Summary
Her præsenterer vi en simpel metode til direkte observation og automatiseret måling af stomatale reaktioner på bakteriel invasion i Arabidopsis thaliana. Denne metode udnytter en bærbar stomatal billeddannelsesenhed sammen med en billedanalysepipeline designet til bladbilleder, der er taget af enheden.
Abstract
Stomata er mikroskopiske porer, der findes i plantens bladepidermis. Regulering af stomatal blænde er afgørende ikke kun for at afbalancere kuldioxidoptagelse til fotosyntese og transpirationelt vandtab, men også for at begrænse bakteriel invasion. Mens planter lukker stomata ved genkendelse af mikrober, patogene bakterier, såsom Pseudomonas syringae pv. tomat DC3000 (Pto), genåbn den lukkede stomata for at få adgang til bladets indre. I konventionelle assays til vurdering af stomatale reaktioner på bakteriel invasion flyder bladepidermale skaller, bladskiver eller løsrevne blade på bakteriel suspension, og derefter observeres stomata under et mikroskop efterfulgt af manuel måling af stomatal blænde. Disse analyser er imidlertid besværlige og afspejler muligvis ikke stomatale reaktioner på naturlig bakteriel invasion i et blad, der er fastgjort til planten. For nylig blev der udviklet en bærbar billeddannelsesenhed, der kan observere stomata ved at klemme et blad uden at løsne det fra planten sammen med en dyb læringsbaseret billedanalysepipeline designet til automatisk at måle stomatal blænde fra bladbilleder taget af enheden. Her, på baggrund af disse tekniske fremskridt, introduceres en ny metode til vurdering af stomatale reaktioner på bakteriel invasion i Arabidopsis thaliana . Denne metode består af tre enkle trin: sprayinokulering af Pto , der efterligner naturlige infektionsprocesser, direkte observation af stomata på et blad af den Pto-inokulerede plante ved hjælp af den bærbare billeddannelsesenhed og automatiseret måling af stomatal blænde ved billedanalyserørledningen. Denne metode blev med succes brugt til at demonstrere stomatal lukning og genåbning under Pto-invasion under forhold, der nøje efterligner den naturlige plante-bakterie-interaktion.
Introduction
Stomata er mikroskopiske porer omgivet af et par beskyttelsesceller på overfladen af blade og andre luftdele af planter. Under stadigt skiftende miljøer er regulering af stomatalåbningen central for planter for at kontrollere den kuldioxidoptagelse, der kræves til fotosyntese på bekostning af vandtab via transpiration. Således har kvantificering af stomatalåbningen været medvirkende til at forstå plantemiljøtilpasning. Imidlertid er kvantificering af stomatalåbningen i sagens natur tidskrævende og besværlig, da det kræver menneskelig arbejdskraft at få øje på og måle stomatale porer i et bladbillede taget af et mikroskop. For at omgå disse begrænsninger er der udviklet forskellige metoder til at lette kvantificeringen af stomatal blænde i Arabidopsis thaliana, en modelplante, der i vid udstrækning anvendes til at studere stomatal biologi 1,2,3,4,5,6. For eksempel kan et porometer bruges til at måle transpirationshastighed som en måling af stomatal konduktans. Denne metode giver imidlertid ikke direkte information om stomatalnummeret og blænden, der bestemmer stomatal konduktans. Nogle undersøgelser har brugt konfokale mikroskopiteknikker, der fremhæver stomatale porer ved hjælp af en fluorescerende actinmarkør, et fluorescerende farvestof eller cellevægsautofluorescens 1,2,3,4,5. Mens disse tilgange letter påvisning af stomata, kan omkostningerne ved både drift af en konfokal mikroskopifacilitet og forberedelse af mikroskopiprøver være en hindring for rutinemæssig anvendelse. I et banebrydende arbejde af Sai et al. blev der udviklet en dyb neural netværksmodel til automatisk måling af stomatal blænde fra lysfeltmikroskopiske billeder af A. thaliana epidermale peelinger6. Alligevel fritager denne innovation ikke forskere fra opgaven med at forberede en epidermal skræl til mikroskopisk observation. For nylig blev denne hindring overvundet ved at udvikle en bærbar billeddannelsesenhed, der kan observere stomata ved at klemme et blad af A. thaliana sammen med en dyb læringsbaseret billedanalysepipeline, der automatisk måler stomatal blænde fra bladbilleder taget af enheden7.
