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Détermination de la production, de la cristallisation et de la structure du domaine iKK-contraignant de NEMO
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Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-binding Domain of NEMO
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Détermination de la production, de la cristallisation et de la structure du domaine iKK-contraignant de NEMO

DOI:
10.3791/60339-v

•

13:02 min

•

December 28, 2019

•

, , ,
1Department of Chemistry,Dartmouth College

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:12Large Scale Expression of Histidine-6 (His6)-Tagged Nuclear Factor-kappa-B Essential Modulator Crystallography Construct (NEMO-EEAA)
  • 02:33His6-Tagged NEMO-EEAA Purification
  • 04:42His6 Tag Cleavage and Purification
  • 07:09Sparse Matrix Screening
  • 08:23Seed Stock Generation
  • 09:00Crystal Looping
  • 09:43X-Ray Data Processing and Structure Solution
  • 10:38Results: Representative Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-Binding Domain of NEMO
  • 12:28Conclusion

Summary

Automatic Translation

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Nous décrivons des protocoles pour la détermination de structure du domaine IKK-contraignant de NEMO par la cristallographie de rayon X. Les méthodes incluent l'expression, la purification et la caractérisation des protéines ainsi que des stratégies pour une optimisation réussie des cristaux et la détermination de la structure de la protéine sous sa forme non liée.

Tags

Keywords: NEMOIKK-binding DomainProtein ProductionCrystallizationStructure DeterminationCoiled-coil AdaptersProtein RefoldingProtein ConcentrationAggregationSolubilityFrench PressCell LysisUreaProtein Purification

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