Elektroforetische scheiding van eiwitten

Summary

In deze video tonen we een methode voor de elektroforetische scheiding van eiwitten met behulp van poly-acrylimide gelelektroforese (PAGE).

Abstract

Elektroforese wordt gebruikt om complexe mengsels van eiwitten (bijvoorbeeld van cellen, subcellulaire fracties, kolom breuken of immunoprecipitaten) te scheiden, om subunit composities te onderzoeken en om de homogeniteit van eiwit monsters te controleren. Het kan ook dienen om eiwitten te zuiveren voor gebruik in verdere toepassingen. In polyacrylamidegelelektroforese, eiwitten migreren als reactie op een elektrisch veld door de poriën in een polyacrylamide gel matrix; poriegrootte afneemt met toenemende acrylamide concentratie. De combinatie van poriegrootte en eiwit lading, de grootte en de vorm bepaalt de migratie snelheid van het eiwit. In deze unit, is de standaard Laemmli methode beschreven voor discontinue gelelektroforese onder denaturerende omstandigheden, dat wil zeggen, in het bijzijn van natriumdodecylsulfaat (SDS).

Protocol

De volledige tekst protocol voor deze experimentele aanpak is beschikbaar in Current Protocols in Molecular Biology .