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Visualizzazione della dinamica conformazionale dei recettori di membrana utilizzando FRET a singola molecola
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Chapters
- 00:04Introduction
- 01:04Slide and Coverslip Cleaning
- 03:04mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
- 05:13Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
- 06:23Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
- 07:47Data Analysis
- 08:39Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
- 10:11Conclusion
Questo studio presenta una procedura dettagliata per eseguire esperimenti di trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza a singola molecola (smFRET) sui recettori accoppiati a proteine G (GPCR) utilizzando la marcatura sito-specifica tramite incorporazione di amminoacidi innaturali (UAA). Il protocollo fornisce una guida passo-passo per la preparazione dei campioni smFRET, gli esperimenti e l'analisi dei dati.
