Induction pharmacologique de mélanine épidermique et la protection contre les coups de soleil dans un modèle humanisé de souris

L’objectif général de l’expérience suivante est de mesurer la sensibilité aux UV en déterminant la dose minimale d’érythème chez des souris à peau claire prétraitées avec quatre peaux. Ceci est réalisé en préparant d’abord la peau dorsale des souris à être irradiée par cisaillement et ablation. Ensuite, des traitements topiques de forskoline sont appliqués sur la peau dorsale.

Ensuite, les souris sont exposées à différentes doses d’irradiation UV pour déterminer les effets de quatre melons médiates sur l’inflammation induite par les UV. Les résultats obtenus montrent que l’application topique de forline augmente considérablement la pigmentation de la peau et que les animaux présentant une augmentation pharmacologique de l’humidité sont résistants aux UV, comme déterminé par MED. Il s’agit d’études de preuve de concept qui montrent qu’il est possible d’induire pharmacologiquement un bronzage chez un individu incapable de bronzer en raison d’un défaut dans un gène mélanocytaire très important appelé récepteur de la mélanocortine un ou MC un R Dans les populations humaines, la perte de fonction de mc un R est corrélée à la sensibilité aux UV. les tendances aux coups de soleil et l’incapacité à bronzer et, plus tard dans la vie, jusqu’à quatre fois le risque de mélanome.

Nous avons choisi quatre godilles comme médicament pour ces études parce qu’il est capable de contourner une voie de signalisation défectueuse du récepteur de la mélanocortine et de faire croire aux mélanocytes qu’ils ont une bonne voie de signalisation mc un R, et donc ils produisent beaucoup de mélanine, qui se dépose dans la peau et protège les animaux contre les rayons UV. Bien que nous sachions que cette méthode donne un aperçu de la peau qui peut et sombre. Cela pourrait également être important pour la prévention du cancer.

Comme nous savons que le rayonnement UV est le principal cancérogène pour la grande majorité des cancers de la peau et que l’amélioration de la mise en œuvre de la peau protège contre les lésions UV, on effectue des injections intrapéritonéales. Assurez-vous d’aspirer après la mise en place de l’aiguille et avant l’injection du contenu pour vous assurer que l’aiguille n’a pas pénétré un vaisseau sanguin, les intestins ou la vessie. Après avoir préparé l’extrait de forline et brièvement anesthésié la souris par de l’isde fluor.

L’inhalation, selon le protocole textuel, administre une anesthésie supplémentaire à l’animal avec une injection IP de kétamine et de xylazine. Effectuez un pincement des orteils pour vérifier la sédation. Utilisez des sécateurs électriques équipés d’une tête chirurgicale préparatoire de 0,25 millimètre pour cisailler la fourrure dorsale.

Utilisez une crème dépilatoire pour enlever la barbe. Ensuite, pour éviter de brûler ou d’endommager la peau, utilisez immédiatement des tampons de gaze imbibés d’eau pour essuyer doucement la peau dorsale jusqu’à ce que toute la crème ait été retirée. Utilisez des serviettes en papier douces pour sécher l’animal avant de le placer dans une cage propre sur un coussin chauffant pour récupérer.

En général, les souris doivent être brièvement anesthésiées pour faciliter l’administration topique de forskoline ou de solutions de contrôle par inhalation de fluor sous hotte. Commencez avec une serviette en papier saturée de fluor dans un bocal en verre transparent saturé de fluor. Après avoir fixé un filtre perméable à l’air en nylon ajusté, la souris a été anesthésiée en la plaçant sur le dessus du filtre juste assez longtemps pour supprimer les mouvements musculaires volontaires avec l’animal sous sédatif sur un coussin de paillasse propre et absorbant.

Après avoir effectué un pincement des orteils, transférez 400 microlitres d’extrait brut de forline sur le dos de l’animal en le faisant couler sur la peau. Ensuite, en utilisant le côté de la pointe, étalez l’extrait sur toute la surface de la peau dorsale exposée. Remettez la souris dans sa cage et observez-la attentivement jusqu’à ce qu’elle se remette de l’anesthésie pour éviter les pigments.

