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Screening strategico e caratterizzazione del complesso di segnalazione delle proteine Visual GPCR-mini-G per una cristallizzazione di successo
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Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization
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Screening strategico e caratterizzazione del complesso di segnalazione delle proteine Visual GPCR-mini-G per una cristallizzazione di successo

DOI:
10.3791/60747-v

•

09:19 min

•

March 16, 2020

•

, , , , , ,
1Laboratory of Biomolecular Research,Paul Scherrer Institute, 2Department of Biology,ETH Zürich, 3Center for Radiopharmaceutical Sciences,Paul Scherrer Institute, 4Laboratory of Molecular Biology,Medical Research Council

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:45Cell Membrane Solubilization and Protein Extraction
  • 03:53UV-VIS Spectroscopy
  • 04:33Automated Size-Exclusion Chromatography of Rhodopsin and Rhodopsin Mini-Go Complex
  • 06:04Deglycosylation
  • 06:44Results: UV-VIS Spectroscopy, SEC, and SDS-PAGE
  • 08:34Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Questo rapporto descrive lo screening di diversi detergenti per la preparazione del GPCR visivo, rhodopsin, e il suo complesso con mini-Go. Sono dimostrati metodi biochimici che caratterizzano la qualità del complesso nelle diverse fasi durante la purificazione. Questo protocollo può essere generalizzato ad altri complessi proteici della membrana per i loro futuri studi strutturali.

Tags

Keywords: GPCRMini-G ProteinSignal TransductionMembrane Protein ComplexDetergent ScreeningCrystallizationHEK293 CellsAffinity Purification9-cis RetinalBuffer Exchange

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