레이어의 VIVO에서 2 광자 칼슘 이미징 마우스의 2 / 3
Summary
네크로 텍스의 microcircuits의 네트워크 역학을 이해하기 위해서는 동시에 뉴런의 다수의 활동을 기록하는 것이 필수적입니다. – 생체내에서 두 광자 칼슘 이미징 하나는 단일 셀 해상도 고밀도의 연결 인구의 활동을 기록하는 수있는 유일한 방법입니다.
Abstract
네크로 텍스의 microcircuits의 네트워크 역학을 이해하기 위해서는 동시에 뉴런의 다수의 활동을 기록하는 것이 필수적입니다. – 생체내에서 두 광자 칼슘 이미징 하나는 단일 셀 해상도 고밀도의 연결 인구의 활동을 기록하는 수있는 유일한 방법입니다. 방법은 뉴런의 큰 숫자에 의해 촬영하고 마지막에 – 생체내 두 광자 현미경을 사용하여 시간 저속 칼슘 이미징과 뉴런의 활동을 기록 할 수있는 형광 칼슘 지표 염료를 주입, 두개골 이미지 창을 이온 주입으로 구성되어 있습니다. astrocyte 특정 염료의 공동 주사 하나 astrocytes에서 뉴런을 차별화 할 수 있습니다. 기술은 더 나은 세포의 서로 다른 그룹의 네트워크 상호 작용을 이해하는 뉴런의 특정 subpopulations에 형광 분자를 표현 생쥐에서 수행할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
electrophysiological 녹음을 통해이 방법의 장점은 덜 침략하고 밀도의 연결의 연결을 네트워크에 활동의 기록을 허용한다는 것입니다. 이 절차를 수행할 때 그것은 두라을 손상하지 craniotomy를 수행할 때 극단적인 돌봐 기억하는 것이 중요 S. 과 경막하 출혈도 작은 금액은 크게 이미지를 흐릿하게.
Acknowledgements
우리는 칼슘 지표의 대량 로딩을 최적화에 도움이 토론에 대한 올가 Garaschuk을 인정하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
References
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
