Summary
Her presenterer vi en enkel metode for direkte observasjon og automatisert måling av stomatale responser på bakteriell invasjon i Arabidopsis thaliana. Denne metoden utnytter en bærbar stomatal imaging enhet, sammen med en bildeanalyse rørledning designet for bladbilder tatt av enheten.
Abstract
Stomata er mikroskopiske porer som finnes i plantebladepidermis. Regulering av stomatal blenderåpning er avgjørende ikke bare for å balansere karbondioksidopptak for fotosyntese og transpirasjonelt vanntap, men også for å begrense bakteriell invasjon. Mens planter lukker stomata ved anerkjennelse av mikrober, patogene bakterier, som Pseudomonas syringae pv. tomat DC3000 (Pto), åpne den lukkede spalteåpningen igjen for å få tilgang til bladets indre. I konvensjonelle analyser for å vurdere stomatale responser på bakteriell invasjon, blir bladepidermale peelinger, bladskiver eller frittliggende blader flytende på bakteriell suspensjon, og deretter observeres stomata under et mikroskop etterfulgt av manuell måling av stomatal blenderåpning. Imidlertid er disse analysene tungvint og kan ikke gjenspeile stomatale responser på naturlig bakteriell invasjon i et blad festet til planten. Nylig ble det utviklet en bærbar bildebehandlingsenhet som kan observere stomata ved å klemme et blad uten å løsne det fra planten, sammen med en dyplæringsbasert bildeanalyserørledning designet for automatisk å måle stomatal blenderåpning fra bladbilder tatt av enheten. Her, basert på disse tekniske fremskrittene, introduseres en ny metode for å vurdere stomatale responser på bakteriell invasjon i Arabidopsis thaliana. Denne metoden består av tre enkle trinn: sprayinokulering av Pto som etterligner naturlige infeksjonsprosesser, direkte observasjon av stomata på et blad av Pto-inokulert plante ved hjelp av den bærbare bildebehandlingsenheten, og automatisert måling av stomatal blenderåpning av bildeanalyserørledningen. Denne metoden ble vellykket brukt til å demonstrere stomatal nedleggelse og gjenåpning under Pto-invasjonen under forhold som tett etterligner den naturlige plante-bakterie-interaksjonen.
Introduction
Stomata er mikroskopiske porer omgitt av et par vaktceller på overflaten av blader og andre luftdeler av planter. Under stadig skiftende miljøer er regulering av stomatalåpningen sentral for planter å kontrollere karbondioksidopptaket som kreves for fotosyntese på bekostning av vanntap via transpirasjon. Dermed har kvantifisering av stomatal blenderåpning vært medvirkende til å forstå plantens miljøtilpasning. Imidlertid er kvantifisering av stomatal blenderåpning iboende tidkrevende og tungvint, da det krever menneskelig arbeidskraft å oppdage og måle stomatale porer i et bladbilde fanget av et mikroskop. For å omgå disse begrensningene har ulike metoder blitt utviklet for å lette kvantifiseringen av stomatal blenderåpning i Arabidopsis thaliana, en modellplante som i stor grad brukes til å studere stomatal biologi 1,2,3,4,5,6. For eksempel kan et porometer brukes til å måle transpirasjonshastighet som en metrisk av stomatal konduktans. Denne metoden gir imidlertid ikke direkte informasjon om stomatalnummer og blenderåpning som bestemmer stomatal konduktans. Noen studier har brukt konfokale mikroskopiteknikker som fremhever stomatale porer ved hjelp av en fluorescerende aktinmarkør, et fluorescerende fargestoff eller celleveggautofluorescens 1,2,3,4,5. Selv om disse tilnærmingene letter påvisning av stomata, kan kostnadene ved både drift av et konfokalmikroskopianlegg og utarbeidelse av mikroskopiprøver være et hinder for rutinemessig anvendelse. I et banebrytende arbeid av Sai et al. ble det utviklet en dyp nevral nettverksmodell for automatisk å måle stomatal blenderåpning fra lysfeltmikroskopiske bilder av A. thaliana epidermal peeling6. Likevel fritar denne innovasjonen ikke forskere fra oppgaven med å forberede en epidermal peeling for mikroskopisk observasjon. Nylig ble denne hindringen overvunnet ved å utvikle en bærbar bildebehandlingsenhet som kan observere stomata ved å klemme et blad av A. thaliana, sammen med en dyplæringsbasert bildeanalyserørledning som automatisk måler stomatal blenderåpning fra bladbilder tatt av enheten7.
