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Saccharomyces cerevisiae Métabolique marquage avec 4-thio-uracile et la Quantification des nouvellement synthétisé ARNm comme un Proxy pour l’activité de l’ARN polymérase II
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Saccharomyces cerevisiae Metabolic Labeling with 4-thiouracil and the Quantification of Newly Synthesized mRNA As a Proxy for RNA Polymerase II Activity
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Saccharomyces cerevisiae Métabolique marquage avec 4-thio-uracile et la Quantification des nouvellement synthétisé ARNm comme un Proxy pour l’activité de l’ARN polymérase II

DOI:
10.3791/57982-v

•

09:21 min

•

October 22, 2018

•

,
1Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Illkirch, France, 2Centre National de la Recherche Scientifique, Illkirch, France, 3Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Illkirch, France, 4Université de Strasbourg

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:41Cell Culturing
  • 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
  • 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
  • 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
  • 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
  • 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
  • 08:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Le protocole décrit ici est basé sur la quantification de Génome-large d’ARNm nouvellement synthétisées purifiée à partir de cellules de levure marquées avec 4-thio-uracile. Cette méthode permet de mesurer la synthèse d’ARNm dételée de désintégration de l’ARNm et, par conséquent, donne une mesure précise de la transcription de l’ARN polymérase II.

Tags

Saccharomyces CerevisiaeMetabolic Labeling4-thiouracilQuantificationNewly Synthesized MRNARNA Polymerase II ActivityMicroarray HybridizationHigh-throughput SequencingS. PombeYPD MediumYAS MediumCell CountingCell CentrifugationRNA ExtractionRNA Polymerase II

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