Journal
/
Genetics
/
Een standaard methodiek te onderzoeken ter plaatse mutageniteit als een functie van punt mutatie reparatie gekatalyseerd door CRISPR/Cas9 en SsODN in menselijke cellen
JoVE Journal
Genetics
This content is Free Access.
JoVE Journal Genetics
A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Een standaard methodiek te onderzoeken ter plaatse mutageniteit als een functie van punt mutatie reparatie gekatalyseerd door CRISPR/Cas9 en SsODN in menselijke cellen

DOI:
10.3791/56195-v

•

10:07 min

•

August 25, 2017

•

,
1Gene Editing Institute, Helen F. Graham Cancer Center and Research Institute,Christiana Care Health Services, 2Department of Medical Sciences,University of Delaware

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:38Cell Line, Culture Conditions, and Harvest
  • 01:57Plating the Cells and Releasing Them from Aphidicolin Synchronization
  • 02:44RNA Complexing
  • 04:13Harvesting the Cells for Targeting
  • 05:30Targeting Samples
  • 06:13Analysis of Gene Edited Cells and Transfection Efficiency
  • 06:57DNA Sequence Analysis
  • 07:56Results: Effective Point Mutation Repair
  • 09:41Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Dit protocol beschrijft de workflow van een CRISPR/Cas9 gebaseerde gen bewerken systeem voor de reparatie van puntmutaties in zoogdiercellen. Hier, gebruiken wij een combinatorische benadering voor het gen bewerken met een gedetailleerde opvolgzuigelingenvoeding experimentele strategie voor het meten van indel vorming op de doelsite — Kortom, het analyseren van on-site mutagenese.

Tags

CRISPR/Cas9SsODNOn-site MutagenesisHomology Directed RepairGene CorrectionHTT116 CellsTrypan BlueHemocytometerAphidicolinEGFP GeneGuide SequencesCrRNATracrRNA

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/56195?article_type=v

QTL Mapping en CRISPR / Cas9 Editing om een ​​Drug Resistance Gene te identificeren<em> Toxoplasma gondii</em
check_url/56195?article_type=v

Gebruikmaking van een fluorescentie PCR-capillaire gelelektroforese techniek voor CRISPR Genotype / Cas9-gemedieerde knockout mutanten in een High-throughput Format
check_url/56195?article_type=v

Selectieafhankelijke en onafhankelijke generatie van CRISPR / Cas9-gemedieerde Gene Knockouts in zoogdiercellen
check_url/56195?article_type=v

CRISPR/Cas9-gemedieerde gerichte integratie In Vivo met behulp van een homologie-gemedieerde einde deelname aan gebaseerde strategie
check_url/56195?article_type=v

Efficiënte productie en identificatie van CRISPR/Cas9-gegenereerd Gene uitsparingen in de modelsysteem Danio rerio
check_url/56195?article_type=v

Hoogefficiënte Gene verstoring van lymfkliertest en menselijke hematopoïetische voorlopercellen door CRISPR/Cas9
check_url/56195?article_type=v

Een snelle en Facile pijpleiding voor het genereren van Genomic punt mutanten in C. elegans met behulp van CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins
check_url/56195?article_type=v

CRISPR/Cas9 Gene bewerken te maken voorwaardelijke mutanten van menselijke malariaparasiet P. falciparum
check_url/56195?article_type=v

Endogene eiwit Tagging in mens geïnduceerde pluripotente stamcellen met behulp van CRISPR/Cas9
check_url/56195?article_type=v

SCHERPEr/Cas9 Ribonucleoproteã-gemedieerde nauwkeurige Gene bewerking door buis Electroporation

Read Article