Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

İntraserebral Kanama Fare Modellerinden olarak Otolog Blood veya Klostridyal Kollajenazının intrastriatal Enjeksiyon

Published: July 3, 2014 doi: 10.3791/51439
Automatic Translation
1, 1, 2, 3, 1,4, 1,2,4, 1,2
1Multidisciplinary Neuroprotection Laboratories, Department of Anesthesiology, Duke University, 2Department of Neurology, Duke University, 3Department of Radiology, Duke University, 4Department of Neurobiology, Duke University

Abstract

Intraserebral kanama (İSK) serebrovasküler hastalık yaygın bir şeklidir ve önemli morbidite ve mortalite ile ilişkilidir. Hemostaz ve pıhtı çıkarılması hedefleniyor büyük klinik çalışmaların etkili tedavi ve başarısızlık eksikliği ICH daha mekanizması odaklı soruşturma için ihtiyaç göstermektedir. Bu araştırma, klinik öncesi modellerde tarafından sağlanan çerçeve aracılığıyla gerçekleştirilebilir. Popüler kullanımı iki kemirgen modelleri, otolog kan veya klostridial kolajenaz ya intrastriatal (bazal ganglia) enjeksiyon yer alır. Yana, her model İSH'lı ilgili belirgin farklı patofizyolojik özellikleri temsil eder, belli bir modelin kullanımı öğretilmektedir hastalığın hangi yönü dayalı seçilebilir. Örneğin, otolog kan enjeksiyonu en doğru intraparenkimal kan varlığı için beynin yanıtı temsil eder, ve en yakın lobar kanama çoğaltabilir. Clostridial kollajenaz enjeksiyon en doğru s temsilalışveriş merkezi damar rüptürü ve derin kanamalar hematom evrimi karakteristik. Böylece farklı hematom oluşumu, nöroenflamatuar tepki, serebral ödem gelişmesi ve nörodavranışsal sonuçları her model sonuçları. Sözde bir terapötik müdahale Sağlamlık en iyi iki model kullanılarak değerlendirilebilir. Bu protokol, her iki model, yaralanma hemen ameliyat sonrası gösteri ve erken post-operatif bakım teknikleri kullanılarak Vaginal indüksiyon gösterilmiştir. Her iki model de tekrarlanabilir yaralanmaları, hematom hacimleri ve nörodavranışsal kayıpla sonuçlanabilir. Çünkü insan ICH heterojenite, birden fazla preklinik modeller iyice patofizyolojik mekanizmalarını keşfetmek ve potansiyel tedavi stratejileri test etmek için gereklidir.

Introduction

Intraserebral kanama (İSK) etkilenen hastaların yaklaşık% 40-50 30 gün içinde ölme 1 ile serebrovasküler hastalık nispeten sık görülen şeklidir. Ne yazık ki, küçük bir iyileşme son 20 yıl boyunca 2 ölüm oranında yapılmıştır. Ulusal Sağlık Enstitüleri 3 ve Amerikan Kalp Derneği 4 kılavuzların raporları patofizyolojisi anlayış genişletmek ve yeni tedavi yaklaşımları için hedeflerini geliştirmeye ICH klinik olarak ilgili modellerinin geliştirilmesinin önemini vurguladı.

