A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
1Centro de Biología Celular y Molecular de Enfermedades,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 2Departamento de Medios y Creativo,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 3Sistema Nacional de Investigación-Secretaría Nacional de Ciencia,Tecnología e Innovación (SNI-SENACYT)
Chapters
- 00:04Introduction
- 00:27Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
- 02:39Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
- 03:26Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
- 05:00Polyclonal Selection in Culture
- 06:41Confirmation of Genomic Integration
- 07:09Cloning by Limiting Dilution
- 08:12Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
- 09:40Conclusion
Här beskriver vi den metod som används för att generera L. panamensis och L. donovani-stammar som uttrycker genen för eGFP som en stabil integrerad transgen med hjälp av pLEXSY-systemet. Transfekterade parasiter klonades genom att begränsa utspädningen, och kloner med den högsta fluorescensintensiteten hos båda arterna valdes ut för vidare användning i läkemedelsscreeninganalyser.
