Journal
/
Biology
/
Protein Kompleksi belirlenmesi<em> Escherichia coli</em> Tandem Kütle Spektrometresi ile Kombine Sıralı Peptid Affinity Arıtma kullanarak
JoVE Journal
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biology
Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Protein Kompleksi belirlenmesi<em> Escherichia coli</em> Tandem Kütle Spektrometresi ile Kombine Sıralı Peptid Affinity Arıtma kullanarak

DOI:
10.3791/4057-v

•

14:58 min

•

November 12, 2012

•

, , , ,
1Banting and Best Department of Medical Research, Donnelly Centre,University of Toronto, 2Deparment of Biochemistry, Research and Innovation Centre,University of Regina, 3Department of Medical Genetics and Microbiology,University of Toronto

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
  • 03:54Culturing and Sonication
  • 05:26Affinity Purification
  • 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
  • 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
  • 11:02Results
  • 14:27Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Kütle spektrometrisi (antipersonel mayınları) ile kombinasyon halinde etiketli proteinlerin saflaştırılması Affinity protein etkileşimi ağların sistematik eşleme için ve biyolojik süreçlerin mekanistik temeli araştırmak için güçlü bir yöntem. Burada, bakteri için geliştirilmiş optimize edilmiş sıralı peptid afinite (SPA) antipersonel mayınları prosedürü tarif<em> Escherichia coli</em> Bile hücre başına düşük kopya sayıları başlayarak yakın homojenliği kararlı multi-protein kompleksleri izole ve karakterize etmek için kullanılan olabilir.

Tags

Protein ComplexesEscherichia ColiSequential Peptide Affinity PurificationTandem Mass SpectrometryProtein-protein InteractionsSubunit CompositionGene FunctionBiological SystemsAffinity PurificationMass SpectrometryChromosomally-tagged ProteinsCarboxy-terminal Sequential Peptide Affinity (SPA) Dual Tagging SystemGram-negative Escherichia ColiGenetically-tractable Host Laboratory StrainsGenome-wide InvestigationsProkaryotesTandem Affinity Purification MethodCalmodulin Binding Peptide (CBP)Tobacco Etch Virus

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/4057?article_type=v

S. cerevisiae, kantitatif proteomik protein kompleksleri tanımlanması
check_url/4057?article_type=v

Organik Solvent ve Asetik Asit olmadan Jeller Coomassie G-250 ile Proteinlerin Boyama
check_url/4057?article_type=v

Saflaştırılması M. magneticum Deformasyon AMB-1 Magnetosome İlişkili Protein MamAΔ41
check_url/4057?article_type=v

Yapısal Kütle Spektrometresi büyük protein kompleksleri Analiz
check_url/4057?article_type=v

Proteinler Peptid immunoaffiniti Zenginleştirme kullanarak Niceleme Kütle Spektrometresi ile birleştiğinde
check_url/4057?article_type=v

Tandem Affinity Arıtma kullanarak Protein etkileşim Ortaklar belirlenmesi
check_url/4057?article_type=v

Dayanarak protein-protein etkileşimleri ve kimliği için bir protokol<sup> 15</sup> K Metabolik Etiketleme, immünopresipitasyon, Kantitatif Kütle Spektrometrisi ve Affinity Modülasyon
check_url/4057?article_type=v

Protein-protein etkileşimi belirlenmesi<em> Drosophila</emTandem Affinity Arıtma tarafından> Adult Başlar (TAP)
check_url/4057?article_type=v

Plant protein kompleksleri, çevirim sonrası değişikliklerin belirlenmesi
check_url/4057?article_type=v

Peptidler ve proteinler ile rekombinant Elastin gibi Polipeptitlerin ve Fusions olmayan kromatografik saflaştırma<em> Escherichia coli</em

Read Article