Çeşitli modeller, insan ICH 5 taklit var. ICH patofizyoloji yetişkinlerin anlama olarak, çeşitli modeller hastalığın farklı yönlerini incelemek için kullanılabilir, belirgin hale gelmiştir. Daha önce kullanılan modeller kemirgen amiloid anjiopati 6, intraparenkimal mikrobalon ekleme ve enflasyon 7 ve doğrudan arteriyel kan bulunmaktadırinfiltrasyon 8,9. Amiloid anjiyopati ikinci Lobar kanama transgenik farelerin kullanılması ile model ve ayrı bir alt tipi ICH temsil edilmiştir. Mikrobalonların modelleri hematom akut kütle etkisinin taklit eden ancak, kan varlığı için beynin hücresel yanıtı yakalamak için başarısız. Son olarak, doğrudan arteriyel kan sızması femoral arterden arteriyel baskılara beyin tabi. Dolayısıyla, bu model taklit arter basınçları ve kan varlığı ancak küçük kan damarı yırtılması gelen mikrovasküler yaralanma beyin tabi değildir. Bundan başka, bu model, doğal olarak yüksek bir değişkenlik vardır. Onlar yaş olarak İlginçtir, spontan hipertansif sıçanlar 10 spontan ICH gelişir. ICH geliştirme sonra bu hayvanların çalışma İSH'lı için insanları yatkınlık önemli Komorbiditelerin birinin varlığında hastalığı taklit edebilir. Klostridial kolajenaz 11 veya a instrastiatal enjeksiyonu bu model mevcut olmakla birlikte, enjeksiyon intrastriatalutologous tüm kan 12, şu anda en yaygın iki model ICH klinik öncesi araştırmalarda kullanılır.

ICH modeli seçimi türlerin seçimi ve hematom oluşumunu sağlama yöntemi de dahil olmak deneysel sorusunun objektif dayalı yapılmalıdır. Örneğin, domuz farelere göre daha büyük bir beyaz madde beyin hacmi ile büyük hayvanlar olmalarıdır. Böylece, domuz modeller İSH'lı aşağıdaki beyaz cevher patofizyolojisini incelemek için uygundur. Aksine, kemirgen beyin büyük ölçüde gri madde vardır, ancak transgenik sistemleri İSH'lı yaralanma ve iyileşme moleküler mekanizmalarını değerlendirmek için kemirgenler yararlı olun. Her model dikkatli bir deney öncesinde dikkat edilmesi gereken, kendine özgü güçlü ve zayıf yönlerini (Tablo 1) vardır.

Aşağıdaki protokoller farelerde otolog kan ve kolajenaz enjeksiyon modellerini göstermektedir. Bu modeller her biri aslında sıçanlarda geliştirilen modellerden çevrilmiştir13,14 ve İSH'lı hücre ölümü ile ilişkili moleküler mekanizmalarını keşfetmek için yaygın olarak kullanılabilir transgenik teknolojinin kullanımına izin. Hem insan İSH'lı belirgin farklı bir yaralanma mekanizmalarını ifade eder, hem de davranışsal ve histolojik önlemler açısından belirgin farklı beklenen sonuç var. Böylece, bazı hipotezler diğer üzerinden bir modele kendilerini borç olabilir, ancak birçok fikirler hem de model doğrulama gerekebilir.

Kollajenaz-ve otolog kan enjeksiyonu intraserebral kanama modellerinin özellikleri Tablo 1.. Karşılaştırılması.

Tekrarlanabilirlik
Kolajenaz Enjeksiyon Kan Enjeksiyon
Kullanım kolaylığı + + + + +
+ + + +
Kanama Boyutu Kontrolü + + + + +
Kan Reflü + + +
İnsan Hastalığı simüle + -
Basitlik + + + +
Çoklu Türler kullanın + + + +

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Etik Beyanı: Bu protokol, Duke Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve hayvanların etik kullanımı için tüm kuralları takip edilmiştir.

Ekipman 1. Hazırlanması

  1. Ameliyat öncesi cerrahi aletler otoklavlayın.
  2. % 70 etanol ile stereotaktik aparatı dezenfekte edin.
  3. Su banyosu açın ve 42 ° C'de su sıcaklığı tutmak
  4. 0.4 ul başına 0.075 U 'lik bir konsantrasyonda, normal tuzlu su içinde Type IV-S klostridial kolajenaz çözülür.

