P0 नवजात चूहे से hippocampal न्यूरॉन्स के प्राथमिक संस्कृति
Summary
विच्छेदन और एक व्यक्ति के मस्तिष्क क्षेत्र से कोशिकाओं के विकास के सेलुलर और शारीरिक मापदंडों की जांच की सुविधा. हम है कि एक सीरम मुक्त वातावरण में न्यूरॉन – समृद्ध संस्कृतियों का उत्पादन प्राथमिक कोशिका संवर्धन के लिए एक विधि का वर्णन.
Abstract
hippocampal न्यूरॉन्स के शारीरिक गुणों आमतौर पर विशेष रूप से सीखने और स्मृति में हिप्पोकैम्पस की भागीदारी की वजह से जांच कर रहे हैं. प्राथमिक hippocampal सेल संवर्धन neuroscientists गतिविधि और व्यक्तिगत सेल और एकल synapse स्तर पर न्यूरॉन्स के गुणों की जांच करने के लिए अनुमति देता है. इस वीडियो में, हम प्रदर्शन करेंगे कैसे अलग करने के लिए और नवजात चूहों से प्राथमिक hippocampal कोशिकाओं के विकास. हिप्पोकैम्पस के रूप में 2 से 3 मिनट के रूप में संक्षेप में प्रत्येक नवजात पशु से अलग हो सकता है, और संस्कृतियों को अधिक से अधिक दो सप्ताह के लिए के लिए बनाए रखा जा सकता है. हम भी संक्षेप में प्रदर्शन कैसे ratiometric कैल्शियम इमेजिंग के लिए इन hippocampal न्यूरॉन्स का उपयोग करने के लिए होगा. जबकि इस प्रोटोकॉल हिप्पोकैम्पस के लिए प्रक्रिया का वर्णन है, कोई संशोधन करने के लिए थोड़ा के साथ, यह मस्तिष्क के अन्य क्षेत्रों के लिए लागू किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल गैरी बैंकर और किम Goslin एक मौलिक काम के एक संशोधन के रूप में विकसित किया गया था. इस पुस्तक संवर्धन कोशिकाओं में रुचि किसी के लिए एक आवश्यक संसाधन है – न केवल न्यूरॉन समृद्ध संस्कृतियों वर्तमान प्र?…
Acknowledgements
JLN महाराष्ट्र 68347 के द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Antibiotic antimitotic | Invitrogen | 15240062 | ||
| B-27 Supplement | Invitrogen | 17504044 | Serum free | |
| Boric Acid | Sigma | B6768 | ||
| Dnase I | Sigma | DN25 | ||
| Fura-2, AM cell permeant | Molecular Probes | F1221 | ||
| Glucose | Sigma | G7528 | ||
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | ||
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | ||
| L-Glutamine | Sigma | G7513 | ||
| MEM | Invitrogen | 51200038 | ||
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | Without phenol red | |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma | P6282 | ||
| Pyruvic Acid | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Pyruvate | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Tetraborate | Sigma | |||
| Trypsin, 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
