחקור את מודל חולדות KOA המושרה על ידי MIA, ויש צורך במחקר נוסף כדי להמחיש את ההשפעות הטיפוליות הקליניות של Tuina. עם זאת, הצוות שלנו התמקד בהשפעה של KOA על שרירי השלד, שיפור השריר וה- KOA על ידי Tuina, והקשר עם מסלול PD-1, במטרה לחקור את מנגנון ההתערבות של Tuina ב- KOA. בעתיד, נשאף לקדם את ההיתכנות, הבטיחות והיעילות של טיפול מניפולציה ולערוך מחקר נוסף על היעילות הקלינית של Tuina על שרירי השלד. תוך כדי לימוד הקשר בין גידים ועצמות, הפתוגנזה של KOA ומנגנוני ההתערבות הטיפולית במניפולציה, אנו מקווים גם ליישם את ממצאי המחקר והרעיונות שלנו על מחלות אחרות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים.
Acknowledgments
מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NO.82105042, 82205302); תוכנית שנחאי למצוינות פוסט-דוקטורט (NO.2020371); הקרן למדע פוסט-דוקטורט בסין (NO.2021M692156); תוכנית השיט בשנגחאי (NO.20YF1450900); הקרן המדעית של בית החולים Yueyang של רפואה סינית מסורתית ומערבית משולבת (NO.2021yygq03). למממנים לא היה כל תפקיד בתכנון, בביצוע או בכתיבה של המחקר.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-PD-L1 | Abcam, Cambridge, MA, USA | ab80276 | |
| electric von Frey esthesiometer | IITC/Life Science, Woodland Hills, CA, USA | ALMEMO 2450 | |
| GraphPad Prism 9.0 | GraphPad Software | Software for stastistical analysis | |
| monosodium iodoacetate | Sigma-Aldrich Inc | I9148 | Resolved into normal saline for injection |
| pentasorbital sodium | Sigma-Aldrich Inc | P3761 | |
| Sprague Dawley (SD) male rats | Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd | No. SCXK (Hu) 2017-0012 | |
| thermal analgesia tester | IITC/Life Science | Model 390 |
References
- Katz, J. N., et al. Diagnosis and treatment of hip and knee osteoarthritis: A review. JAMA. 325 (6), 568-578 (2021).
- Culvenor, A. G., et al. Prevalence of knee osteoarthritis features on magnetic resonance imaging in asymptomatic uninjured adults: a systematic review and meta-analysis. Br J Sports Med. 53 (20), 1268-1278 (2019).
- Safiri, S., et al. regional and national burden of osteoarthritis 1990-2017: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2017. Ann Rheum Dis. 79 (6), 819-828 (2020).
- Kong, L., et al. Traditional Chinese exercises on pain and disability in middle-aged and elderly patients with neck pain: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Front Aging Neurosci. 14, 912-945 (2022).
- Nevitt, M. C., et al. Symptoms of knee instability as risk factors for recurrent falls. Arthritis Care Res (Hoboken). 68 (8), 1089-1097 (2016).
- Hunter, D. J., March, L., Chew, M. Osteoarthritis in 2020 and beyond: a Lancet Commission). Lancet. 396 (10264), 1711-1712 (2020).
- Fan, Z. J., et al. Interpretation and evaluation of the Chinese Osteoarthritis Treatment Guidelines (2021 Edition). Chinese Journal of Evidence-Based Medicine. 22 (06), 621-627 (2022).
- Chen, W., et al. Design of an epidemiological survey on the prevalence of osteoarthritis of the knee in a middle-aged and elderly population in China. Journal of Hebei Medical University. 36 (04), 487-490 (2015).
- Shao, S. Study on the mechanism of regulating the "balance of tendon and bone force" in the treatment of knee osteoarthritis by Tui Na manipulation. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. , 107-108 (2020).
- Liu, S. Role and mechanism of PD-1/PD-L1 pathway in osteoarthritis in mice. Shandong University. , 130-134 (2020).
- Shoujian, PD-1 promotes the repair and regeneration of contused skeletal muscle by regulating Treg cells and macrophages. Shanghai Institute of Physical Education. , 54-58 (2020).
- Levinger, P., et al. The level of FoxO1 and IL-15 in skeletal muscle, serum and synovial fluid in people with knee osteoarthritis: a case control study. Osteoporos Int. 27 (6), 2137-2143 (2016).
- Niu, Q., Xie, C., Jiang, Z. Advances in Chinese medicine based on PI3K/AKT signaling pathway for the treatment of knee osteoarthritis. Massage and Rehabilitation Medicine. , 1-5 (2022).
- Liu, S., et al. Blocking of checkpoint receptor PD-L1 aggravates osteoarthritis in macrophage-dependent manner in the mice model. Int J Immunopathol Pharmacol. 33, 2058-2073 (2019).
