A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 00:11Introduction
- 01:32Overview
- 01:37Competitive Elution with Biotin
- 02:44Denaturing Elution with SDS
- 03:26Chemical Cross-linking of the Resin
- 04:10Protocol
- 04:13Cross-linking of the Resin with BS3
- 07:22Quenching of the Cross-linking Reaction
- 09:50Binding of the Bait Protein and Associated Complexes to the Resin
- 12:18Washing of the Resin
- 14:23Elution of Specific Protein Complexes
- 15:32Representative Results
- 17:18Conclusion
Ett förfarande beskrivs för effektiv rening av twin-Strep-märkta fusionsproteiner och deras specifika komplex på modifierad streptavidin (Strep-Tactin)-harts som är kovalent tvärbundet med bis (sulfosuccinimidyl) suberat (BS3). Metoden har fördelarna av snabb hastighet, bra mål proteinutvinning och hög renhet, och är kompatibel med efterföljande analys genom masspektrometri.
