A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
1Department of Nephrology,University of Duisburg-Essen, University Hospital Essen, 2Institute for Virology,University of Duisburg-Essen, University Hospital Essen, 3Center for Translational Medicine, Medical Department I, Marien Hospital Herne,University Hospital of the Ruhr-University of Bochum, 4Department of Infectious Diseases, University of Duisburg-Essen,University Hospital Essen Hufelandstr
Chapters
- 00:00Title
- 01:15Collection of Blood and or Urine Samples and Isolation of BKPyV-DNA
- 02:11Amplification and Sequencing of the Non-coding Control Region (NCCR)
- 03:37Cloning of the Non-coding Control Region (NCCR) into the Dual Fluorescence Reporter
- 05:26Transient Transfection of HEK293T Cells with the Dual Fluorescence Reporter Plasmid and Treatment with Potential Antiviral Agents
- 07:23Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry
- 09:22Results and Data Interpretation
- 11:26Conclusion
In dit manuscript wordt een protocol gepresenteerd voor het uitvoeren van FACS-based meting van de transcriptionele activiteit van BK-polyomavirus door gebruik te maken van HEK293T cellen met een bidirectionele reporter plasmide die tdTomato en eGFP uitdrukt. Deze methode maakt het mogelijk om de invloed van nieuwe verbindingen op virale transcriptie kwantitatief te bepalen.