Stomata bidrager til plantemedfødt immunitet mod bakterielle patogener. Nøglen til dette immunrespons er stomatal lukning, der begrænser bakteriel indtrængen gennem den mikroskopiske pore ind i bladets indre, hvor bakterielle patogener spredes og forårsager sygdomme8. Stomatal lukning induceres ved genkendelse af mikrobeassocierede molekylære mønstre (MAMP'er), immunogene molekyler, der ofte er fælles for en klasse af mikrober, af plasmamembranlokaliserede mønstergenkendelsesreceptorer (PRR'er)9. En 22 aminosyreepitop af bakteriel flagellin kendt som flg22 er en typisk MAMP, der inducerer stomatal lukning gennem dens genkendelse af PRR FLS210. Som en modforanstaltning, bakterielle patogener såsom Pseudomonas syringae pv. tomat DC3000 (Pto) og Xanthomonas campestris pv. Vesicatoria har udviklet virulensmekanismer til at genåbne stomata 9,11,12. Disse stomatale reaktioner på bakterielle patogener er traditionelt analyseret i assays, hvor enten bladepidermale skræl, bladskiver eller løsrevne blade flyder på bakteriel suspension, og derefter observeres stomata under et mikroskop efterfulgt af manuel måling af stomatal blænde. Disse analyser er imidlertid besværlige og afspejler muligvis ikke stomatale reaktioner på naturlig bakteriel invasion, der forekommer i et blad, der er fastgjort til planten.
Her præsenteres en simpel metode til at undersøge stomatal lukning og genåbning under Pto-invasion under forudsætning af, at den nøje efterligner den naturlige interaktion mellem plante og bakterier. Denne metode udnytter den bærbare billeddannelsesenhed til direkte observation af A. thaliana stomata på et blad, der er fastgjort til planten podet med Pto, sammen med billedanalyserørledningen til automatiseret måling af stomatal blænde.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Dyrkning af planter
- For at bryde dvale skal du resuspendere A. thaliana (Col-0) frø i deioniseret vand og inkubere dem ved 4 ° C i 4 dage i mørke.
- Så frøene på jorden og vokse i et kammer udstyret med hvidt fluorescerende lys. Oprethold følgende vækstbetingelser: temperatur på 22 °C, lysintensitet på 6.000 lux (ca. 100 μmol/m2/s) i 10 timer og relativ luftfugtighed på 60 %.
- Når det er nødvendigt, vand planterne med en flydende gødning. Afstå fra vanding fra 1 uge til 2 dage før podning og vand godt 1 dag før podning.
2. Forberedelse af bakteriel inokulum
- Stribe Pto fra glycerollager på størknet King's B (KB) medium (20 g trypton, 1,5 gK2HPO4 og 15 g glycerol til 1 liter, 1,5% agar) med 50 μg / ml rifampicin og inkuberes ved 28 ° C i 2 dage.
- En enkelt koloni podes til 5 ml KB flydende medium med 50 μg/ml rifampicin og inkuberes ved 28 °C under omrystning ved 200 rpm indtil sen logaritmisk vækstfase.
- Kulturen centrifugeres ved 6.000 x g i 2 min., supernatanten kasseres, og pelletten resuspenderes i 1 ml sterilt vand. Gentag dette trin igen.
- Supernatanten fjernes, pellettet resuspenderes i 1 ml spalteåbningsbuffer (25 mM MES-KOH pH 6,15, 10 mM KCl), og OD600 måles.
- Fortynd suspensionen til OD600 0,2 med stomataåbningsbuffer indeholdende 0,04% silikoneoverfladeaktivt stof.
3. Sprayinokulering af bakterier
- Fra 1 dag før podning til forsøgets afslutning udsættes planterne for en lysintensitet på ca. 10.000 lux (ca. 170 μmol/m2/s).
- For at sikre, at de fleste stomata er åbne, skal du opbevare planter på en bakke dækket med et gennemsigtigt låg under lyset i mindst 3 timer før spraypodning.
- Fjern låget og brug en airbrush til at sprøjte den abaxiale side af blade med 2,5 ml bakteriel suspension pr. Tre planter på en enkelt gryde.
