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Rapid Deletion Production in Fungi via Agrobacterium Mediated Transformation of OSCAR Deletion Constructs

Produção de Deleção Rápida em Fungi via<em> Agrobacterium</em> Transformação mediada de construções de eliminação de OSCAR

DOI:
10.3791/55239-v

•

11:24 min

•

June 12, 2017

•

, , ,
1Toxicology and Mycotoxin Research Unit,NPRC, USDA-ARS, 2Hazera Seeds LTD, Brurim, 3Instituto de Hortofruticultura Subtropical y Mediterránea “La Mayora” – Universidad de Málaga – Consejo Superior de Investigaciones Científicas (IHSM-UMA-CSIC), Estación Experimental “La Mayora”

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:02Primer Design for PCR Amplification of Gene Flanks
  • 02:49Production of OSCAR Constructs
  • 05:48Agrobacterium tumefaciens Mediated Transformation (ATMT) of Fungi
  • 07:45Deletion Mutant Identification by PCR
  • 08:53Results: The OSCAR Method Generates a Gene Deletion Plasmid for Fungi in a Single Reaction
  • 10:23Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Os mutantes de deleção de genes gerados através da recombinação homóloga são o padrão-ouro para estudos de função gênica. O método OSCAR (One Step Construction of Agrobacterium-Recombination-ready-plasmids) para a geração rápida de construções de exclusão é descrito. A transformação fúngica mediada por Agrobacterium segue. Finalmente, é apresentado um método de confirmação baseado em PCR de deleções genéticas em transformantes fúngicos.

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Keywords: Rapid Deletion ProductionFungiAgrobacteriumOSCAR Deletion ConstructsHomologous RecombinationFunctional GeneticsGene Deletion MutantsDelsGate SystemPrimer DesignPCRDeletion Confirmation

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