Stomata bidrar til plantemedfødt immunitet mot bakterielle patogener. Nøkkelen til denne immunresponsen er stomatal lukning som begrenser bakteriell inngang gjennom den mikroskopiske poren inn i bladets indre, hvor bakterielle patogener sprer seg og forårsaker sykdommer8. Stomatal lukning induseres ved anerkjennelse av mikrobeassosierte molekylære mønstre (MAMPs), immunogene molekyler som ofte er felles for en klasse mikrober, av plasmamembranlokaliserte mønstergjenkjenningsreseptorer (PRR)9. En 22 aminosyre epitop av bakteriell flagellin kjent som flg22 er en typisk MAMP som induserer stomatal lukning gjennom anerkjennelse av PRR FLS210. Som et mottiltak, bakterielle patogener som Pseudomonas syringae pv. tomat DC3000 (Pto) og Xanthomonas campestris pv. Vesicatoria har utviklet virulensmekanismer for å gjenåpne stomata 9,11,12. Disse stomatale responsene på bakterielle patogener har blitt konvensjonelt analysert i analyser der enten bladepidermale peelinger, bladskiver eller frittliggende blader flyter på bakteriell suspensjon, og deretter observeres stomata under et mikroskop etterfulgt av manuell måling av stomatal blenderåpning. Imidlertid er disse analysene tungvint og kan ikke gjenspeile stomatale responser på naturlig bakteriell invasjon som oppstår i et blad festet til planten.
Her presenteres en enkel metode for å undersøke stomatal lukking og gjenåpning under Pto-invasjonen under den betingelsen som etterligner den naturlige plante-bakterie-interaksjonen. Denne metoden utnytter den bærbare bildebehandlingsenheten for direkte observasjon av A. thaliana stomata på et blad festet til planten inokulert med Pto, sammen med bildeanalyserørledningen for automatisert måling av stomatal blenderåpning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Voksende planter
- For å bryte dvalen, resuspender A. thaliana (Col-0) frø i avionisert vann og inkuber dem ved 4 ° C i 4 dager i mørket.
- Så frøene på jorden og vokse i et kammer utstyrt med hvitt fluorescerende lys. Oppretthold følgende vekstbetingelser: temperatur på 22 °C, lysintensitet på 6000 lux (ca. 100 μmol/m2/s) i 10 timer og relativ fuktighet på 60 %.
- Når det trengs, vann plantene med flytende gjødsel. Avstå fra vanning fra 1 uke til 2 dager før inokulering og vannbrønn 1 dag før inokulering.
2. Forbereder bakteriell inokulum
- Strek Pto fra glyserollager på størknet King's B (KB) medium (20 g tryptone, 1,5 gK2HPO4 og 15 g glyserol for 1 l, 1,5% Agar) med 50 μg / ml rifampicin og inkubere ved 28 ° C i 2 dager.
- Inokuler en enkelt koloni til 5 ml KB flytende medium med 50 μg/ml rifampicin og inkuber ved 28 °C med risting ved 200 rpm til sen logaritmisk vekstfase.
- Sentrifuger kulturen ved 6000 x g i 2 minutter, kast supernatanten og resuspender pelleten i 1 ml sterilt vann. Gjenta dette trinnet igjen.
- Fjern supernatanten, resuspender pelleten i 1 ml stomataåpningsbuffer (25 mM MES-KOH pH 6,15, 10 mM KCl), og mål OD600.
- Fortynn suspensjonen til OD600 0,2 med åpningsbuffer for spalteåpning inneholdende 0,04 % silikonsurfaktant.
3. Sprayinokulering av bakterier
- Fra 1 dag før inokulering til slutten av forsøket, utsett planter for en lysintensitet på ca. 10.000 lux (ca. 170 μmol / m2 / s).
- For å sikre at de fleste stomata er åpne, hold planter på et brett dekket med et gjennomsiktig lokk under lyset i minst 3 timer før sprayinokulering.
