A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:00Title
- 00:31Introduction
- 01:05Preparing the pPICZaA Construct
- 02:18Preparation of Electrocompetent Yeast Cells
- 04:04Transformation by Electroporation
- 06:06Protein Expression in Pichia pastoris
- 08:42Results of Recombinant Protein Expression
- 09:02Conclusion
Het protocol beschrijft het gebruik van de eiwitexpressie methylotrofe gist<em> Pichia pastoris</em>. De voorbereiding van elektrocompetente gistcellen, transformatie van de vector met het gen van interesse in<em> P. pastoris</em> En gist DNA-zuivering zijn ook uitgevoerd. Western blot analyse en eiwit zuivering te bouwen de laatste stappen in dit eiwit expressie protocol.
Tags
Recombinant ProteinsPichia PastorisProtein ExpressionMethylotrophic YeastExpression SystemPost-translational ModificationsProtein FoldingProteolytic ProcessingDisulfide Bond FormationGlycosylationMethanol MetabolismAlcohol Oxidase PromoterMethanol InductionSecretion Of Recombinant ProteinSignal SequenceHeterologous ProteinProtein PurificationVector