2.. Kolajenaz Enjeksiyon Model

  1. Fare tartılır.
  2. % 30 O 2 /% 70 N 2% 5 izofluran ile indüksiyon odasında fare anestezisi. Yeterli anestezi fare solunum saniyede 1 yavaşladı yaklaşık 2 dakika sonra bildirilir.
  3. 30 mm 20 G intravenöz kateter ile trakea entübe.
  4. Bir kateteri geçkemirgen vantilatör ve mekanik olarak% 30% 1.6 izofluran ile akciğerlere havalandırmak O 2/70 0.75 ml 'lik bir teslim tidal hacmi ile dakikada 105 nefes' lik bir oranda% 2 ..
  5. Bir elektronik tıraş makinesi ile kafa derisi tıraş. Fare uyutuldu ve sonda sonra, traş etme için başka bir çalışma istasyonuna taşımak ve daha sonra cerrahi tezgah döndü.
  6. Stereotaktik çerçeve içinde başını sağlamlaştırmak, ve referans noktaları olarak koronal ve sagital hem sütür ile baş seviyesi.
  7. Gözleri oftalmik merhem sürün.
  8. Bir rektal ısı probu yerleştirin. Su yatağı dolaşan bir alt gövdeyi kullanarak 37.0 ± 0.2 ° C rektal sıcaklığı korumak.
  9. Wipe betadin cerrahi alan% 70 etanol ile takip ve 3 kez tekrarlayın.
  10. 1 cm orta hat kafa derisi kesi yapmak ve bregma maruz steril pamuk uçlu bir aplikatör ile yanal periosta silin.
  11. Matkap çapı 1 mm burr hole 2,2 mm lat bıraktısu ile soğutulan bir matkap ile bregmaya eral.
  12. Kolajenaz şişe 5 çevirin, daha sonra 0.5 ul kolajenaz çözeltisi (stereotaksik çerçeveye bağlı) 25 G iğne ile 5 kez (Son yıkamadan sonra, şırınga içinde kolajenaz çözeltisi 0.5 ul bırak), bir 0.5 ul şırınga yıkayın.
  13. Çapak delik ile iğne ucu hizalamak şırınga 0.1 ul sınırdışı ve atmak için ustura ile iğne konik silin.
  14. Bir mikromanipülatör kullanarak, kortekse derin iğne 3 mm ilerlemek ve 30 saniye boyunca hareketsiz bırakın.
  15. 90 saniye boyunca 0.4 ul enjekte edilir.
  16. % 1 izofluran azaltmak ve 5 dakika boyunca iğne hareketsiz bırakın.
  17. Yavaş yavaş iğneyi.
  18. % 0.25 bupivakain subkutan 2 damla ve cilt sütür 1 - uygulayın.
  19. Izofluran buharlaştırıcı kapatın ve stereotaktik çerçeve fareyi çıkarın.
  20. Fare sonraki ekstübasyon ile spontan ventilasyon kurtarmak için izin verin.
  21. Temiz bir kafes fare dönün ve ücretsiz izinYiyecek ve su.

3.. Otolog Kan Enjeksiyon Modeli

  1. Kollajenaz enjeksiyon modeli için 2.11 - 2.1 adımları izleyin.
  2. Bir 30 G 50 ul şırınga içine steril normal tuzlu su, 50 ul çizin.
  3. 70 cm PE10 boru ile mikrolitre şırınga bağlayın.
  4. PE10 tüp tamamen de-hava tüpü içine mikrolitre şırınga tüm normal tuzlu kovun.
  5. Daha sonra tuzlu su ve işlemler sırasında kan karışımı önlemek için PE10 boru mikrolitre şırınga düzeneğinin distal açıklık bir hava kabarcığı yapmak için dışarı 1 mm mikrolitre şırınga pistonunu çıkarın.
  6. % 70 etanol ile fare distal santral kuyruk arter bölgeyi silin, ve kuyruk ucuna 1 cm 0.5 de bir ustura ile arter kesti.
  7. PE10 boru mikrolitre şırınga düzeneğinin kesilmiş kuyruk kan 40 ul toplayın. Not: heparin, iğne, boru, ya da fare kullanılmaz.
  8. Inje üzerine mikrolitre şırınga takınction pompası.
  9. PE10 tüp sonuna bir 27 G iğne metal kanül kısmı bağlayın ve stereotaktik çerçeve üzerinde bir micromanipulator iğne sabitleyin.
  10. 27 G iğne üzerinden kan 2 ul sınırdışı ve atmak için ustura ile iğne konik silin.
  11. Çapak delik ile iğne ucu hizalayın ve kortekse derin iğne 3 mm yerleştirin.
  12. Dakika başına 2 ul 'lik bir oranda otolog kan 35 ul enjekte edilir.
  13. % 1 izofluran azalma ve 10 dakika boyunca iğne hareketsiz bırakın.
  14. 30 saniye içinde iğneyi.
  15. % 0.25 bupivakain subkutan 2 damla ve cilt sütür 1 - uygulayın.
  16. Izofluran buharlaştırıcı kapatın ve stereotaktik çerçeve fareyi çıkarın.
  17. Fare sonraki ekstübasyon ile spontan ventilasyon kurtarmak için izin verin.
  18. Temiz bir kafes fare dönün ve gıda ve su ücretsiz erişim sağlar.

