Здесь представлен протокол получения и буферной калибровки клеточных экстрактов из нокаутирующих штаммов экзонуклеазы V Escherichia coli BL21 Rosetta2 (ΔrecBCD и ΔrecB). Это быстрый, простой и прямой подход к экспрессии в бесклеточных системах синтеза белка с использованием линейных шаблонов ДНК.