- Inkuber de podede planter på en bakke dækket med et gennemsigtigt låg for at opretholde en relativ luftfugtighed på omkring 85%.
- Der tages billeder af stomata 1 time og 3 timer efter spraypodning ved hjælp af metoden beskrevet i punkt 4.
4. Direkte observation af stomata ved hjælp af det bærbare billedbehandlingsudstyr
BEMÆRK: Den bærbare stomatal billedbehandlingsenhed er udstyret med et LED-lys og et kameramodul og kan tage 2.592 × 1.944 (højde × bredde; pixels) billeder med en opløsning på ca. 0,5 μm / pixel.
- Tilslut den bærbare stomatal billedbehandlingsenhed til en pc (pc), der er udstyret med billedoptagelsessoftware.
- Fjern forsigtigt men helt vanddråber fra de podede blade med et stykke papir.
- Åbn enhedens topdæksel, placer bladet på scenen, og luk topdækslet (figur 1).
- Juster billedets fokus ved at manipulere justeringsskruen, og klik derefter på knappen Gem billede på pc-skærmen. Billedet erhverves øjeblikkeligt. Typisk indeholder et fokuseret billede ca. 10 analyserbare stomata. For at opnå robuste resultater skal du erhverve stomatale billeder fra seks blade af tre forskellige planter (to blade pr. Plante).
5. Manuel måling af stomatal blænde
BEMÆRK: ImageJ-softwaren kan downloades på https://imagej.nih.gov/ij/download.html
- Åbn en billedfil i ImageJ.
- Åbn ROI-styringen ved at vælge Analysér > værktøjer > ROI-styring.
- Brug markeringsværktøjet Lige linje til at tegne en linje, der svarer til bredden af en stomi (figur 2), og registrer investeringsafkastet ved at klikke på Tilføj i ROI-styringen.
- Tegn en linje svarende til længden af den samme stomi (figur 2A), og registrer ROI som beskrevet i trin 5.3.
- Klik på Mål i ROI-styringen for at måle bredden og længden.
- Del bredden med længden for at opnå stomatalåbningen (forhold). For robust kvantificering skal du bruge 60 eller flere stomata til hver behandling og hvert tidspunkt. Vælg ikke for tidlige eller uklare stomata til analysen (figur 2B, C).
6. Automatisk måling af stomatal blænde
BEMÆRK: Billedanalysepipelinen kører i Google Colaboratory, et eksekverbart miljø i skyen Python-programmeringssprog. Brugere skal have en gyldig Google-konto med et fungerende Google Drev, Google Chrome-browser og en stabil internetforbindelse som en forudsætning.
- Download Google Colaboratory-notesbogen fra Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.8062528), og åbn notesbogen.
- Opret en lokal kopi af notesbogen til Google Drev ved at vælge Filer > Gem en kopi i Drev. Når en ny fane vises, skal du lukke fanen i den oprindelige notesbog sikkert.
- Tryk én gang på knappen Udfør under sektionen Miljøopsætning i notesbogen uden at folde celleblokkene ud for at importere de nødvendige biblioteker.
- Udfør sektionen Katalogindstillinger for at oprette tre mapper, der bruges til analyse (f.eks. example_result, inference_results og model) i Google Drev.
BEMÆRK: I dette tilfælde bruges mapperne med navnene example_result, inference_results og model som overordnet mappe, der gemmer henholdsvis inferensresultater og trænede modeller. Denne notesbog viser et eksempel på katalogkonstruktion som en repræsentativ procedure. Hvis du vil ændre navnet, skal du omskrive stien pardir, infdir eller modeldir . - I henhold til afsnittet Forberedelse af billederne skal du flytte de erhvervede billeder til example_result, grupperet i billedtitler efter behandling eller prøve (f.eks. mock_1h_XXXXXX.jpg) til den endelige grafgenerering. Prøvebilleder er tilgængelige fra Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.8062528).
- Udfør delen Download trænede modeller for at downloade ONNX-filerne til de trænede modeller fra Zenodo (https://doi.org/10.5281/zenodo.8062528) og placere dem under modelmappen .
