इमेजिंग दत्तक डीटीएच की प्रेरण के बाद effector मेमोरी कान में टी कोशिकाओं
Summary
यहाँ हम उत्प्रेरण और रिकॉर्डिंग एक विलंबित प्रकार hypersensitivity प्रतिक्रिया चूहे के कान में (डीटीएच) की प्रगति के लिए एक विधि का प्रदर्शन. यह effector / स्मृति टी सेल प्रतिक्रिया की दो photon इमेजिंग के लिए चूहे कान ऊतक की तैयारी के एक प्रदर्शन के द्वारा पीछा किया जाता है.
Abstract
– विलंबित प्रकार hypersensitivity (डीटीएच) एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है जिसमें मुख्य खिलाड़ियों CCR7 हैं effector / स्मृति टी lymphocytes है . यहाँ, हम उत्प्रेरण और रिकॉर्डिंग चूहे के कान में एक डीटीएच प्रतिक्रिया की प्रगति के लिए एक विधि का प्रदर्शन. Effector स्मृति / टी सेल प्रतिक्रिया – यह CCR7 के दो photon इमेजिंग के लिए चूहे कान ऊतक की तैयारी के एक प्रदर्शन के द्वारा पीछा किया जाता है.
Effector स्मृति / टी सेल लाइन (Beeton, सी जे visualized प्रयोगों, 8 अंक) – एक दत्तक डीटीएच GFP लेबल OVA विशेष CCR7 के intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा प्रेरित है. कोशिकाओं तो चूहे में खारा (नियंत्रण कान) और अन्य के साथ एक 1:1 OVA और OVA संयुग्मित टेक्सास लाल मिश्रण (OVA-टी.आर.) के साथ एक कान के दृश्य की अनुमति इंजेक्शन द्वारा 48 घंटे के लिए चुनौती पहले संतुलित करने के लिए अनुमति दी जाती है निवासी प्रतिजन कोशिकाओं पेश की.
हम ऊतक एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के दौरान गहरी त्वचीय कोलेजन फाइबर के दूसरे हार्मोनिक पीढ़ी द्वारा दृश्य के साथ संयोजन के रूप में, परत के भीतर कोशिकाओं की गतिशीलता इमेजिंग के लिए उपयोगी तैयारी की एक विधि का वर्णन. कान ऊतक 5 एक्स 5 मिमी वर्गों (थोड़ा बड़ा बेहतर है) में कटौती की है और प्लास्टिक कवर Vetbond ™ का उपयोग कर निकल जाता है, जो तब एक इमेजिंग कक्ष में सिलिकॉन तेल का उपयोग सुरक्षित हैं और 37 में ऑक्सीजन bubbled टिशू कल्चर माध्यम द्वारा superfused पर मुहिम शुरू की डिग्री सेल्सियस .
Protocol
References
- Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
- Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B. Eosinophil activation and T lymphocyte infiltration in allergen-induced late phase skin reactions and classical delayed-type hypersensitivity. J Immunol. 147, 816-822 (1991).
- Flugel, A., Odoardi, F., Nosov, M., Kawakami, N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 191, 86-97 (2007).
- Kawakami, N., et al. Live imaging of effector cell trafficking and autoantigen recognition within the unfolding autoimmune encephalomyelitis lesion. J Exp Med. 201, 1805-1814 (2005).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node. Science. 296, 1869-1873 (2002).
- Matheu, M. P. B., A, C. G. a. r. c. i. a., Chi, V., Rangaraju, S., Safrina, O., Monaghan, K., Uemura, M. I., Li, D., Pal, S., Monuki, E., Flugel, A., Pennington, M. W., Parker, I., Chandy, G. K., Calahan, M. D. In Situ Imaging of Effector/Memory T Cells During DTH and Suppression by Kv1.3 Channel Block. Immunity. , (2008).
