साइट विशिष्ट Recombinase प्रौद्योगिकी (SSR) के सिद्धांतों
Summary
साइट विशिष्ट recombinase (SSR) प्रौद्योगिकी और Cre / lox प्रणाली के आगमन के आणविक जीव विज्ञान में कई अग्रिम करने के लिए नेतृत्व किया गया है, और खुद ट्रांसजेनिक पशुओं में जीन समारोह का आकलन करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में साबित. यह साक्षात्कार चक्रगति (Cre) recombinase और कैसे इस एंजाइम का उपयोग सशर्त mutagenesis, जो पारंपरिक रणनीतियों बाहर दस्तक से अधिक महत्वपूर्ण लाभ है के विकास के लिए नेतृत्व किया गया है द्वारा साइट विशिष्ट पुनर्संयोजन के तंत्र पर चर्चा.
Abstract
साइट – विशिष्ट recombinase प्रौद्योगिकी (SSR) जीन संरचना के हेरफेर जीन समारोह का पता लगाने के लिए अनुमति देता है और आणविक जीव विज्ञान के एक अभिन्न उपकरण बन गया है. साइट – विशिष्ट recombinases प्रोटीन है कि अलग डीएनए लक्ष्य दृश्यों के लिए बाध्य कर रहे हैं. Cre / lox प्रणाली पहले 1980 के दौरान bacteriophages में वर्णित किया गया था. Cre recombinase मैं topoisomerase एक प्रकार है कि दो loxP साइटों (एक्स से अधिक P1 के बिन्दुपथ) के बीच डीएनए की साइट विशिष्ट पुनर्संयोजन catalyzes है. Cre / lox प्रणाली किसी भी cofactors आवश्यकता नहीं है. LoxP दृश्यों Cre recombinases कि जहां पुनर्संयोजन और पुनर्व्यवस्था जगह लेता है एक दिशात्मक कोर अनुक्रम के चारों ओर बाध्यकारी साइटों के लिए अलग होते हैं. जब कोशिकाओं loxP साइटों होते हैं और Cre recombinase व्यक्त, एक पुनर्संयोजन घटना होती है. डबल असहाय डीएनए Cre recombinase द्वारा दोनों loxP साइटों पर काट रहा है, rearranged, और ligated ("कैंची और गोंद"). पुनर्संयोजन घटना के उत्पाद असममित दृश्यों के रिश्तेदार उन्मुखीकरण पर निर्भर करता है.
SSR प्रौद्योगिकी अक्सर जीन समारोह का पता लगाने के लिए एक उपकरण के रूप में प्रयोग किया जाता है. यहाँ हित के जीन Cre लक्ष्य साइटों loxP floxed ("") के साथ flanked है. पशु तो एक ऊतक विशेष के प्रमोटर के नियंत्रण के तहत Cre recombinase व्यक्त जानवरों के साथ पार कर रहे हैं. ऊतकों कि recombinase Cre व्यक्त में यह लक्ष्य दृश्यों के लिए बांध और floxed जीन excises. नियंत्रित जीन विलोपन जीन समारोह के विशिष्ट ऊतकों में और अलग समय बिंदुओं पर जांच की अनुमति देता है. जीन समारोह SSR — प्रौद्योगिकी सशर्त mutagenesis के रोजगार की विश्लेषण – पारंपरिक दस्तक बहिष्कार जहां जीन विलोपन अक्सर घातक है से अधिक महत्वपूर्ण लाभ है.
