Journal
/
Genetics
/
In Vitro Riktad Evolution av en begränsning Endonuclease med strängare specificitet
JoVE Journal
Genetics
This content is Free Access.
JoVE Journal Genetics
In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

In Vitro Riktad Evolution av en begränsning Endonuclease med strängare specificitet

DOI:
10.3791/60807-v

•

09:16 min

•

March 25, 2020

•

,
1International Institute of Molecular and Cell Biology, Warsaw (IIMCB)

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:49Split-and-Mix Synthesis of Mutagenic Primers
  • 02:34Performing Compartmentalized In Vitro Transcription-translation Reaction
  • 05:07Continued Processing of Libraries and Selection
  • 07:20Results: Examples of Screening of NlaIV Variants for Sequence Specificity Alteration
  • 08:16Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Begränsning endonucleases med nytt ordnar specificitet kan framkallas från enzym som känner igen ett delvist degenererat ordnar. Här tillhandahåller vi ett detaljerat protokoll som vi framgångsrikt använde för att ändra sekvenss specificitet nlaIV enzym. Viktiga ingredienser i protokollet är in vitro-uppdelning av transkriptions-/översättningsreaktionen och valet av varianter med nya sekvenssub specificiteter.

Tags

In Vitro Directed EvolutionRestriction EndonucleaseSequence SpecificityIn Vitro CompartmentalizationDirected EvolutionSubsaturation MutagenesisOligonucleotide SynthesisOil Surfactant MixtureLibrary Preparation

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Utformning och användning av en låg kostnad, Automated Morbidostat för Adaptive Evolution av bakterier under antibiotikum Drug Val

Förfarande för adaptiv Laboratory Evolution av mikroorganismer med hjälp av en kemostat

Genome redigering och riktad differentiering av hPSCs för Förhöra Lineage bestämmelse i Human Pancreatic utveckling

Kvantifiering av Information kodas av genen uttryck nivåer under livslängden modulering enligt bred-range kosttillskott begränsning i C. elegans

Generation av en gen-stört Streptococcus mutans stam utan genen kloning

Testning Multicopy plasmider roll i utvecklingen av antibiotikaresistens

Genome-wide övervakning av transkription fel i eukaryota organismer

Producerar genen borttagningar i Escherichia coli av P1 transduktion med punktskattepliktiga antibiotikaresistens kassetter

Använda i Vitro och i cell form att undersöka småmolekylära inducerad Pre-mRNA strukturella förändringar

Med Sniper-Cas9 att minimera Off-target effekter av CRISPR-Cas9 utan förlust av på målet aktiviteten Via riktad Evolution

Read Article