Principer för platsspecifika Recombinase (SSR) Teknik

Summary

Tillkomsten av platsspecifika recombinase (SSR) teknik och Cre / lox system har lett till många framsteg inom molekylärbiologi och har visat sig vara ett värdefullt verktyg för bedömning av geners funktion i transgena djur. Denna intervju diskuterar mekanismen för platsspecifik rekombination av ringslutning recombinase (CRE) och hur användningen av detta enzym har lett till utvecklingen av villkorade mutagenes, vilket har betydande fördelar jämfört med traditionella slå ut strategier.

Abstract

Platsspecifika recombinase (SSR) teknik gör det möjligt att manipulera genstruktur att utforska geners funktion och har blivit en integrerad verktyg för molekylärbiologi. Platsspecifika recombinases är proteiner som binder till olika DNA-sekvenser mål. Den Cre / lox systemet beskrevs första gången bakteriofager under 1980-talet. Cre recombinase är en typ I topoisomeras som katalyserar platsspecifik rekombination av DNA mellan två loxP (locus för X-over P1) webbplatser. Den Cre / lox-systemet kräver inga kofaktorer. LoxP sekvenser innehåller olika bindningsställen för Cre recombinases som omger en riktad kärna sekvens där rekombination och ombildning sker. När celler innehåller loxP webbplatser och uttrycka Cre recombinase sker en rekombination händelse. Dubbelsträngat DNA klipps både loxP platser av Cre recombinase, ordnas och knyts ihop ("sax och lim"). Produkter av rekombination händelsen beror på den relativa orienteringen av asymmetriska sekvenser.

SSR-tekniken används ofta som ett verktyg för att undersöka geners funktion. Här genen av intresse flankeras med Cre mål sajter loxP ("floxed"). Djur är sedan korsat med djur som uttrycker Cre recombinase under kontroll av en vävnad-specifika promotorn. I vävnader som uttrycker Cre recombinase det binder till målet sekvenser och punktskatter på floxed genen. Kontrollerad gendeletion gör utredningen av geners funktion i specifika vävnader och vid olika tidpunkter. Analys av geners funktion anställa SSR teknik — villkorlig mutagenes – har betydande fördelar jämfört med traditionella knock-outs där gendeletion ofta dödlig.