תרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס של חולדות P0 יילוד
Summary
דיסקציה וצמיחה של תאים מאזור המוח הפרט מאפשר חקירה של פרמטרים פיזיולוגיים הסלולר. אנו מתארים שיטה culturing התא הראשוני שמייצר נוירון מועשר תרבויות בסביבה בסרום חופשי.
Abstract
המאפיינים הפיזיולוגיים של נוירונים בהיפוקמפוס נחקרות כלל, בעיקר בגלל מעורבותו של ההיפוקמפוס בלמידה ובזיכרון. תא ראשי culturing בהיפוקמפוס מאפשר מדעני מוח כדי לבחון את פעילות ומאפיינים של הנוירונים בתא הבודד וברמת סינפסה אחת. בסרטון זה נדגים כיצד לבודד ולגדל תאים בהיפוקמפוס של חולדות ראשוני לרך הנולד. ההיפוקמפוס עשוי להיות מבודד כל חיה הנולד בקיצור כמו 2 עד 3 דקות, ואת התרבויות יכול להישמר לתקופה של עד שבועיים. אנו גם בקצרה להדגים כיצד להשתמש אלה נוירונים בהיפוקמפוס הדמיה סידן ratiometric. בעוד פרוטוקול זה מתאר את התהליך עבור בהיפוקמפוס, עם קצת שינוי לא, זה יכול להיות מיושם על אזורים אחרים של המוח.
Protocol
Discussion
פרוטוקול זה פותח כשינוי העבודה הזרע של גארי בנקאי וקים Goslin 1. ספר זה הוא משאב חיוני עבור מי שמעוניין תאים culturing – לא רק נוירון מועשר תרבויות המתואר בפרוטוקול הנוכחי.
שלושת הגורמים הקריטיים ביותר culturing התא הם: עקרות מהירות, הבחירה של שימוש בינוני.
<p…Acknowledgements
JLN נתמכה על ידי MH 68347.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Antibiotic antimitotic | Invitrogen | 15240062 | ||
| B-27 Supplement | Invitrogen | 17504044 | Serum free | |
| Boric Acid | Sigma | B6768 | ||
| Dnase I | Sigma | DN25 | ||
| Fura-2, AM cell permeant | Molecular Probes | F1221 | ||
| Glucose | Sigma | G7528 | ||
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | ||
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | ||
| L-Glutamine | Sigma | G7513 | ||
| MEM | Invitrogen | 51200038 | ||
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | Without phenol red | |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma | P6282 | ||
| Pyruvic Acid | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Pyruvate | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Tetraborate | Sigma | |||
| Trypsin, 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