4. Sham Operasyonu

  1. Kollajenaz injectio için aynı prosedürleri takipiğne yerleştirildikten sonra enjeksiyon olmadan hariç n modeli.

5. Post-cerrahi Bakımı

  1. Hayvanın boynun arkasındaki cerrahi prosedürün akşam normal tuzlu su deri altına, 0.5 ml enjekte edilir.
  2. Kafesin zeminine yerleştirilen küçük plastik bardak, su ve jel gıda ile yumuşatılmış yiyecek sağlamak. 7 gün boyunca günlük yiyecek değiştirin.
  3. 7 gün boyunca günlük ağırlık kaybı, yara iyileşmesi ve rahatsızlık belirtileri kontrol edin.
  4. 7 günden daha fazla geri kazanımı aralıkları gerekmektedir, gerekirse, ameliyat dikiş ipliği kaldırma, (% 30, O 2/70, N% 2 yaklaşık olarak% 1 izofluran) açık inhale anestezi altında gerçekleştirilebilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Hematom genişleme (Şekil 2) oluştuğunda, kolagenaz enjeksiyondan sonra 4 saat - Due hematom oluşumu (Şekil 1) farklılıklara, ipsilateral dönüm hemen otolog kan enjekte edilen farelerin için uyanmak sonra ve 2 içinde gösterilmiştir. Ipsilateral torna yokluğu önemli yaralanma olmaması için endişe yükseltmek gerekir. İlk sonrası yaralanma gününde, her iki modelde de fareler önemli nörolojik defisit (Şekil 3) göstermelidir. Enjeksiyonundan 24 saat sonra, aynı taraf hemisfer istikrarlı hematom hacmi (Şekil 4) göstermek; bundan başka, enjeksiyondan 24 saat sonra, beyin su içeriği kolajenaz-enjekte edilmiş farelerde 79.8 +% 0.34 ve otolog kan enjekte edilmiş farelerde 79.3 +% 0.23 olması beklenmelidir. Kolajenaz-enjekte edilen farelerin% 25 ve otolog kan enjekte edilmiş farelerde daha az -% 10 ölüm oranı 10 arasında meydana beklenmelidir. Nedeniyle hematom hacmi, beyin ödemi ve increa için kaçınılmaz ölümintrastriatal enjeksiyonundan sonra 48 saat - sed intrakranial basıncı genellikle ilk 24 içinde gerçekleşir. 72 saat sonra meydana gelen ölüm genellikle doğru-yaralanma sonrası bakım (yumuşatılmış su ve yiyecek örneğin., Hazır erişim) ile önlenebilir. Fonksiyonel iyileşme genellikle otolog kan enjekte edilen fareler kollajenaz-enjekte edilen farelerin çok daha hızlı iyileşme ile yaralanma gün 2 yazılan başlar.

