Una técnica rápida para la visualización en vivo de las células de levadura inmovilizada
Summary
Una técnica rápida para la visualización de crecimiento de las células de levadura inmovilizada, aquí se aplica a los reporteros fluorescentes en el silencio de apareamiento loci HML y HMR
Abstract
Presentamos aquí una técnica sencilla, rápida y extremadamente flexible para la inmovilización y la visualización de las células de levadura crece por microscopía de epifluorescencia. La técnica es ideal para la visualización de las poblaciones de levadura estática, o experimentos de los cursos de tiempo de hasta diez horas de duración. Mi microscopio investiga la herencia epigenética en los loci de apareamiento en silencio en S. cerevisiae. Hay dos loci de apareamiento en silencio, HML y HMR, que normalmente no se expresan como están empaquetadas en heterocromatina. En el silencio de fondo SIR1 mutante se ha debilitado de tal manera que cada lugar puede ser en el estado expresados o silenciados epigenética, por lo que en la población en su conjunto hay una mezcla de células de los diferentes estados epigenéticos, tanto para HML y HMR. Mi microscopio demostró que no hay relación entre el estado epigenético de HML y HMR en una celda individual. SIR1 células estocásticamente cambiar estados epigenéticos, el establecimiento de silenciar a un lugar previamente expresada o expresar un lugar antes silenciadas. Mi evolución en el tiempo un seguimiento de microscopía individuales SIR1 las células y su descendencia para anotar la frecuencia de cada uno de los cuatro interruptores epigenéticos es posible, y por lo tanto la estabilidad de cada uno de los estados epigenéticos en las células SIR1. Véase también Xu et al., Mol. Celular 2006.
Protocol
Discussion
Esta es una técnica rápida que inmoviliza a las células de levadura al tiempo que permite el crecimiento. Hemos seguido el crecimiento de levadura para un máximo de diez horas, con la levadura salvaje mostrando tasas de la división de tipo durante todo el experimento. Tenga en cuenta que esta configuración requiere que la lente del objetivo por debajo de la platina del microscopio.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nos gustaría dar las gracias a Pete Houston y Xu Eugenia por toda su ayuda.
References
- Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).