- Kør delen Inference and Measurement of Stomatal Aperture for at kvantificere stomatalblænden fra individuelle billeder. Resultatbillederne med overlejret slutning og csv-filen med navnet example_result.csv eksporteres til inference_results-mappen.
- Udfør sektionen Grafgenerering for at oprette en graf over stomatalblændeforholdet, eksporteret til inference_results-mappen .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Efter spraypodning af Pto blev stomata på blade, der var fastgjort til de podede planter, observeret direkte af den bærbare stomatal billeddannelsesenhed. Ved hjælp af manuelle og automatiserede målinger blev de samme bladbilleder brugt til at beregne stomatal blænde ved at tage forhold mellem bredde og længde på ca. 60 stomata. Manuelle og automatiserede målinger indikerede konsekvent et fald i stomatalåbningen i Pto-podede planter sammenlignet med mock-podede planter 1 time efter podning (hpi) (figur 3A, B), hvilket indikerer, at A thaliana planter lukker stomata som reaktion på Pto-invasion . Ved 3 hpi var stomatalåbningen i Pto-podede planter og mock-inokulerede planter stort set den samme (figur 3C, D), der minder om stomatal genåbning af Pto. Bemærkelsesværdigt nok tog den automatiserede måling af stomatal blænde kun ca. 5 sekunder at behandle et billede (tabel 1), hvilket reducerede måletiden med mere end 95% sammenlignet med den manuelle måling. Således tilbyder denne protokol et operationelt simpelt og arbejdsbesparende middel til at spore de dynamiske stomatale reaktioner fra A. thaliana på bakteriepatogenet.
Figur 1: Bærbar billedbehandlingsenhed. Billeder, der viser den bærbare billedbehandlingsenhed med et bladsæt på scenen (venstre) og med topdækslet lukket (højre). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Skematisk diagram over måling af stomatal blænde. (A) Stomatal blænde bestemmes ved at beregne forholdet mellem bredde og længde af en stomi som angivet med hvide pile. (B) For tidlig og (C) uklar stomata bør udelukkes fra målingen. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Stomatale reaktioner på Pto i en intakt hel plante. A. thaliana planter blev sprayinokuleret med mock eller Pto, og stomata på blade fastgjort til de podede planter blev direkte observeret ved (A, B) 1 hpi og (C, D) 3 hpi af den bærbare stomatal billeddannelsesenhed. Stomatal blænde (forhold) blev beregnet ved (A,C) manuelle og (B,D) automatiserede målinger. P-værdier blev beregnet ved en tosidet t-test. Klik her for at se en større version af denne figur.
| Behandlingstid(er) | ||
| Metode | Betyde | SD |
| Manual | 130.1 | 48.8 |
| Automatiseret | 4.7 | 0.8 |
Tabel 1: Behandlingstid for manuelle og automatiserede målinger af stomatal blænde pr. billede. Midler og standardafvigelser (SD) for behandlingstid blev beregnet ud fra målingerne af ni repræsentative billeder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Tidligere undersøgelser brugte epidermale skræl, bladskiver eller løsrevne blade til at undersøge stomatale reaktioner på bakterielle invasioner 9,11,12. I modsætning hertil udnytter den metode, der foreslås i denne undersøgelse, den bærbare stomatal billeddannelsesenhed til direkte at observere stomata på et blad, der er fastgjort til planten efter sprayinokulering af Pto, hvilket efterligner naturlige betingelser for bakteriel invasion. Derudover, fordi denne metode ikke involverer destruktive prøveforberedelsesprocesser såsom bladfrigørelse, bladskiveudskæring og epidermal skrælning, kan såring og vandtab forbundet med disse prøveforberedelsesprocesser undgås. Disse virkninger bør ikke tages let, da sår og vandtab uundgåeligt producerer planteafledte signaler såsom fytohormonerne jasmonat og abscisinsyre, der påvirker stomatale bevægelser13,14.
Der er flere retningslinjer for optimal brug af den bærbare stomatal billeddannelsesenhed. For det første er grundig fjernelse af vanddråber fra bladoverflader afgørende for at opnå billeder med optimal klarhed og fokus. For det andet anbefales det at tage flere billeder fra identiske bladområder ved at manipulere justeringsskruen for at finjustere fokus. Denne praksis forventes at øge antallet af analyserbare stomata pr. bladareal og derved mindske potentielle prøveudtagningsforstyrrelser. Endelig, når du klemmer et blad med enheden, kræves omhyggelig håndtering for at undgå at beskadige bladet. Dette er kritisk, fordi sår er et af de signaler, der fremkalder stomatal lukning14.