Effets cycliques A MP d’expériences de sensibilité aux UV confondantes. Arrêtez tous les traitements topiques deux jours avant l’exposition aux UV pour effectuer une colorimétrie réfléchissante. Après avoir brièvement anesthésié la souris avec une inhalation de fluor.

Calibrez un colorimètre en plaçant la tête portable sur la surface blanche normalisée fournie avec l’appareil. Placez la tête de mesure portable au ras de la peau dorsale de l’animal, en veillant à ce que l’ouverture d’un centimètre carré soit complètement pressée sur la peau. Prenez au moins trois mesures distinctes dans différentes zones de la peau dorsale.

Calculez le score L moyen, plus ou moins l’écart-type par animal et par groupe de traitement. Pour déterminer la dose érythémateuse minimale, chaque animal sera exposé à diverses doses d’UV. Commencez par préparer un morceau de ruban occlusif UV à l’aide d’une perforatrice robuste avec une découpe circulaire d’un centimètre carré pour percer des trous dans le ruban sur chaque trou.

Dans la bande. Appliquez un petit morceau de ruban adhésif facilement détachable qui peut être retiré. Pour l’exposition aux UV, placez le ruban adhésif sur la surface dorsale de la souris anesthésiée.

Si les yeux de l’animal sont ouverts, appliquez des larmes artificielles pour éviter les blessures dues au dessèchement et à l’exposition aux UV. Allumez la source UV composée de deux lampes UVB avec une puissance de crête de 313 nanomètres et une portée de 280 à 370 nanomètres. Laissez l’agneau s’équilibrer à une sortie UV constante avant d’utiliser un photomètre UV avec un capteur UVB pour vérifier la sortie en fonction du taux de transmission UV mesuré par le photomètre UV, calculez le temps d’exposition aux UV pour chaque dose souhaitée.

Par exemple, la sortie UVB de vos lampes mesure 2,4 milliwatts par centimètre carré. Par conséquent, pour administrer cinq kilojoules par mètre carré, la peau devrait être exposée à 208 secondes de rayonnement UVB, comme calculé ici. Ensuite, placez la surface ventrale d’un animal sous sédatif pour assurer une exposition uniforme aux UV afin d’administrer la dose de rayonnement choisie de manière séquentielle.

Retirez les petits morceaux de ruban adhésif qui recouvrent les trous au moment opportun. Par exemple, si 40 kilojoules par mètre carré est la dose la plus importante, la souris serait sous la lampe pendant 27 minutes et 47 secondes, et le trou pour cette dose serait exposé dès le début. Cependant, pour la condition de cinq kilojoules par mètre carré, le ruban serait retiré avec 208 secondes d’exposition.

Temps restant après l’exposition aux UV, retirez soigneusement le ruban adhésif et placez les animaux dans un endroit chaud et calme pour récupérer de l’anesthésie avant de les remettre dans leurs cages. La dose érythémateuse minimale, ou valeur MED, correspond à la dose minimale d’UV qui provoque une inflammation, définie par un érythème et/ou un œdème, de l’ensemble du cercle de peau exposé. Surveillez la souris pendant 24 à 48 heures pour rechercher des zones discrètes d’érythème ou d’œdème dans les zones exposées aux UV.

Parfois, la première barbe résiduelle brouille l’interprétation du test MED en masquant l’érythème ou l’œdème cutané sous-jacent, mouiller la peau avec de l’éthanol à 70 % rend la peau beaucoup plus interprétable. Documentez photographiquement les traces de peau, puis renvoyez les souris à l’animalerie. Dans ces expériences, six souris noires C 56 ont été générées sur des fonds anodiques anodiques ou anodiques incorporant le transgène du facteur de cellules souches K 14, qui permet aux souris de retenir les mélanocytes dans l’épiderme et, par conséquent, de déposer de la mélanine.