- Molanouri, S. M., et al. Combined effect of aerobic interval training and selenium nanoparticles on expression of IL-15 and IL-10/TNF-alpha ratio in skeletal muscle of 4T1 breast cancer mice with cachexia. Cytokine. 90, 100-108 (2017).
- Mahmoudian, A., et al. Early-stage symptomatic osteoarthritis of the knee - time for action. Nat Rev Rheumatol. 17 (10), 621-632 (2021).
- Nahin, R. L., et al. Evidence-based evaluation of complementary health approaches for pain management in the United States. Mayo Clin Proc. 91 (9), 1292-1306 (2016).
- Bervoets, D. C., et al. Massage therapy has short-term benefits for people with common musculoskeletal disorders compared to no treatment: a systematic review. J Physiother. 61 (3), 106-116 (2015).
- Xu, H., et al. Effectiveness of tui na in treating pain after total knee replacement for knee osteoarthritis. Chinese Tissue Engineering Research. 25 (18), 2840-2845 (2021).
- Ali, A., et al. Massage therapy and quality of life in osteoarthritis of the knee: a qualitative study. Pain Med. 18 (6), 1168-1175 (2017).
- Yoh, S., et al. Intra-articular injection of monoiodoacetate induces diverse hip osteoarthritis in rats, depending on its dose. BMC Musculoskelet Disord. 23 (1), 494-487 (2022).
- Lockwood, S. M., et al. Characterisation of peripheral and central components of the rat monoiodoacetate model of osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 27 (4), 712-722 (2019).
- McCoy, A. M. Animal models of osteoarthritis: Comparisons and key considerations. Vet Pathol. 52 (5), 803-818 (2015).
- Guo, X. Exploring the effect of pushing on cartilage in rats with knee osteoarthritis based on ROCK/LIMK1/Cofilin signaling pathway. Chongqing Medical University. , 42-44 (2022).
- Liu, Z. F., et al. Tuina for peripherally-induced neuropathic pain: A review of analgesic mechanism. Front Neurosci. 16, 1096-1104 (2022).
- Gebremariam, L., et al. Subacromial impingement syndrome--effectiveness of physiotherapy and manual therapy. Br J Sports Med. 48 (16), 1202-1208 (2014).
- Yao, C., et al. Transcriptome profiling of microRNAs reveals potential mechanisms of manual therapy alleviating neuropathic pain through microRNA-547-3p-mediated Map4k4/NF-kappab signaling pathway. J Neuroinflammation. 19 (1), 211-221 (2022).
- Valera-Calero, A., et al. Endocrine response after cervical manipulation and mobilization in people with chronic mechanical neck pain: a randomized controlled trial. Eur J Phys Rehabil Med. 55 (6), 792-805 (2019).
- Kovanur, S. K., et al. Measureable changes in the neuro-endocrinal mechanism following spinal manipulation. Med Hypotheses. 85 (6), 819-824 (2015).
- Colombi, A., Testa, M. The effects induced by spinal manipulative therapy on the immune and endocrine systems. Medicina (Kaunas). 55 (8), 312-314 (2019).
- Afify, A., Mark, H. F. Fluorescence in situ hybridization assessment of chromosome 8 copy number in stage I and stage II infiltrating ductal carcinoma of the breast. Cancer Genet Cytogenet. 97 (2), 101-105 (1997).
- Kirby, B. S., et al. Mechanical influences on skeletal muscle vascular tone in humans: insight into contraction-induced rapid vasodilatation. J Physiol. 583, 861-874 (2007).
- Sefton, J. M., et al. Therapeutic massage of the neck and shoulders produces changes in peripheral blood flow when assessed with dynamic infrared thermography. J Altern Complement Med. 16 (7), 723-732 (2010).
- Chen, B., et al. Aerobic exercise combined with glucosamine hydrochloride capsules inhibited the apoptosis of chondrocytes in rabbit knee osteoarthritis by affecting TRPV5 expression. Gene. 830, 146465 (2022).
- Fang, L., et al. The mechanism of aerobic exercise combined with glucosamine therapy and circUNK in improving knee osteoarthritis in rabbits. Life Sci. 275, 119375 (2021).
- Li, X., et al. Casticin suppresses monoiodoacetic acid-induced knee osteoarthritis through inhibiting HIF-1alpha/NLRP3 inflammasome signaling. Int Immunopharmacol. 86, 106745 (2020).
- Ma, Z., et al. Vanillic acid reduces pain-related behavior in knee osteoarthritis rats Through the inhibition of NLRP3 inflammasome-related synovitis. Front Pharmacol. 11, 599022 (2020).
- Zhang, W., et al. Electroacupuncture ameliorates knee osteoarthritis in rats via inhibiting NLRP3 inflammasome and reducing pyroptosis. Mol Pain. 19, 17448069221147792 (2023).