- Fjern lokket og bruk en airbrush til å spraye den abaxiale siden av bladene med 2,5 ml bakteriell suspensjon per tre planter på en enkelt potte.
- Inkuber de inokulerte plantene på et brett dekket med et gjennomsiktig lokk for å opprettholde en relativ fuktighet på rundt 85%.
- Ta bilder av stomata ved 1 time og 3 timer etter sprayinokulering ved hjelp av metoden beskrevet i avsnitt 4.
4. Direkte observasjon av stomata ved bruk av den bærbare bildebehandlingsenheten
MERK: Den bærbare stomatal bildebehandlingsenheten er utstyrt med et LED-lys og en kameramodul og kan skaffe 2,592 × 1,944 (høyde × bredde; piksler) bilder med en oppløsning på ca. 0,5 μm / piksel.
- Koble den bærbare stomatal imaging enheten til en personlig datamaskin (PC) utstyrt med bildeopptaksprogramvare.
- Fjern forsiktig, men helt vanndråper fra de inokulerte bladene med et stykke papir.
- Åpne toppdekselet på enheten, plasser bladet på scenen og lukk toppdekselet (figur 1).
- Juster fokuset på bildet ved å manipulere justeringsskruen, og klikk deretter på Lagre bilde-knappen på PC-skjermen. Bildet vil bli anskaffet umiddelbart. Vanligvis inneholder et fokusert bilde omtrent 10 analyserbare spalteåpninger. For å oppnå robuste resultater, ta stomatale bilder fra seks blader av tre forskjellige planter (to blader per plante).
5. Manuell måling av stomatal blenderåpning
MERK: ImageJ-programvaren kan lastes ned på https://imagej.nih.gov/ij/download.html
- Åpne en bildefil i ImageJ.
- Åpne ROI-behandling ved å velge Analyser > verktøy > ROI Manager.
- Bruk verktøyet for lineær merking til å tegne en linje som tilsvarer bredden på en stomi (figur 2), og registrer avkastningen ved å klikke på Legg til i ROI Manager.
- Tegn en linje som tilsvarer lengden på den samme stomien (figur 2A) og registrer ROI som beskrevet i trinn 5.3.
- Klikk Mål i ROI Manager for å måle bredden og lengden.
- Del bredden med lengden for å oppnå stomatal blenderåpning (forhold). For robust kvantifisering, bruk 60 eller flere stomata for hver behandling og tidspunkt. Ikke velg prematur eller obskur stomata for analysen (figur 2B, C).
6. Automatisert måling av stomatal blenderåpning
MERK: Pipelinen for bildeanalyse kjører i Google Colaboratory, et kjørbart miljø for programmeringsspråket Cloud Python. Brukere må ha en gyldig Google-konto med en fungerende Google Disk, Google Chrome-nettleser og en stabil internettforbindelse som en forutsetning.
- Last ned Google Colaboration-notatboken fra Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.8062528), og åpne notatblokken.
- Lag en lokal kopi av notatboken på Google Disk ved å velge Fil > Lagre en kopi i Disk. Når en ny fane vises, lukker du fanen til den opprinnelige notatblokken på en trygg måte.
- Trykk på Utfør-knappen én gang under Miljøoppsett-delen i notatblokken uten å brette ut celleblokkene for å importere de nødvendige bibliotekene.
- Utfør delen Kataloginnstillinger for å opprette tre mapper som brukes til analyse (f.eks. example_result, inference_results og modell) i Google Disk.
I dette tilfellet brukes mappene med navnet example_result, inference_results og modell som foreldrekatalog, og lagrer henholdsvis slutningsresultater og opplærte modeller. Denne notatblokken viser et eksempel på katalogkonstruksjon som en representativ prosedyre. Hvis du vil endre navnet, skriver du om pardir-, infdir- eller modeldir-banen . - I henhold til delen Klargjøring av bildene flytter du de anskaffede bildene til example_result, gruppert i bildetitler etter behandling eller prøve (f.eks. mock_1h_XXXXXX.jpg) for den endelige grafgenereringen. Eksempelbilder er tilgjengelige fra Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.8062528).
- Utfør delen Last ned opplærte modeller for å laste ned ONNX-filene til de opplærte modellene fra Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.8062528) og plassere dem under modellkatalogen .
