Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Zu Beginn, legen Sie fünf Larven in jeder Spur einer sechsspurigen Agarose Platte. Fügen Sie zusätzliches Eiwasser, aber nicht überfüllen die Gassen. Eiwasser enthält Methylenblau, das Schimmelwachstum verhindert. Lassen Sie die Larven akklimatisieren für mindestens 10 Minuten, um ihren Stress zu reduzieren.
Legen Sie nun die Brunnenplatte in eine Bildkammer über einen Laptop-Bildschirm. Fokussieren Sie die Kamera auf die Brunnenplatte. Füllen Sie die Gasse komplett mit Eiwasser.
Als nächstes notieren Sie das Verhalten der Larven auf dem leeren Hintergrund platziert, indem Sie Zeitraffer-Bilder. Zeigen Sie eine bewegliche rote Leiste auf dem Laptop-Bildschirm, und nehmen Sie Zeitraffer Bilder der Larven als Reaktion auf die bewegliche rote Leiste.
Die rote Form wird als Bedrohung, als aversiver Reiz wahrgenommen und verursacht den Larvenstress. Als Reaktion darauf meiden sie die Bar und zeigen positive Thigmotaxis. Positive Thigmotaxis ist die Reaktion des Fisches auf den Reiz, der Kontakt mit der Wand sucht und am Rand der Gasse schwimmt.
Im Beispielprotokoll analysieren wir die Vermeidung und thigmotaktische Natotoren von Zebrafischlarven, die mit pharmazeutischen Verbindungen oder Umweltgiften behandelt werden.
- Um mit der Bildaufnahme zu beginnen, bewegen Sie vorsichtig die Larven von der Petrischale in die Agarose-Gasse, um Larvenstress zu reduzieren. Bis zu 20 Larven können in jeder Spur platziert werden, aber fünf Larven pro Spur werden in der Regel verwendet, um die genaueste Verfolgung der Schwimmgeschwindigkeit zu erleichtern und die Anzahl der Larven zu reduzieren, die pro Experiment benötigt werden.
Füllen Sie die Bahnen mit Eiwasser mit oder ohne Pharmazeutika oder Giftstoffe je nach Experiment. Füllen Sie die Bahnen nicht bis zur Platzierung in den Bildschränken, um überlaufende Bahnen zu verhindern. Lassen Sie 10 Minuten für die Larven zu akklimatisieren. Nach der Akklimatisierungsphase positionieren Sie vier Platten von Hand direkt auf dem Laptop-Bildschirm.
Zu diesem Zeitpunkt können die Bahnen mit Eiwasser oder chemischer Behandlung abgerundet werden, so dass es mit der Oberseite der Spur eben ist, um Schatten an den Rändern der Bahnen in den Bildern zu beseitigen.
Programmieren Sie den Computer für die Zeitrafferfotografie und machen Sie alle sechs Sekunden Bilder für insgesamt 300 Bilder pro Experiment. Stellen Sie die Kamera auf eine niedrigere Auflösung für die Bildgebung bei Videogeschwindigkeit. Während die niedrigere Auflösung die Aufnahmen auf eine einzige Multi-Well-Platte begrenzt, eignen sich die Videoaufnahmen für die Abbildung von schnellen Schwimmereignissen.
Verwenden Sie eine PowerPoint-Präsentation als aversiven Stimulus für die Larven. In dieser Demonstration beginnt die PowerPoint mit einem leeren weißen Hintergrund für 15 Minuten, gefolgt von 15 Minuten eines beweglichen roten Balkens auf der oberen Hälfte der Platte. Um eine Verdunstung der Flüssigkeit innerhalb der Agarosespuren zu vermeiden, halten Sie die maximale Bildzeit auf unter einer Stunde.