Şekil 1
Şekil 1... Otolog kan ve kolajenazı intraserebral kanama enjeksiyon modelleri karşılaştırarak fare beyinleri Seri manyetik rezonans görüntüleme 35 ul sol intrastriatal enjeksiyonu otolog kan (A) veya 0.075 U Tip IV-S klostridiyal kollajenaz (B) aracılığıyla intraserebral kanama indüksiyonundan sonra 10 - 12 haftalık C57/BL6 erkek fareler, seri manyetik rezonans görüntülemeyaşlanma otolog kan enjekte edilmiş farede kararlı hematom göre kolajenaz-enjekte edilmiş farelerde hematom genişleme gösterir. Hematom hacmi 29.9 mm, 1, 3, 6, ve 12 saat collagenase enjeksiyonundan sonra, sırasıyla, ve 7.0, 5.8, 1 de 3.2 mm 3, 6, ve tam kan enjeksiyonundan sonra 24 saat, 10.1, 23.1, sırası. tıklayınız Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için.

Şekil 2,
. Farelerde Şekil 2 Köşe dönüş testi 24 saat sonra beyin içi kanama, sol bazal ganglionlar, 10 yılında beklenen ipsilateral dönüm tepki huzuruna intrastriatal kolagenaz enjeksiyondan hemen sonra Taken -. Eski C57/BL6 erkek fareler yaralanma yeterli gösterir 12. hafta. Bu dönümkolajenaz-enjekte edilmiş farelerde, 4 saat - otolog kan ile enjekte edilmiş farelerde önemli bir yaralanma sonrası ve 2 içinde hemen gerçekleşmelidir. Her iki modelde de fareler daha sol gösterdi yaralanmamış farelere kıyasla yaralanma sonrası döner (** p <0.01, post-hoc Scheffe testi ile tek yönlü ANOVA; n = 10/group).

Şekil 3,
. Şekil 3 Rotarod performans farelerde intraserebral kanama sonrası Baseline ve 10 sonrası yaralanma endeksi rotorod gecikmeleri -. Bir hafta boyunca 12 haftalık C57/BL6 erkek farelerde sol intrastriatal 35 ul otolog kan, 0.075 U Tip IV-S klostridiyal kollajenaz-enjeksiyon sonrası veya sham (* p = 0.022; post-hoc Scheffe testi ile önlemler ANOVA tekrarlanan, F-değeri = 12.726; n = 10/group). Fareler önemli eğitim önyargıları önlemek için yaralanmadan sonra her gün test rotorod üzerinden değerlendirilir. </ P>

Şekil 4,
. Şekil 4 Hematoksilen ve intraserebral kanama 10 fotomikrografları sonra fare beyin eozin lekeleri -. 24 saat sonra 12 haftalık C57/BL6 erkek fare beyinlerinde 35 ul otolog kan (sağ) veya 0.075 U Tip IV-S Klostridyal sol intrastriatal enjeksiyonundan sonra kolajenaz (sol). Hematom hacmi 20.2 kolagenaz enjeksiyonundan sonra 3 mm ve 6,4 mm 3 tam kan enjeksiyonu sonrası. Olan bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Therapeutics 15-18 umut verici için klinik öncesi araştırma ve sonuçta büyük klinik çalışmalar gelişmekte olmasına rağmen, orada ICH içinde sonuçlarını iyileştirdiği gösterilmiş hiçbir farmakolojik müdahaleler ve bakım büyük ölçüde destekleyici kalır. Muhtemel tedavilerin listeleri gibi Transkriptomik ve proteomik çalışma gibi yüksek kapasiteli teknolojileri ile üretilebilir. Bu teknolojiler, ileri potansiyel terapötik hedeflerin bilgimizi ilerlemeye devam ediyor ve umut verici hedeflerin geriye çevirisi iyi klinik olarak ilgili klinik öncesi modellerde 19-22 kullanımı yoluyla incelenebilir olsa. Onlar hızlı seçilen adaylar hacmi, in vivo mekanizmalar muayene, dozlama ucuz soruşturma, terapötik pencere ve klinik denemeleri 23-25 ​​gelişmekte germane diğer parametreleri izin çünkü bu tür modeller yararlıdır. Belirgin avantajları klinik öncesi modellerde kullanarak mevcut olmakla birlikte, modelleme klinik olarak en uygun b gerçekleşmelidirut lojistik açıdan sistemi mevcuttur. Modelleri gibi primatlar gibi 'yüksek' sipariş hayvanlar için mevcut olmakla birlikte, insan hastalığına model farelerin kullanımı patolojik mekanizmaları ve tedavi edici etkilerini inceleyen bir ucuz, yüksek verim ve güçlü teknoloji sağlar. Transjenik sistemler ekleme dahil mekanistik yollar ve hücre popülasyonlarının daha da güçlü bir değerlendirilmesini sağlar.

