Szybkie Technika Wizualizacja żywo unieruchomionych komórek drożdży
Summary
Szybkie techniki wizualizacji coraz unieruchomionych komórek drożdży, tutaj stosowane do świetlówek dziennikarzom w cichej krycia loci HML i HMR
Abstract
Prezentujemy proste, szybkie i bardzo elastyczne technikę do immobilizacji i wizualizacji rosnących komórek drożdży epifluorescencją mikroskopii. Technika jest odpowiedni zarówno do wizualizacji statycznych populacji drożdży i eksperymentów kursy czas do dziesięciu godzin w długości. My mikroskopii bada Dziedziczenie epigenetyczne w cichej loci krycia w S. cerevisiae. Istnieją dwa ciche loci krycia, HML i HMR, które nie są normalnie wyrażane są one pakowane w heterochromatyny. W sir1 wyciszanie mutant tle jest osłabiony tak, że każdy locus może być w wyraźnych lub wyciszony stan epigenetyczne, więc w całej populacji jest połączenie komórki z różnych państw epigenetyczne dla HML i HMR. My mikroskopia wykazała, że nie ma żadnego związku między epigenetyczne stan HML i HMR w poszczególnych komórek. sir1 komórek stochastycznie przełącznik epigenetyczne państwa, ustanawiający wyciszania na wcześniej wyrażone locus lub wyrażając wcześniej wyciszony locus. My mikroskopii oczywiście czas śledzone poszczególnych sir1 komórek i ich potomstwa na zdobycie częstotliwości każdego z czterech możliwych przełączników epigenetyczne, a tym samym stabilność każdego z państw epigenetyczne w sir1 komórek. Zobacz także Xu et al. Mol. Piosenki 2006 roku.
Protocol
Discussion
Jest to szybka technika, która unieruchamia komórek drożdży, umożliwiając jednocześnie wzrostu. Śledzimy rozwój drożdży do dziesięciu godzin, z drożdży wyświetlania dzikich stóp podział typu w trakcie eksperymentu. Zauważ, że ta instalacja wymaga obiektywu być pod sceną mikroskopem.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Chcielibyśmy podziękować Pete Houston i Eugenia Xu za pomoc.
References
- Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).
