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Detection of Post-Replicative Gaps Accumulation and Repair in Human Cells Using the DNA Fiber Assay

Detecção de acumulação e reparo de lacunas pós-replicativas em células humanas usando o ensaio de fibra de DNA

DOI:
10.3791/63448-v

•

10:32 min

•

February 03, 2022

•

, , ,
1Department of Microbiology, Institute of Biomedical Sciences,University of São Paulo, 2Division of Oncology, Department of Internal Medicine,Washington University in St. Louis

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:27S1 Fiber Experimental Setup
  • 03:51DNA Fiber Preparation by Spreading
  • 04:58Immunostaining of DNA Fibers
  • 06:45Image Acquisition and Analysis
  • 08:39Results: Post-Replicative ssDNA Gaps on Ongoing Forks by S1 Fiber Assay and Post-Replicative Repair by Gap Filling
  • 09:42Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Aqui descrevemos duas modificações do ensaio de fibra de DNA para investigar lacunas de DNA de uma única vez na replicação do DNA após indução da lesão. O ensaio de fibra S1 permite a detecção de lacunas pós-replicativas usando a endonuclease S1 específica do SSDNA, enquanto o ensaio de preenchimento de lacunas permite visualização e quantificação do reparo de lacunas.

Tags

Keywords: DNA Fiber AssayPost-replicative GapsS1 NucleaseDNA RepairReplication StressGenome IntegrityUV-C IrradiationCldU IncorporationCSK PermeabilizationDNA Lesion Detection

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