Şu anda iki fare modelleri yaygın olarak kullanılan şunlardır: intrastriatal otolog kan veya kollajenaz enjeksiyon. Her iki model de çok yönlü ve kullanımı kolay, diğer inme modellerinde göredir. Her iki model bölgesel tepkilerinin değerlendirilmesi sağlayan, farklı beyin bölgelerinde 26 ICH uyarabilir; hematom hacmi kontrollü ve hafif, orta, ağır yaralanma ve değerlendirilmesini sağlayan, değiştirilebilir; ve klinik olarak anlamlı fizyolojisi (örn.., kan basıncı, sıcaklık gibi) kontrol edilebilir. Son olarak, her model başlangıçta geliştirilmiştir ikensıçan, iki yana transgenik sistemlerinin 21,24,25,27 kullanımına izin farelere tercüme edilmiştir. Her ICH belirgin farklı bileşenlerini temsil Ancak, her model, ICH farklı yönlerini çalışmanın kendisini ödünç. Otolog kan-enjeksiyon intraparenkimal kan maruz kalma beynin yanıtını yeniden olabilir. Bu yüzden, ilk yığın etkiler ve kesme kuvvetleri, hafif iltihap değişikliği, apoptosis, ve kan erimesi tüm 10,28 incelenebilir. Bundan başka, bu modele son modifikasyonlar hematom genişleme 29,30 taklit yeteneği sonuçlandı. Ancak, bu model insan hastalığı bulunan vasküler yaralanma ve / veya hematom genişleme bileşeni çağırmak değildir. Bunun aksine, kolajenaz-enjeksiyon, damar yırtılması elemanları, erken hematom genişleme ve gelişmiş nöroenflamatuar bir etki yaratır. Belirgin endişeler bu inflamatuvar etkisi kollajenazının artifaktüel katkısı hakkında mevcut olmakla birlikte, sert e bir eksikliği varBu, 31 için vidence, ve kendi (yayınlanmamış) verileri tek başına kolajenaz hücre kültürü içinde belirgin bir iltihabi tepki doğurmaz olmadığını düşündürmektedir.

Bir usul açısından bakıldığında, her iki model de tekrarlanabilir etkileri elde etmek için, böylece kolay öğrenilir, mikrocerrahi ile sınırlı beceri gerektirir ve. Kaçınılması gereken tuzaklar şunlardır: 1) dura işgali veya delerken termal beyin hasarı yaratarak, 2) ya da iğne takılması ile ventriküler sistemin nüfuz. Dural yaralanma enjekte edici içinde geri akış sağlar ve herhangi bir intraparenkimal hematom az intraventriküler enjeksiyon ile sonuçlanır. Ayrıca, bakımı yeni oluşan / oluşturulması hematom bozmayacak iğne çekilmesi üzerine alınmalıdır. Ölüm farelerin belirli bir yüzdesinde beklenebilir ancak doğrudan hematom boyutu ve istenen yaralanma derecesi ile ilgilidir; Bu şekilde, bu sonuç enjekte edici hacim / konsantrasyon ile titre edilebilir.

