Journal
/
Genetics
/
In Vitro dirigió la evolución de una endonucleasa de restricción con una especificidad más estricta
JoVE Journal
Genetics
This content is Free Access.
JoVE Journal Genetics
In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

In Vitro dirigió la evolución de una endonucleasa de restricción con una especificidad más estricta

DOI:
10.3791/60807-v

•

09:16 min

•

March 25, 2020

•

,
1International Institute of Molecular and Cell Biology, Warsaw (IIMCB)

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:49Split-and-Mix Synthesis of Mutagenic Primers
  • 02:34Performing Compartmentalized In Vitro Transcription-translation Reaction
  • 05:07Continued Processing of Libraries and Selection
  • 07:20Results: Examples of Screening of NlaIV Variants for Sequence Specificity Alteration
  • 08:16Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Las endonucleasas de restricción con nueva especificidad de secuencia se pueden desarrollar a partir de enzimas que reconocen una secuencia parcialmente degenerada. Aquí proporcionamos un protocolo detallado que utilizamos con éxito para alterar la especificidad de la secuencia de la enzima NlaIV. Los ingredientes clave del protocolo son la compartimentación in vitro de la reacción de transcripción/traducción y la selección de variantes con nuevas especificidades de secuencia.

Tags

Keywords: In Vitro Directed EvolutionRestriction EndonucleaseSequence SpecificityIn Vitro CompartmentalizationDirected EvolutionSubsaturation MutagenesisOligonucleotide SynthesisOil Surfactant MixtureLibrary Preparation

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/60807?article_type=v

Diseño y Uso de un bajo coste, Automatizado Morbidostat para Adaptive Evolución de las bacterias a los antibióticos En la selección de fármacos
check_url/60807?article_type=v

Procedimiento para Adaptive Laboratory Evolución de microorganismos utilizando un quimiostato
check_url/60807?article_type=v

Genoma Edición y diferenciación dirigida de hPSCs para interrogar Determinantes linaje en el Desarrollo Humano de páncreas
check_url/60807?article_type=v

Cuantificación de la información codificada por el Gene expresión niveles durante la vida útil modulación bajo amplia gama dieta restricción en C. elegans
check_url/60807?article_type=v

Generación de un gen interrumpido Streptococcus mutans cepa sin gen clonación
check_url/60807?article_type=v

Prueba el papel de Multicopy plásmidos en la evolución de resistencia a los antibióticos
check_url/60807?article_type=v

Vigilancia de todo el genoma de errores de transcripción en organismos eucariotas
check_url/60807?article_type=v

Producción de canceladuras del Gene en Escherichia coli por transducción de P1 con casetes de resistencia a los antibióticos
check_url/60807?article_type=v

Uso en Vitro y en las células la forma para investigar la molécula pequeña inducida por cambios estructurales Pre-mRNA
check_url/60807?article_type=v

Uso de francotirador Cas9 para minimizar efectos Off-target de CRISPR Cas9 sin la pérdida de actividad en blanco mediante evolución dirigida

Read Article