조기 칙 태아 예 생체내 (새로운 문화)의 문화에 대한 방법
Summary
이 비디오는 새로운 문화, 병아리의 배아는 최대 24 시간까지 계란 이외의 양식하는가하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 초기 개발 (14 솜으로 원시적인 승리.) 마우스 E7 – 9에 해당하는 기간 동안 공부를 하나 있습니다. 이 기술의 응용은 현장 하이브리드화과 immunohistochemistry에 electroporation을 포함합니다.
Abstract
여자의 난자는 초기 배아 발달의 연구에 귀중한 도구입니다. 투명성, 접근성 및 조작 용이성, 그건 뇌, 신경 튜브, 체절과 심장 primordia의 형성과 patterning을 공부를위한 이상적인 도구가합니다. 여자는 배아 문화의 응용 프로그램은 현장 하이브리드화과 immunohistochemistry의 유전자 기능 등 FGFs 및 BMPs와 같은 성장 인자 코팅 구슬 이식뿐만 아니라 전체 마운트를 분석하기 위해 DNA 또는 RNA 구조의 electroporation을 포함합니다. 이 비디오는 여자의 배아 문화의 여러 단계를 보여주는, 첫째, 배아는 호수에 explanted 있습니다. 그런 다음, 배 (胚)는 유리 반지를 중심으로합니다. 배아를 둘러싼 세포막은 반지의 벽면을 따라 해제됩니다. 반지는 다음 albumine의 수영장이 포함된 문화 접시에 배치됩니다. 배아는 최대 24 시간까지 교양있는 곳을 문화 요리는 밀봉하여 습기가 실내에 배치됩니다. 마지막으로, 배아는 반지에서 제거 고정 더욱 응용 프로그램에 처리됩니다. 문제 해결 가이드도 제공됩니다.
Protocol
Discussion
새로운 문화 방법 2 원위치 하이브리드화 및 전체 마운트 immunohistochemistry 4 전체 마운트 구슬 3, 포함하는 성장 인자의 이식에 이르기까지 애플 리케이션의 광범위한 사용하실 수 있습니다. 24 시간 기간 동안 문화는 시간 저속 세포의 움직임 분석 5 GFP 6 electroporated 구조를 포함하는 모니터링과 같은 어플 리케이션에서 배아 개발의 지속적인 모니터링이 가능?…
Acknowledgements
이 작품은 RHF에 마가렛 M. 알켁 재단에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Charles River Laboratories | Premium Fertile | |
| Stereomicroscope | Microscope | Leica Microsystems | MZ9.5 or similar | |
| Marsh Automatic Incubator | Tool | Lyon | RX | |
| Hybridization Incubator | Tool | Robbins Scientific | M1000 | |
| Pyrex dish (2) | Tool | |||
| Watchmaker’s glass 50mm | Tool | VWR | 66112-060 | |
| Glass rings | Tool | Physical Plant facility | cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish. | |
| Curved Forceps (1) | Surgery | Electron Microscopy Sciences | 72991-4C | |
| Forceps (2) | Surgery | Fine Science Tools | 11002-13 | blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil |
| Sharpening Stone Dan’s Black Arkansas | Surgery | Electron Microscopy Sciences | 62082-00 | |
| Fine scissors | Surgery | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| Plastic dishes | Tool | Falcon | 353001 | |
| Rubber Bulb | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70980 | |
| Pasteur Capillary Pipette | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70950-12 | round edge under flame |
| Microcapillary tube | Surgery | Sigma | P1049-1PAK | Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps |
| Microdissecting knife | Surgery | Fine Science Tools | 10056-12 | Use to puncture cavities prior to in situ hybridization |
| Minuten pins 0.2mm diam | Surgery | Fine Science Tools | 26002-20 | |
| Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base | Reagent | Dow Corning | 0001986475 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C |
| Diethylpyrocarbonate (depc) | Reagent | Acros Organics | 10025025 | Add 1ml depc to 1l PBS; shake; autoclave |
References
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- New, D. T. A new technique for the cultivation of the chick embryo in vitro. J. Embryol. Exp. Morph. 3, 326-331 (1955).
- Alvarez, I. S., Araujo, M., Nieto, M. A. Neural induction in whole chick embryo cultures by FGF. Dev. Biol. 199, 42-54 (1998).
- Psychoyos, D., Stern, C. D. Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen’s node and the anterior primitive streak in the chick embryo. Development. 122, 3263-3273 (1996).
- Psychoyos, D., Stern, C. D. Fates and migratory routes of primitive streak cells in the chick embryo. Development. 122, 1523-1534 (1996).
- Voiculescu, O., Papanayotou, C., Stern, C. D. Spatially and temporally controlled electroporation of early chick embryos. Nature Protoc. 3, 419-426 (2008).