Tüm modellerde olduğu gibi, protokollar özel operatörler tarafından kullanılmak üzere optimize olacaktır. Nedeniyle tüm vivo sistemlerde doğasında değişkenlik için, başarı için önemli bir faktör olarak belirli bir model ile deneyim göz ardı edilemez. Mümkün olan en iyi deneysel modelini seçerken Bir modelin ayırt edici özellikleri, belirli bir modelin, ilgi sonucu ölçümleri ve lojistik faktörleri ile operatör deneyimi göz önüne alınmalıdır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Stereotactic frame Stoelting Co. 51603
Probe holder with corner clamp Stoelting Co. 51631
Mini grinder Power Glide Model 60100002
0.5 μl syringe Microliter 86259 25 G needle
5 μl syringe Microliter 7637-01
30 G microliter syringe Microliter 7762-03
Syringe pump KD Scientific Model 100
Heat therapy water pump Gaymar Industries, Inc. Model# TP650
Circulating waterbed CMS Tool & Die, Inc.
Rodent ventilator Harvard Apparatus Model 683
Isoflurane vaporizer Drager Vapor 19.1
Air flowmeter Cole Parmer Model PMR1-010295
Induction chamber Self made
Otoscope Welch Allyn 22820
Intravenous catheter Becton-Dickinson 381534 20 G, 1.16 inch Insyte-W
Isoflurane Baxter Healthcare Corporation NDC10019-360-69
Collagenase Type IV-S Sigma C1889
Polyethylene tubing PE10 Becton-Dickinson 427401
27 G 1 1/4 inch needle Becton-Dickinson 305136
Surgical scissors Miltex 21-539
Forceps Miltex 17-307
Needle holder Boboz RS-7840
Monofilament suture Ethicon 8698 Size 5-0
Indicating controller YSI 73ATD