- Kjør delen Inference and Measurement of Stomatal Aperture for å kvantifisere stomatal blenderåpning fra individuelle bilder. Resultatbildene med overlappet inferens og csv-filen med navnet example_result.csv blir eksportert til inference_results-katalogen.
- Utfør delen Grafgenerering for å lage en graf om stomatal blenderåpningsforhold, eksportert til inference_results-katalogen .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Etter sprayinokulering av Pto ble stomata på blader festet til de inokulerte plantene direkte observert av den bærbare stomatale bildebehandlingsenheten. Ved hjelp av manuelle og automatiserte målinger ble de samme bladbildene brukt til å beregne stomatal blenderåpning ved å ta forhold mellom bredde og lengde på ca. 60 stomata. Manuelle og automatiserte målinger indikerte konsekvent en reduksjon i stomatal blenderåpning i Pto-inokulerte planter sammenlignet med mock-inokulerte planter ved 1 time etter inokulering (hpi) (figur 3A, B), noe som indikerer at A-thalianaplanter lukker stomata som svar på Pto-invasjon . Ved 3 hpi var stomatal blenderåpning i Pto-inokulerte planter og mock-inokulerte planter praktisk talt den samme (figur 3C, D), som minner om stomatal gjenåpning av Pto. Bemerkelsesverdig nok tok den automatiserte målingen av stomatal blenderåpning bare ca. 5 s å behandle ett bilde (tabell 1), noe som reduserte måletiden med mer enn 95 % sammenlignet med den manuelle målingen. Dermed tilbyr denne protokollen et operasjonelt enkelt og arbeidsbesparende middel for å spore de dynamiske stomatale responsene til A. thaliana til bakteriepatogenet.
Figur 1: Bærbar bildebehandlingsenhet. Bilder som viser den bærbare bildebehandlingsenheten med et bladsett på scenen (venstre) og med toppdekselet lukket (høyre). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Skjematisk diagram over måling av stomatal blenderåpning. (A) Stomatal blenderåpning bestemmes ved å beregne forholdet mellom bredde og lengde på en stomi, som indikert med hvite piler. (B) Prematur og (C) obskur stomata bør utelukkes fra målingen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Stomatale responser på Pto i en intakt hel plante. A. thaliana-planter ble sprayinokulert med mock eller Pto, og stomata på blader festet til de inokulerte plantene ble direkte observert ved (A, B) 1 hpi og (C, D) 3 hpi av den bærbare stomatale bildebehandlingsenheten. Stomatal blenderåpning (ratio) ble beregnet ved (A,C) manuelle og (B,D) automatiserte målinger. P-verdier ble beregnet med tosidig t-test. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Saksbehandlingstid(er) | ||
| Metode | Bety | SD |
| Håndbok | 130.1 | 48.8 |
| Automatisert | 4.7 | 0.8 |
Tabell 1: Behandlingstid for manuelle og automatiserte målinger av stomatal blenderåpning per bilde. Gjennomsnitt og standardavvik (SD) for saksbehandlingstid ble beregnet ut fra målinger av ni representative bilder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Tidligere studier brukte epidermal peeling, bladskiver eller frittliggende blader for å undersøke stomatale responser på bakterielle invasjoner 9,11,12. I motsetning til dette utnytter metoden foreslått i denne studien den bærbare stomatale bildebehandlingsenheten for direkte å observere stomata på et blad festet til planten etter sprayinokulering av Pto, som etterligner naturlige forhold for bakteriell invasjon. I tillegg, fordi denne metoden ikke involverer destruktive prøveprepareringsprosesser som bladløsrivelse, bladskiveeksisjon og epidermal peeling, kan sår og vanntap forbundet med disse prøveprepareringsprosessene unngås. Disse effektene bør ikke tas lett på, da sår og vanntap uunngåelig produserer planteavledede signaler som fytohormonene jasmonat og abscisinsyre som påvirker stomatale bevegelser13,14.
Det er flere retningslinjer for optimal bruk av den bærbare stomatal imaging enheten. For det første er grundig fjerning av vanndråper fra bladflater avgjørende for å få bilder med optimal klarhet og fokus. For det andre anbefales det å ta flere bilder fra identiske bladområder ved å manipulere justeringsskruen for å finjustere fokus. Denne praksisen forventes å øke antallet analyserbare spalteåpninger per bladareal, og dermed redusere potensielle utvalgsskjevheter. Til slutt, når du klemmer et blad med enheten, er det nødvendig med forsiktig håndtering for å unngå å forårsake skade på bladet. Dette er kritisk fordi sår er et av signalene som fremkaller stomatal lukking14.