Stomatal blænde havde tendens til at være mere variabel i den automatiserede måling end i den manuelle måling (figur 3). Der er flere mulige årsager til dette. Det blev tidligere rapporteret, at stomatale porer udledt af billedanalyserørledningen ofte inkluderer cellevægge og / eller skygger af beskyttelsesceller, der omgiver stomatal pore7, hvilket ikke er tilfældet ved manuel måling af menneskelige øjne. Stomata med usædvanlige former kan også påvirke variationen mellem manuelle og automatiserede målinger, selvom stomatadetekteringsmodellen blev trænet til at udelukke sådanne stomata fra analysen7. Nogle få stomata fik nulværdier for stomatal blænde i den automatiserede måling, men ingen i den manuelle måling af ukendte årsager. Det kan være nødvendigt med fremtidige opdateringer af modellerne for at løse disse problemer. Ikke desto mindre, da den automatiserede stomatal blændemåling i det væsentlige matchede den manuelle måling, er den aktuelle version af billedanalysepipelinen til praktisk brug.
Den direkte observation og automatiserede måling af stomatal blænde i A. thaliana beskrevet i denne undersøgelse er lovende for forskellige anvendelser til belysning af stomatas rolle i plantemiljøtilpasning. For eksempel bør den præsenterede metode være bredt anvendelig til hurtig kvantificering af stomatal åbning i et intakt hele plantesystem efter eksponering for biotiske belastninger såsom MAMP'er og mikrobielle patogener samt abiotiske belastninger såsom tørke. Til støtte for dette anvendte en tidligere undersøgelse med succes billedanalyserørledningen til nøjagtigt at kvantificere stomatalåbningen af "bladskiver" behandlet med svampetoksinet fusicoccin, der inducerer stomatal åbning eller stresshormonet abscisinsyre, der inducerer stomatal lukning7. Desuden muliggør den bærbare billeddannelsesenhed i princippet langsigtet tidsforløbsanalyse af stomatalåbningen på et enkelt identisk blad, der er fastgjort til planten. Dette kan kaste lys over nye aspekter af plante-mikrobe-interaktioner, fordi de fleste undersøgelser har fokuseret på stomatale reaktioner på bakterielle patogener i de første flere timer af interaktionen 9,10,11. Det vil også være interessant at anvende og ændre den præsenterede metode til at udforske stomatale reaktioner på bakteriel invasion under forskellige miljøforhold. Dette er især relevant for at forstå virkningerne af miljøfaktorer såsom temperatur, fugtighed og tilgængelighed af jordvand, der påvirker stomatale bevægelser og sygdomsudvikling af bakterielle patogener 8,15. Afslutningsvis vil den præsenterede metode blive forestillet at fremskynde forskning i stomatale funktioner i og ud over plante-mikrobe-interaktioner under hidtil uopnåelige eksperimentelle indstillinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter at erklære.
