한천 장착: 장기 이미징을 위한 살아있는 제브라피시 배아 를 장착하는 기본 방법

- 아가로즈가 완전히 녹을 때까지 E3 배지를 낮은 융점 아가로즈와 가열하여 시작합니다. 아가로즈를 섭씨 37도로 냉각하고 트리카인 용액을 첨가합니다. 다음으로, E3 배지에 배아를 함유하는 페트리 접시에 트리카인을 첨가하여 배아를 마취한다.

이송 파이펫을 사용하여, 최소한의 배지로 하나의 배아를 잡아서 파이펫 의 끝에 배치배아를 바운스. 이제 아가로즈를 희석시키고 겔화를 방지할 여분의 배지를 추가하지 않고 아가로즈 용액에 배아를 배치합니다.

플레이트를 현미경 아래에 놓고 파이펫 팁을 사용하여 배아를 원하는 방향으로 배치합니다. 아가로즈가 고화되면, 아가를 수화시키고 배아를 이미지화하기 위해 트리카인을 함유한 E3 배지를 부어 배아를 이미지화합니다.

융합된 배아의 이미지를 획득하려면 0.8% 낮은 융점 아가로즈를 준비한다. 여전히 뜨거운 동안, 아가로즈의 1 밀리리터는 섭씨 37도 가열 블록에 설정 1.5 밀리리터 미세 분리 튜브.

그런 다음 넓은 기울어진 플라스틱 전송 파이펫을 사용하여, 배아를 가능한 한 적게 액체로 끌어들입니다. 다음으로 파이펫을 똑바로 돌리고 배아를 부드럽게 바운스하여 파이펫의 맨 바닥에 정착합니다.

그런 다음 파이펫을 사용하여 아가로즈와 배아를 유리 바닥 6웰 플레이트의 우물로 옮겨 놓습니다. 스테레오 현미경하에서, 괴롭히는 바늘의 끝에 고정된 젤 로딩 팁을 사용하여 배아를 커버 유리에 가깝게 배치하고 이미징을 위한 원하는 방향으로 배치합니다.

전체 배아 시야에 대해 4배 주관적인 특성을 사용하십시오. 20배 의 목표를 사용하여 특정 조직을 이미지화합니다.