Stomatal blenderåpning hadde en tendens til å være mer variabel i den automatiserte målingen enn i den manuelle målingen (figur 3). Det er flere mulige årsaker til dette. Det ble tidligere rapportert at stomatale porer utledet av bildeanalyserørledningen ofte inkluderer cellevegger og / eller skygger av vaktceller som omgir stomatal pore7, noe som ikke er tilfelle i manuell måling av menneskelige øyne. Stomata med uvanlige former kan også påvirke variasjonen mellom manuelle og automatiserte målinger, selv om stomata deteksjonsmodellen ble opplært til å utelukke slike stomata fra analysen7. Noen få stomata ble gitt nullverdier for stomatal blenderåpning i den automatiserte målingen, men ingen i den manuelle målingen av ukjente årsaker. Fremtidige oppdateringer av modellene kan være nødvendig for å løse disse problemene. Likevel, siden den automatiserte målingen av stomatal blenderåpning i hovedsak samsvarte med den manuelle målingen, er den nåværende versjonen av bildeanalyserørledningen av praktisk bruk.
Den direkte observasjonen og automatiserte måling av stomatal blenderåpning i A. thaliana beskrevet i denne studien holder løfte om ulike applikasjoner mot å belyse rollen som stomata i plantemiljøtilpasning. For eksempel bør den presenterte metoden være bredt anvendelig for raskt kvantifisering av stomatal åpning i et intakt helt plantesystem etter eksponering for biotiske påkjenninger som MAMPs og mikrobielle patogener, samt abiotiske påkjenninger som tørke. Til støtte for dette brukte en tidligere studie vellykket bildeanalyserørledningen for nøyaktig å kvantifisere stomatal åpning av "bladskiver" behandlet med sopptoksinfusicoccin som induserer stomatal åpning eller stresshormonet abscisinsyre som induserer stomatal lukking7. Videre tillater den bærbare bildebehandlingsenheten i prinsippet langsiktig tidskursanalyse av stomatalåpningen på et enkelt identisk blad festet til planten. Dette kan kaste lys over nye aspekter av plantemikrobeinteraksjoner fordi de fleste studier har fokusert på stomatale responser på bakterielle patogener i de første timene av interaksjonen 9,10,11. Det vil også være interessant å bruke og modifisere den presenterte metoden for å utforske stomatale responser på bakteriell invasjon under ulike miljøforhold. Dette er spesielt relevant for å forstå virkningene av miljøfaktorer som temperatur, fuktighet og tilgjengelighet av jordvann som påvirker stomatale bevegelser og sykdomsutvikling av bakterielle patogener 8,15. Avslutningsvis vil den presenterte metoden bli tenkt å akselerere forskning på stomatale funksjoner i og utover plantemikrobeinteraksjoner under hittil uoppnåelige eksperimentelle innstillinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter å oppgi.
