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1Centro de Biología Celular y Molecular de Enfermedades,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 2Departamento de Medios y Creativo,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 3Sistema Nacional de Investigación-Secretaría Nacional de Ciencia,Tecnología e Innovación (SNI-SENACYT)
Chapters
- 00:04Introduction
- 00:27Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
- 02:39Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
- 03:26Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
- 05:00Polyclonal Selection in Culture
- 06:41Confirmation of Genomic Integration
- 07:09Cloning by Limiting Dilution
- 08:12Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
- 09:40Conclusion
Ici, nous décrivons la méthodologie utilisée pour générer des souches de L. panamensis et de L. donovani exprimant le gène de l’eGFP en tant que transgène intégré stable à l’aide du système pLEXSY. Les parasites transfectés ont été clonés par dilution limite, et les clones ayant l’intensité de fluorescence la plus élevée chez les deux espèces ont été sélectionnés pour une utilisation ultérieure dans les tests de dépistage de médicaments.