Dans l’épiderme montré ici, des cohortes de souris d’extension de peau claire ont été traitées pendant cinq jours par voie topique avec des doses deux fois par jour de véhicule ou de 40 % d’extrait brut de racine de colus pour coly. Les effets des traitements topiques sur la pigmentation de l’épiderme ont été déterminés à la fois par inspection visuelle et par couleur réfléchissante. Imagerie. L’application de l’extrait de racine a été associée à un assombrissement robuste de l’épiderme dans le fond transgénique K 14 SCF, mais pas chez les animaux non transgéniques génétiquement appariés, ce qui suggère que des mélanocytes épidermiques interfolliculaires doivent être présents pour que la mélanine induite pharmacologiquement se dépose.

Dans l’épiderme, bien que l’extrait de racine soit profondément coloré en raison de la présence de plantes phytochimiques en plus de quatre galines, l’assombrissement de la peau ne peut pas être uniquement dû à un effet de mort du médicament. Comme les animaux non transgéniques ne présentent pas d’assombrissement de la peau avec l’extrait de racine, comme démontré ici lorsqu’il est appliqué localement deux fois par jour, les effets de la mélanine de la forskoline ont été notés en aussi peu que deux jours. Bien qu’un assombrissement maximal ait été évident après plusieurs jours supplémentaires, cette figure est illustrée par la coloration de la police mason et de la mélanine des sections dorsales de la peau.

Le degré de mélanal est dépendant de la dose : les animaux qui ont été traités avec quatre peaux une fois par jour pendant 15 jours ou deux fois par jour pendant cinq jours présentent des degrés similaires d’assombrissement de la peau. De plus, il n’y a pas eu d’effets toxiques évidents de l’exposition à quatre peaux dans l’un ou l’autre des groupes de traitement. Ainsi, nous avons conclu que le traitement accéléré de cinq jours favorisait la mesure sûre de la peau dorsale aussi efficacement que le traitement standard une fois par jour.

Cette figure démontre que, telle que mesurée par les tests MED, la MEIN épidermique induite par forline a entraîné une protection UV profonde, tandis que la MED moyenne pour les souris d’extension K 14 SCF traitées deux fois par jour pendant cinq jours avec un véhicule était de 5,0 plus ou moins 0,0 kilojoules par mètre carré La MDE moyenne pour les cohortes traitées avec quatre galines topiques était supérieure à 30,0 plus ou moins 0,0 kilojoules par mètre carré. En fait, une dose de 30,0 kilojoules par mètre carré était insuffisante pour générer un érythème. Dans cette expérience utilisant un dosage Glen de force standard, la MED moyenne pour les souris d’extension K 14 SCF traitées était de 50,0 plus ou moins 7,1 kilojoules par mètre carré.

Il est important de noter que le prétraitement de quatre Kline n’a pas affecté la DMD des animaux incapables de melon, que ce soit en raison de l’absence de mélanocytes épidermiques médiés par le SCF K 14 ou en raison d’un déficit en tyrosinase. Étant donné que quatre applications de Kline ont été interrompues deux jours avant l’exposition aux UV et n’ont pas été poursuivies après l’exposition aux UV, nous concluons que les effets non pigmentaires du CAMP n’ont pas joué de rôle dans les résultats de la MED. Au contraire, les données suggèrent que la méin épidermique était le mécanisme par lequel forline induisait la protection UV dans ce modèle.

Une fois maîtrisée, cette technique permet une évaluation facile et reproductible de la réponse à la pigmentation de la peau et de la sensibilité aux ultraviolets. Dans les modèles animaux, l’application du forland ne prend que quelques minutes par jour et la majeure partie du temps expérimental est vraiment consacrée au rayonnement UV et aux tests MED. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler que la peau revient progressivement à son teint clair de base pharmacologique.

L’induction de la mélanine est très similaire à la réponse naïve en ce sens que la peau restera foncée tant qu’elle est stimulée, mais que le bronzage sortira de la peau au cours des prochaines semaines lorsque le stimulus sera supprimé.