Acknowledgments
Vi takker alle medlemmene i forskningsprosjektet 'Co-creation of plant adaptive traits via assembly of plant-microbe holobiont', for fruktbare diskusjoner. Dette arbeidet ble støttet av Grant-in-Aid for Transformative Research Areas (21H05151 og 21H05149 til AM og 21H05152 til YT) og Grant-in-Aid for utfordrende utforskende forskning (22K19178 til A. M.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Agar | Nakarai tesque | 01028-85 | |
| Airbrush kits | ANEST IWATA | MX2900 | Accessory kits for SPRINT JET |
| Biotron | Nippon Medical & Chemical Instruments | LPH-411S | Plant Growth Chamber with white fluorescent light |
| Glycerol | Wako | 072-00626 | |
| Half tray | Sakata | 72000113 | A set of tray and lid |
| Hyponex | Hyponex | No catalogue number available | Dilute the solution of Hyponex at a ratio of 1:2000 in deionized water for watering plants |
| Image J | Natinal Institute of Health | Download at https://imagej.nih.gov/ij/download.html | Used for manual measurement of stomatal aperture |
| K2HPO4 | Wako | 164-04295 | |
| KCl | Wako | 163-03545 | |
| KOH | Wako | 168-21815 | For MES-KOH |
| MES | Wako | 343-01621 | For MES-KOH |
| Portable stomatal imaging device | Phytometrics | Order at https://www.phytometrics.jp/ | Takagi et al.(2023) doi: 10.1093/pcp/pcad018. |
| Rifampicin | Wako | 185-01003 | Dissolve in DMSO |
| Silwet-L77 | Bio medical science | BMS-SL7755 | silicone surfactant used in spray inoculation |
| SPRINT JET | ANEST IWATA | IS-800 | Airbrush used for spray inoculation |
| SuperMix A | Sakata seed | 72000083 | Mix with Vermiculite G20 in equal proportions for preparing soil |
| Tryptone | Nakarai tesque | 35640-95 | |
| Vermiculite G20 | Nittai | No catalogue number available | Mix with Super Mix A in equal proportions for preparing soil |
| White fluorescent light | NEC | FHF32EX-N-HX-S | Used for Biotron |
References
- Shimono, M., Higaki, T., Kaku, H., Shibuya, N., Hasezawa, S., Day, B. Quantitative evaluation of stomatal cytoskeletal patterns during the activation of immune signaling in Arabidopsis thaliana. PLoS One. 11, e0159291 (2016).
- Bourdais, G., et al. The use of quantitative imaging to investigate regulators of membrane trafficking in Arabidopsis stomatal closure. Traffic. 20 (2), 168-180 (2019).
- Higaki, T., Kutsuna, N., Hasezawa, S. CARTA-based semi-automatic detection of stomatal regions on an Arabidopsis cotyledon surface. Plant Morphology. 26 (1), 9-12 (2014).
- Eisele, J. F., Fäßler, F., Bürgel, F., Chaban, C. A. A rapid and simple method for microscopy-based stomata analyses. PLoS One. 11, e0164576 (2016).
- Chitraker, R., Melotto, M. Assessing stomatal response to live bacterial cells using whole leaf imaging. Journal of Visualized Experiments. 44, 2185 (2010).
- Sai, N., et al. StomaAI: an efficient and user-friendly tool for measurement of stomatal pores and density using deep computer vision. New Phytologist. 238 (2), 904-915 (2023).
- Takagi, M., et al. Image-based quantification of Arabidopsis thaliana stomatal aperture from leaf images. Plant and Cell Physiology. pcad018, (2023).
- Melotto, M., Zhang, L., Oblessuc, P. R., He, S. Y. Stomatal defense a decade later. Plant Physiology. 174 (2), 561-571 (2017).
- Melotto, M., Underwood, W., Koczan, J., Nomura, K., He, S. Y. Plant stomata function in innate immunity against bacterial invasion. Cell. 126 (5), 969-980 (2006).
- Zeng, W., He, S. A prominent role of the flagellin receptor FLAGELLIN-SENSING2 in mediating stomatal response to Pseudomonas syringae pv tomato DC3000 in Arabidopsis. Plant Physiology. 153 (3), 1188-1198 (2010).
- Zheng, X. Y., et al. Coronatine promotes Pseudomonas syringae virulence in plants by activating a signaling cascade that inhibits salicylic acid accumulation. Cell Host and Microbe. 11 (6), 587-596 (2012).
- Raffeiner, M., et al. The Xanthomonas type-III effector XopS stabilizes CaWRKY40a to regulate defense responses and stomatal immunity in pepper (Capsicum annuum). The Plant Cell. 34 (5), 1684-1708 (2022).
- Munemasa, S., Hauser, F., Park, J., Waadt, R., Brandt, B., Schroeder, J. I. Mechanisms of abscisic acid-mediated control of stomatal aperture. Current Opinion in Plant Biology. 28, 154-162 (2015).
- Förster, S., et al. Wounding-induced stomatal closure requires jasmonate-mediated activation of GORK K+ channels by a Ca2+ sensor-kinase CBL1-CIPK5 complex. Developmental Cell. 48 (1), 87-99 (2018).
- Cheng, Y. T., Zhang, L., He, S. Y. Plant-microbe interactions facing environmental challenge. Cell Host and Microbe. 26 (2), 183-192 (2019).
