Questo protocollo descrive il modello di ischemia cerebrale focale transitoria nei topi attraverso l'occlusione intraluminale dell'arteria cerebrale media. Inoltre, vengono mostrati esempi di valutazione dei risultati utilizzando la risonanza magnetica per immagini e test comportamentali.
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Articolo metodologico
Modello transitorio di occlusione dell'arteria cerebrale media dell'ictus
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'ictus è una delle principali cause di morte o disabilità cronica a livello globale. Tuttavia, i trattamenti ottimali esistenti sono limitati alle terapie di riperfusione durante la fase acuta dell'ictus ischemico. Per ottenere informazioni sulla fisiopatologia dell'ictus e sviluppare approcci terapeutici innovativi, i modelli di ictus in vivo dei roditori svolgono un ruolo fondamentale. La disponibilità di animali geneticamente modificati ha particolarmente favorito l'uso dei topi come modelli sperimentali di ictus.
Nei pazienti colpiti da ictus, l'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCA) è un evento comune. Di conseguenza, il modello sperimentale più diffuso prevede l'occlusione intraluminale dell'MCA, una tecnica minimamente invasiva che non richiede craniectomia. Questa procedura prevede l'inserimento di un monofilamento attraverso l'arteria carotide esterna (ECA) e l'avanzamento attraverso l'arteria carotide interna (ICA) fino a raggiungere il punto di ramificazione dell'MCA. Dopo un'occlusione arteriosa di 45 minuti, il monofilamento viene rimosso per consentire la riperfusione. Durante tutto il processo, il flusso sanguigno cerebrale viene monitorato per confermare la riduzione durante l'occlusione e il successivo recupero dopo la riperfusione. Gli esiti neurologici e tissutali vengono valutati utilizzando test comportamentali e studi di risonanza magnetica per immagini (MRI).
Introduzione
L'ictus è una malattia devastante che colpisce circa 15 milioni di persone in tutto il mondo ogni anno, secondo l'OMS. Circa un terzo dei pazienti soccombe alla condizione, mentre un altro terzo sperimenta una disabilità permanente. L'ictus è una patologia complessa che coinvolge vari tipi di cellule, come le cellule immunitarie neurali e periferiche, la vascolarizzazione e le risposte sistemiche1. L'intricata rete di reazioni innescate dall'ictus a livello di sistema non può attualmente essere replicata utilizzando modelli in vitro . Pertanto, i modelli animali sperimentali sono essenziali per approfondire i meccanismi della malattia ....
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Protocollo
Il lavoro sugli animali è stato condotto seguendo le leggi catalane e spagnole (Real Decreto 53/2013) e le Direttive Europee, con l'approvazione del Comitato Etico (Comité Ètic d'Experimentació Animal, CEEA) dell'Università di Barcellona e degli organismi di regolamentazione locali della Generalitat de Catalunya. Gli studi sono riportati in conformità con le linee guida ARRIVE. Questa procedura è progettata per essere eseguita in topi adulti, a partire dalle 8 settimane di età, senza limiti di età. Esempi della procedura chirurgica sviluppata in topi C57BL/6 di 10-12 settimane di età sono forniti qui. Devono essere prese in considerazione le differenze anatomiche a se....
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Risultati
Esistono diversi approcci per valutare l'esito della procedura tMCAo. In questo caso vengono utilizzati metodi di neuroimaging (MRI) in vivo e test comportamentali.
I topi sviluppano lesioni ischemiche nel cervello, che colpiscono principalmente il territorio fornito dall'MCA omolaterale all'occlusione, come lo striato e la corteccia dorsolaterale. Esistono diversi metodi per determinare l'estensione della lesione, tra cui la colorazione tissutale del cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazol.......
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Discussione
La procedura tMCAo intraluminale è il modello più comunemente utilizzato di ischemia cerebrale focale con riperfusione nella ricerca di base. Attualmente, i topi sono il modello animale preferito a causa della disponibilità di ceppi geneticamente modificati. Tuttavia, è essenziale riconoscere che i topi geneticamente modificati e il loro background genetico possono avere un impatto sulla vascolarizzazione del cervello. La presenza di circolazione collaterale e di anastomosi tra diversi territori arteriosi può influenzare.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.
Ringraziamenti
Studio finanziato dalla sovvenzione PID2020-113202RB-I00 finanziata dal Ministerio de Ciencia e Innovación (MCIN)/Agencia Estatal de Investigación (AEI), Gobierno de España/10.13039/501100011033 e dal Fondo europeo di sviluppo regionale (FESR). Un modo di fare Europa". NCC e MAR avevano borse di studio pre-dottorato (rispettivamente PRE2021-099481 e PRE2018-085737) finanziate da MCIN/AEI/ 10.13039/501100011033 e da "European Social Fund (ESF) Investing in your future". Ringraziamo Francisca Ruiz-Jaén e Leonardo Márquez-Kisinousky per il loro supporto tecnico. Riconosciamo il supporto della struttura di imaging MRI dell'Institut d'Investigaci....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sutura 6/0 | Legature vascolari | Arago | |
| 6/0 sutura con ago curvo | Arago | Suture cutanee | |
| 9 mg/mL Soluzione salina | Fresenius Kabi | CN616003 EC | Per l'idratazione |
| Sistema di anestesia | Divaricatori | ||
| smussati, larghi 1 mm | Strumenti di scienza | 18200-09 | |
| Buprenorfine | Buprex | per sollievo dal dolore | |
| Pinza per l'applicazione di pinze | Fine Science Tools | S & T CAF4 | |
| Dumont mini pinze | Fine Science Tools | M3S 11200-10 | |
| Pinze | Fine Science Tools | 91106-12 | |
| Colla | Loctite | Per attaccare la sonda LDF al cranio | |
| Misuratore di forza di presa | IITC Life Science Inc. | #2200 | |
| Isoflurano | B-Braun | CN571105.8 | |
| LDF Perimed | Perimed Periflux | System 5000 | |
| LDF Supporti per sonde | Perimed | PH 07-4 | |
| Nastro | |||
| Magnete per risonanza magnetica | Bruker BioSpin, Ettlingen, Germania | BioSpec 70/30 scanner orizzontale per animali | |
| Porta aghi con taglierina per sutura | Fine Science Tools | 12002-14 | |
| Filamento di nylon | Doccol | 701912PK5Re | |
| Gabbia di recupero con cuscinetto | |||
| Forbici sirgiche | Fine Science Tools | 91401-12 | |
| Kit cauterizzatore per piccoli vasi | Fine Science Tools | 18000-00 | |
| Stereomicroscopio e luce fredda | Leica | M60 | |
| Pinze per legare suture | Fine Science Tools | 18025-10 | |
| Termostato, sonda rettale e tappetino per mouse | Letica Science Instruments | LE 13206 | |
| Forbici a molla Vannas (tagliente da 4 mm) | Fine Science Tools | 15019-10 | |
| Morsetti vascolari | Fine Science Tools | 00396-01 |
Riferimenti
- Siddiqi, A. Z., Wadhwa, A. Treatment of acute stroke: current practices and future horizons. Cardiovascular Revascularization Medicine. 49, 56-65 (2023).
- Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M.
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Ristampe e permessi
