P0新生児ラットからの海馬ニューロンの初代培養

Summary

解剖や個々の脳領域からの細胞の増殖は、細胞と生理的パラメータの調査を容易にします。我々は、無血清環境でのニューロンに富んだ文化を生産する主要な細胞培養のための方法を説明します。

Abstract

海馬ニューロンの生理学的特性は、一般的には、特に理由の学習と記憶における海馬の関与が、研究されています。主海馬細胞の培養は、神経科学者は、個々の細胞と単シナプスレベルでのニューロンの活性および特性を調べることができます。このビデオでは、我々は、新生児ラットから主海馬細胞を分離し、成長する方法を紹介します。海馬は2〜3分ほどの短い内の各新生児の動物から単離することが、文化は最大2週間のために維持することができます。我々はまた、簡単にレシオメトリックカルシウムイメージングのためのこれらの海馬神経細胞を使用する方法について説明します。このプロトコルは、修正なしに少しと、海馬のためのプロセスを説明しながら、それは脳の他の地域に適用することができます。

Protocol

海馬分離に先立って海馬の分離を開始する前に、すべてのツールが無菌であることを確認してください。 70％エタノールで文化のフードを下にスプレーし、及びフード内のツールを配置します。と10cmのシャーレ、滅菌ポリ- Lコーティングされたガラス製カバースリップ、ピペッターやヒント、使い捨てピペット、および電動ピペッター – あなたは6が必要になります。この?…

Discussion

このプロトコルは、ゲイリーバンカーと金ゴズリン¹の精液の仕事の修正として開発されました。この本は、培養細胞に興味を持つ人にとって不可欠な資源です – だけでなく、ニューロンに富んだ文化が現在のプロトコルで説明しています。

細胞培養における三大重要な要素は、次のとおりです。不妊、速度、使用する培地の選択。

無菌性 -層流/無菌フード、無菌条件、およ…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046