Acknowledgments
Vi takker alle medlemmer af forskningsprojektet, 'Co-creation of plant adaptive traits via assembly of plant-microbe holobiont', for frugtbare diskussioner. Dette arbejde blev støttet af Grant-in-Aid for Transformative Research Areas (21H05151 og 21H05149 til AM og 21H05152 til Y.T.) og Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research (22K19178 til A.M.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Agar | Nakarai tesque | 01028-85 | |
| Airbrush kits | ANEST IWATA | MX2900 | Accessory kits for SPRINT JET |
| Biotron | Nippon Medical & Chemical Instruments | LPH-411S | Plant Growth Chamber with white fluorescent light |
| Glycerol | Wako | 072-00626 | |
| Half tray | Sakata | 72000113 | A set of tray and lid |
| Hyponex | Hyponex | No catalogue number available | Dilute the solution of Hyponex at a ratio of 1:2000 in deionized water for watering plants |
| Image J | Natinal Institute of Health | Download at https://imagej.nih.gov/ij/download.html | Used for manual measurement of stomatal aperture |
| K2HPO4 | Wako | 164-04295 | |
| KCl | Wako | 163-03545 | |
| KOH | Wako | 168-21815 | For MES-KOH |
| MES | Wako | 343-01621 | For MES-KOH |
| Portable stomatal imaging device | Phytometrics | Order at https://www.phytometrics.jp/ | Takagi et al.(2023) doi: 10.1093/pcp/pcad018. |
| Rifampicin | Wako | 185-01003 | Dissolve in DMSO |
| Silwet-L77 | Bio medical science | BMS-SL7755 | silicone surfactant used in spray inoculation |
| SPRINT JET | ANEST IWATA | IS-800 | Airbrush used for spray inoculation |
| SuperMix A | Sakata seed | 72000083 | Mix with Vermiculite G20 in equal proportions for preparing soil |
| Tryptone | Nakarai tesque | 35640-95 | |
| Vermiculite G20 | Nittai | No catalogue number available | Mix with Super Mix A in equal proportions for preparing soil |
| White fluorescent light | NEC | FHF32EX-N-HX-S | Used for Biotron |
References
- Shimono, M., Higaki, T., Kaku, H., Shibuya, N., Hasezawa, S., Day, B. Quantitative evaluation of stomatal cytoskeletal patterns during the activation of immune signaling in Arabidopsis thaliana. PLoS One. 11, e0159291 (2016).
- Bourdais, G., et al. The use of quantitative imaging to investigate regulators of membrane trafficking in Arabidopsis stomatal closure. Traffic. 20 (2), 168-180 (2019).
- Higaki, T., Kutsuna, N., Hasezawa, S. CARTA-based semi-automatic detection of stomatal regions on an Arabidopsis cotyledon surface. Plant Morphology. 26 (1), 9-12 (2014).
- Eisele, J. F., Fäßler, F., Bürgel, F., Chaban, C. A. A rapid and simple method for microscopy-based stomata analyses. PLoS One. 11, e0164576 (2016).
- Chitraker, R., Melotto, M. Assessing stomatal response to live bacterial cells using whole leaf imaging. Journal of Visualized Experiments. 44, 2185 (2010).
- Sai, N., et al. StomaAI: an efficient and user-friendly tool for measurement of stomatal pores and density using deep computer vision. New Phytologist. 238 (2), 904-915 (2023).
- Takagi, M., et al. Image-based quantification of Arabidopsis thaliana stomatal aperture from leaf images. Plant and Cell Physiology. pcad018, (2023).
- Melotto, M., Zhang, L., Oblessuc, P. R., He, S. Y. Stomatal defense a decade later. Plant Physiology. 174 (2), 561-571 (2017).
- Melotto, M., Underwood, W., Koczan, J., Nomura, K., He, S. Y. Plant stomata function in innate immunity against bacterial invasion. Cell. 126 (5), 969-980 (2006).
- Zeng, W., He, S. A prominent role of the flagellin receptor FLAGELLIN-SENSING2 in mediating stomatal response to Pseudomonas syringae pv tomato DC3000 in Arabidopsis. Plant Physiology. 153 (3), 1188-1198 (2010).
- Zheng, X. Y., et al. Coronatine promotes Pseudomonas syringae virulence in plants by activating a signaling cascade that inhibits salicylic acid accumulation. Cell Host and Microbe. 11 (6), 587-596 (2012).
- Raffeiner, M., et al. The Xanthomonas type-III effector XopS stabilizes CaWRKY40a to regulate defense responses and stomatal immunity in pepper (Capsicum annuum). The Plant Cell. 34 (5), 1684-1708 (2022).
- Munemasa, S., Hauser, F., Park, J., Waadt, R., Brandt, B., Schroeder, J. I. Mechanisms of abscisic acid-mediated control of stomatal aperture. Current Opinion in Plant Biology. 28, 154-162 (2015).
- Förster, S., et al. Wounding-induced stomatal closure requires jasmonate-mediated activation of GORK K+ channels by a Ca2+ sensor-kinase CBL1-CIPK5 complex. Developmental Cell. 48 (1), 87-99 (2018).
- Cheng, Y. T., Zhang, L., He, S. Y. Plant-microbe interactions facing environmental challenge. Cell Host and Microbe. 26 (2), 183-192 (2019).
