Journal
/
Biochemistry
/
Een geoptimaliseerde kwantitatieve pull-down analyse van RNA-bindende eiwitten met behulp van kort gebiotinyleerd RNA
JoVE Journal
Biochemistry
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochemistry
An Optimized Quantitative Pull-Down Analysis of RNA-Binding Proteins Using Short Biotinylated RNA
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Een geoptimaliseerde kwantitatieve pull-down analyse van RNA-bindende eiwitten met behulp van kort gebiotinyleerd RNA

DOI:
10.3791/64923-v

•

07:55 min

•

February 17, 2023

•

, , , ,
1Center for Human Technology,Italian Institute of Technology (IIT), 2Department of Experimental Oncology,European Institute of Oncology (IEO), 3Department of Biology and Biotechnologies ‘Charles Darwin’,Sapienza University of Rome

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:42Total Protein Harvest and Protein Concentration Determination
  • 01:48Bead Preparation
  • 03:12Bead Loading and Protein Binding on Beads
  • 04:13Washing of Nonspecific Binders
  • 04:53Elution of Specific Binders
  • 05:39Results: Quantification and Validation of Protein Interactors of Specific RNA Sequences
  • 07:24Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Hier presenteren we een geoptimaliseerde in vitro methode om eiwitinteractoren van specifieke RNA-sequenties te ontdekken, kwantificeren en valideren, met behulp van totaal eiwitextract uit menselijke cellen, streptavidineparels bedekt met gebiotinyleerd RNA en massaspectrometrie-analyse.

Tags

RNA-binding ProteinsPull-down AnalysisBiotinylated RNAProtein ComplexesHEK 293T CellsLysis BufferMagnetic BeadsYeast TRNARNA Oligonucleotide

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/64923?article_type=v

Isolatie van lipoproteïnen met hoge dichtheid voor niet-coderende RNA kwantificering Klein
check_url/64923?article_type=v

Een geoptimaliseerde protocol voor Electroforetische Mobility Shift Assay Met behulp van infrarood fluorescerende kleurstof-gemerkte oligonucleotiden
check_url/64923?article_type=v

Een efficiënte methode voor het isoleren van zeer gezuiverde RNA uit zaden voor gebruik in Quantitative Analysis Transcriptome
check_url/64923?article_type=v

Zuivering van Biotinylated Cell Surface Proteins uit<em> Rhipicephalus microplus</em> Epitheliale darmcellen
check_url/64923?article_type=v

Geoptimaliseerd Protocol voor de Extractie van Proteïnen uit de Human Mitral Valve
check_url/64923?article_type=v

Bereiding van de monsters voor de massa spectrometrie gebaseerde identificatie van RNA-bindende regio 's
check_url/64923?article_type=v

Vastleggen en identificatie van RNA-bindende proteïnen met behulp van klik chemie-bijgewoonde RNA-interactome vangen (CARIC) strategie
check_url/64923?article_type=v

PeptiQuick, een in één stap incorporatie van membraan eiwitten in Biotinylated Peptidiscs voor gestroomlijnde eiwit binding assays
check_url/64923?article_type=v

Ubiquitin-ketenanalyse door parallelle reactiemonitoring
check_url/64923?article_type=v

Dwarsdoorsnede van rijpe rijst(Oryza sativa L.) Kernels voor scanning elektronenmicroscopie beeldvorming met behulp van pipet tips als immobilisatie ondersteuning

Read Article