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Un enfoque de mutagénesis de saturación novela: Solo paso caracterización de sitios en el ARN usando fosforotioatos de unión de proteína reguladora
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A Novel Saturation Mutagenesis Approach: Single Step Characterization of Regulatory Protein Binding Sites in RNA Using Phosphorothioates
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Un enfoque de mutagénesis de saturación novela: Solo paso caracterización de sitios en el ARN usando fosforotioatos de unión de proteína reguladora

DOI:
10.3791/57816-v

•

11:49 min

•

August 21, 2018

•

1Department of Molecular, Cellular and Developmental Biology,University of Colorado at Boulder

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:30Generation of a Library of Mutants – Doping DNA Template with Non-wild Type Nucleotides
  • 01:20Synthesis of RNA
  • 05:24Protein Binding Reaction and Separation of Bound RNA
  • 08:05Analysis of Iodine-cleaved Phosphorothioate Products for Detection of Mutant Nucleotide Positions
  • 09:07Results: Characterization of Protein Binding Site in RNA
  • 10:22Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Las proteínas que se unen a secuencias específicas de RNA desempeñan papeles críticos en la expresión génica. Caracterización detallada de estos sitios de Unión es crucial para nuestra comprensión de la regulación génica. Aquí, se describe un enfoque solo paso para la mutagénesis de la saturación de los sitios de unión a proteínas en el ARN. Este enfoque es relevante para todos los sitios de unión a proteínas en el ARN.

Tags

Saturation MutagenesisPhosphorothioatesRNAProtein Binding SiteIn Vitro TranscriptionT7 RNA Polymerase5′ End LabelingAlpha-thio NTPAlkaline PhosphataseT4 Polynucleotide KinaseGene Regulation

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