Journal
/
Biology
/
Identifisering av protein komplekser i<em> Escherichia coli</em> Med sekvensiell Peptide affinitetsrensing i kombinasjon med tandem massespektrometri
JoVE Journal
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biology
Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

Identifisering av protein komplekser i<em> Escherichia coli</em> Med sekvensiell Peptide affinitetsrensing i kombinasjon med tandem massespektrometri

DOI:
10.3791/4057-v

•

14:58 min

•

November 12, 2012

•

, , , ,
1Banting and Best Department of Medical Research, Donnelly Centre,University of Toronto, 2Deparment of Biochemistry, Research and Innovation Centre,University of Regina, 3Department of Medical Genetics and Microbiology,University of Toronto

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
  • 03:54Culturing and Sonication
  • 05:26Affinity Purification
  • 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
  • 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
  • 11:02Results
  • 14:27Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Affinitetsrensing av kodede proteiner i kombinasjon med massespektrometri (APMS) er en kraftig metode for systematisk kartlegging av protein interaksjon nettverk og for å undersøke den mekanistiske grunnlag av biologiske prosesser. Her beskriver vi en optimalisert sekvensiell peptid affinitet (SPA) APMS prosedyre utviklet for bakterien<em> Escherichia coli</em> Som kan brukes til å isolere og karakterisere stabile multi-protein komplekser til nær homogenitet selv starter fra lave kopiere numre per celle.

Tags

Protein ComplexesEscherichia ColiSequential Peptide Affinity PurificationTandem Mass SpectrometryProtein-protein InteractionsSubunit CompositionGene FunctionBiological SystemsAffinity PurificationMass SpectrometryChromosomally-tagged ProteinsCarboxy-terminal Sequential Peptide Affinity (SPA) Dual Tagging SystemGram-negative Escherichia ColiGenetically-tractable Host Laboratory StrainsGenome-wide InvestigationsProkaryotesTandem Affinity Purification MethodCalmodulin Binding Peptide (CBP)Tobacco Etch Virus

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/4057?article_type=v

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae
check_url/4057?article_type=v

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid
check_url/4057?article_type=v

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAΔ41
check_url/4057?article_type=v

Analyzing Large Protein Complexes by Structural Mass Spectrometry
check_url/4057?article_type=v

Quantification of Proteins Using Peptide Immunoaffinity Enrichment Coupled with Mass Spectrometry
check_url/4057?article_type=v

Identifisering av Protein Samspill Partners Bruke Tandem Affinity Rensing
check_url/4057?article_type=v

En protokoll for identifikasjon av protein-protein interaksjoner Basert på<sup> 15</sup> N Metabolsk Merking, Immunoutfellingsanalyse, Quantitative massespektrometri og Affinity Modulation
check_url/4057?article_type=v

Identifisere Protein-protein samhandling i<em> Drosophila</em> Voksen Heads av Tandem Affinitetsrensing (TAP)
check_url/4057?article_type=v

Identifisering av Post-translasjonell Modifikasjoner av Plant Protein komplekser
check_url/4057?article_type=v

Ikke-kromatografisk rensing av rekombinant Elastin-lignende polypeptider og deres Fusjoner med peptider og proteiner fra<em> Escherichia coli</em

Read Article