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Asch, C. J., et al. Incidence, case fatality, and functional outcome of intracerebral haemorrhage over time, according to age, sex, and ethnic origin: a systematic review and meta-analysis. Lancet Neurology. 9, 167-176 (2010).
  2. Qureshi, A. I., Mendelow, A. D., Hanley, D. F. Intracerebral haemorrhage. Lancet. 373, 1632-1644 (2009).
  3. Participants, N. I. W. Priorities for clinical research in intracerebral hemorrhage: report from a National Institute of Neurological Disorders and Stroke workshop. Stroke. 36, (2005).
  4. Morgenstern, L. B., et al. Guidelines for the management of spontaneous intracerebral hemorrhage: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke. 41, 2108-2129 (2010).
  5. James, M. L., Warner, D. S., Laskowitz, D. T. Preclinical models of intracerebral hemorrhage: a translational perspective. Neurocrit Care. 9, 139-152 (2008).
  6. Winkler, D. T., et al. Spontaneous hemorrhagic stroke in a mouse model of cerebral amyloid angiopathy. J Neurosci. 21, 1619-1627 (2001).
  7. Sinar, E. J., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. Experimental intracerebral hemorrhage: effects of a temporary mass lesion. J Neurosurg. 66, 568-576 (1987).
  8. Mendelow, A. D., Bullock, R., Teasdale, G. M., Graham, D. I., McCulloch, J. Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 2: Short term changes in local cerebral blood flow measured by autoradiography. Neurol Res. 6, 189-193 (1984).
  9. Bullock, R., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M., Graham, D. I. Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 1: Description of technique, ICP changes and neuropathological findings. Neurol Res. 6, 184-188 (1984).
  10. Sang, Y. H., Su, H. X., Wu, W. T., So, K. F., Cheung, R. T. Elevated blood pressure aggravates intracerebral hemorrhage-induced brain injury. J Neurotrauma. 28, 2523-2534 (2011).
  11. Krafft, P. R., et al. Modeling intracerebral hemorrhage in mice: injection of autologous blood or bacterial collagenase. J Vis Exp. , (2012).
  12. Sansing, L. H., et al. Autologous blood injection to model spontaneous intracerebral hemorrhage in mice. J Vis Exp. , (2011).
  13. Rosenberg, G. A., Mun-Bryce, S., Wesley, M., Kornfeld, M. Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats. Stroke. 21, 801-807 (1990).
  14. Nath, F. P., Jenkins, A., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. Early hemodynamic changes in experimental intracerebral hemorrhage. J Neurosurg. 65, 697-703 (1986).
  15. Anderson, C. S., et al. Rapid blood-pressure lowering in patients with acute intracerebral hemorrhage. N Engl J Med. 368, 2355-2365 (2013).
  16. Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. Citicoline treatment for experimental intracerebral hemorrhage in mice. Stroke. 29, 2136-2140 (1998).
  17. Mayer, S. A., et al. Efficacy and safety of recombinant activated factor VII for acute intracerebral hemorrhage. N Engl J Med. 358, 2127-2137 (2008).
  18. Mendelow, A. D., et al. Early surgery versus initial conservative treatment in patients with spontaneous supratentorial lobar intracerebral haematomas (STICH II): a randomised trial. Lancet. , (2013).
  19. James, M. L., Blessing, R., Bennett, E., Laskowitz, D. T. Apolipoprotein E modifies neurological outcome by affecting cerebral edema but not hematoma size after intracerebral hemorrhage in humans. J Stroke Cerebrovasc Dis. 18, 144-149 (2009).
  20. James, M. L., Blessing, R., Phillips-Bute, B. G., Bennett, E., Laskowitz, D. T. S100B and brain natriuretic peptide predict functional neurological outcome after intracerebral haemorrhage. Biomarkers. 14, 388-394 (2009).
  21. James, M. L., Sullivan, P. M., Lascola, C. D., Vitek, M. P., Laskowitz, D. T. Pharmacogenomic effects of apolipoprotein e on intracerebral hemorrhage. Stroke. 40, 632-639 (2009).
  22. James, M. L., et al. Brain natriuretic peptide improves long-term functional recovery after acute CNS injury in mice. J Neurotrauma. 27, 217-228 (2010).
  23. Indraswari, F., et al. Statins improve outcome in murine models of intracranial hemorrhage and traumatic brain injury: a translational approach. J Neurotrauma. 29, 1388-1400 (2012).
  24. Laskowitz, D. T., et al. The apoE-mimetic peptide, COG1410, improves functional recovery in a murine model of intracerebral hemorrhage. Neurocrit Care. 16, 316-326 (2012).
  25. Lei, B., et al. Interaction between sex and apolipoprotein E genetic background in a murine model of intracerebral hemorrhage. Translational Stroke Research. 3, (2012).
  26. Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. J Neurosurg. 118, 465-477 (2013).
  27. Nakamura, T., et al. Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice. J Cereb Blood Flow Metab. 24, 487-494 (2004).
  28. Yang, D., et al. Statins Protect the Blood Brain Barrier Acutely after Experimental Intracerebral Hemorrhage. J Behav Brain Sci. 3, 100-106 (2013).
  29. Rynkowski, M. A., et al. A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion. Nature Protocols. 3, 122-128 (2008).
  30. Wang, J., Fields, J., Dore, S. The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood. Brain Research. 1222, 214-221 (2008).
  31. MacLellan, C. L., et al. Intracerebral hemorrhage models in rat: comparing collagenase to blood infusion. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 516-525 (2008).

Tags

Tıp Sayı 89 intraserebral kanama fare preklinik otolog kan kollajenaz nörobilim inme beyin hasarı bazal ganglionlar
İntraserebral Kanama Fare Modellerinden olarak Otolog Blood veya Klostridyal Kollajenazının intrastriatal Enjeksiyon
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lei, B., Sheng, H., Wang, H.,… More

Lei, B., Sheng, H., Wang, H., Lascola, C. D., Warner, D. S., Laskowitz, D. T., James, M. L. Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage. J. Vis. Exp. (89), e51439, doi:10.3791/51439 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter