Это видео демонстрирует процедуру для дифференциации миелоидных дендритных клеток из костного мозга мыши. Выделение мышью голени и бедра, и обработки костного мозга продемонстрировано. Картинки демонстрируя морфологии клеток до и после дифференциации, и цифры изображением фенотип клетки и Ил-12 производства после созревания использованием CpG показаны.
Abstract
Миелоидного дендритные клетки (ДК), часто используются для изучения взаимодействия врожденных и адаптивных иммунных механизмов и ранний ответ на инфекцию. Потому что это самый мощный антиген представляющих клеток, ЦОДов все чаще используются в качестве вакцины для изучения вектор индукции антиген-специфического иммунного ответа. В этом видео мы продемонстрируем процедуры для уборки большеберцовые кости и бедра от донора мыши, обработки костного мозга и дифференциации контроллеры домена в пробирке. Свойства изменение домена после стимуляции: незрелые дендритные клетки являются мощным фагоцитов, в то время как зрелые РС способны презентации антигена и взаимодействия с CD4 + и CD8 + Т-клеток. Это изменение функциональной активности соответствует регуляция клеточных поверхностных маркеров и продукции цитокинов. Многие агенты могут быть использованы для зрелой контроллеры домена, включая цитокины и звонок, как лиганды рецептора. В этом видео, мы демонстрируем проточной цитометрии сравнения выражения двух костимулирующих молекул CD86 и CD40, и цитокинов, IL-12, после стимуляции ночь с CpG или макет лечения. После дифференциации, контроллеры домена могут быть дополнительно манипулировать для использования в качестве вакцины вектора или генерировать антиген-специфического иммунного ответа в процессе искусственного пульсирующий использованием пептиды или белки, или трансдуцированных с использованием рекомбинантной вирусных векторов.
Protocol
Этот протокол был адаптирован с Lutz и др. 1. Урожай и обработки костного мозга Выделение голени и бедра: усыпить доноров мыши и спрей ноги с 70% этанола. Возьмите первый лодыжки прочно с тупыми щипцами и начинают срезать кожи и подлежащих мышц подвергать…
Discussion
Контроллеры домена являются полезными для исследования врожденных и адаптивных иммунных взаимодействий, и может быть использован в качестве вакцины вектор. В этом видео, мы продемонстрировали шагов, чтобы изолировать костного мозга и дифференциации миелоидных дендритных клеток в пробирке. Пос?…
Acknowledgements
JB поддерживается studentships с естественным наукам и инженерным исследованиям Совета (NSERC). Поддержка данного проекта была предоставлена канадского института исследований в области здравоохранения, Грант СС-67066.
Boudreau, J., Koshy, S., Cummings, D., Wan, Y. Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors. J. Vis. Exp. (17), e769, doi:10.3791/769 (2008).