نحن هنا يبرهن على وجود طريقة لحمل وتسجيل التقدم المحرز في رد فعل متأخر (DTH) نوع فرط في الأذن الفئران. اعقب ذلك عرض لإعداد الأنسجة الأذن الفئران لتصوير ثنائي الفوتون من المستجيب / الذاكرة استجابة الخلايا التائية.
Abstract
تأخر فرط نوع (DTH) هو رد الفعل المناعي الذي اللاعبين الرئيسيين هم CCR7 — المستجيب / اللمفاويات التائية الذاكرة. هنا ، علينا أن نظهر وسيلة لحفز التقدم وتسجيل ردود فعل من البيوت في الأذن الفئران. اعقب ذلك عرض لإعداد الأنسجة الأذن الفئران لتصوير اثنين من الفوتون CCR7 — المستجيب / الذاكرة استجابة الخلايا التائية.
هو أحد البيوت التي يسببها بالتبني من قبل حقن داخل الصفاق من GFP المسمى البويضات محددة CCR7 — المستجيب / الذاكرة خط الخلايا التائية (Beeton ، C J. التجارب متصور ، العدد 8). ثم يتم السماح للتوازن الخلايا في الفئران لمدة 48 ساعة قبل التحدي عن طريق حقن أذن واحدة مع المياه المالحة (مراقبة الأذن) ، والآخر مع مزيج من مترافق 01:01 البويضات والبويضات الى تكساس الأحمر (OVA – TR) للسماح التصور الخلايا مستضد تقديم المقيمين.
نحن تصف طريقة لإعداد الأنسجة مفيدة لتصوير حركية من خلايا داخل طبقة الجلد العميقة خلال استجابة مناعية ، بالاشتراك مع التصور من ألياف الكولاجين التي التوافقي الجيل الثاني. يتم قطع نسيج الأذن إلى 5 مم X المربعات 5 (أكبر قليلا هو أفضل) والتي شنت على غطاء بلاستيكي باستخدام قسائم Vetbond ™ ، والتي يتم تأمينها ثم استخدام الشحوم سيليكون في غرفة التصوير وsuperfused بواسطة الأكسجين فقاعات نسيج الثقافة في المتوسط 37 درجة مئوية .
Protocol
تحريض DTH بالتبني الرجاء راجع المقالة إن الرب : الاستقراء والرصد من فرط الحساسية المتأخرة نوع بالتبني في الفئران كريستين Beeton جورج ك. شاندي قسم الفسيولوجيا والفيزياء الحيوية في جامعة كاليفورني…
Matheu, M. P., Beeton, C., Parker, I., Chandy, K. G., D. Cahalan, M. Imaging Effector Memory T cells in the Ear After Induction of Adoptive DTH. J. Vis. Exp. (18), e907, doi:10.3791/907 (2008).