Introduction
Klarlegging av hendelsene underliggende hjerte respons på både iskemi og reperfusjon er avgjørende i å forbedre behandlingen av hjerteinfarkt 1 og hjerte kirurgiske prosedyrer som krever aortic kryssklem to. Selv om in vivo-modeller av iskemi reperfusjonsskade tillate meget nyttig sluttpunktanalyse, er de ikke så effektive for å studere de funksjonelle virkninger av iskemi reperfusjonsskade akutt i sanntid. I tillegg, in vivo ischemia reperfusjons-modeller generelt produsere betydelig variasjon i infarktstørrelsen, og direkte levering av medikament til hjertet ved tidspunktet for reperfusjon er utfordrende. Utnyttelsen av et Langendorff-hjerte isolert system for å studere iskemi reperfusjonsskade muliggjør sanntids funksjonelle vurderingen av farmakologiske behandlinger, ensartet område av infarkt vev, og øyeblikkelig levering av legemiddel direkte til myokard.
Først beskrevet by Oscar Langendorff i 1895 3, er Langendorff isolert hjerte et robust modell for å studere iskemi reperfusjonsskade, etter å ha blitt brukt i ischemi reperfusjon forskning i de siste 40 årene 4,5. Her er noen endringer gjort for å optimalisere den isolerte hjerte for funksjonell analyse. In situ kanylering av aorta mens hjertet er juling sikrer at hjertet ikke oppleve iskemisk prekondisjonering, noe som ville endre resultatene av iskemi reperfusjons prøvelser 6. For å lette dette, er en tracheotomy utført, slik at ventilasjon og sikre fysiologiske stabilitet av rotte under operasjonen. Hjertet blir deretter festet til et glass med vannkappe spiral kolonne Krebs Henseleit buffer blir levert via perfusjon retrograd gjennom hvilken direkte inn i aorta. En salt-fylt ballong blir satt inn i venstre hjertekammer og festet til en trykktransduser, som gir mulighet for sanntids måling av trykk fra inne i et hjertekammerd beregning av flere funksjonelle parametere. Ved avslutningen av forsøket, hjertet er spylt med kald saltløsning for å arrestere sammentrekning og flash-frosset i flytende nitrogen for å gjøre det mulig genetisk analyse av DNA, RNA og proteinnivåer. Således modifiserte tjener Langendorff perfusert hjerte som et effektivt system for direkte overvåkning av den fysiologiske effekten av farmakologiske intervensjoner som helst i løpet av akutt iskemi reperfusjonsskade.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer er oppført her har blitt godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité ved Medical University of South Carolina. Forsøkene som beskrives her er akutte, ikke-overlevelse eksperimenter. Som sådan, er det ingen bruk av øye salve og en steril operasjonssalen er ikke nødvendig. Avlivning er oppnådd ved blodtapping under høsting av hjertet.
1. Experimental Forberedelse
- Sett opp enten et konstant trykk eller konstant strøm Langendorff Perfusjons Apparatus 4.
- Forbered 4 L av modifisert Krebs Henseleit buffer (i mM: 112 NaCl, 5 KCI, 1,2 MgSO4, 1 K 2 HPO 4, 1,25 CaCl2, 25 NaHCO3, 11 D-glukose, 0,2 oktansyre, pH = 7,4).
- Gjør 10x lager buffere.
- Oppløse NaCl, KCl, MgSO4, og K 2 HPO 4 i tre L ultrarent vann.
- Løs opp CaCI2 i 500 ml ultrarent vann with 40 ml 1 N HCl.
- Tilsett langsomt CaCl2-løsning til bufferen laget i 1.2.1.1. Legg nok ultrarent vann til totalt fire L. Tillat å røre i 1 time før filtrering gjennom en 0,8 mikrometer filter. Oppbevar ved 4 ° C.
- Oppløse NaHCO3 i 4 L ultrarent vann. Tillat blandingen å omrøres i 1 time før filtrering gjennom ved 0,8 um filter. Oppbevar ved 4 ° C
- Kombiner 400 ml 10x Krebs Henseleit buffer med 400 ml 10x NaHCO3 buffer. Legg nok ultrarent vann til totalt fire L. Løs opp glukose og oktansyre under omrøring. Filtrer gjennom 0,8 mikrometer filter.
- Gjør 10x lager buffere.
- Forbered system for hjertet.
- Tilsett 2 liter filtrert buffer til en 4 l flaske plassert 38 i over stengeventilen er festet til den aortiske kanylen. Dette vil gi et perfusjonstrykk på 70-80 mmHg i hjertet, som er det anbefalte perfusjonstrykk 4.
- Sett gassdispersjon bobleren inn i bufferen i flasken.
- Kjør buffer gjennom systemet, å være sikker på å eliminere eventuelle bobler fra innsiden av produksjonsrøret.
- Skru på gass (95% O 2/5% CO2) i minst 30 minutter før hjertet skal plasseres på systemet. Bruk en gasstrøm sonde og blod gass analysator for å kontrollere oksygenmetning.
- Forbered kirurgiske forsyninger og ballong.
- For høsting av hjertet, forberede ett par 6,75 "kirurgisk saks, ett par 4,5" saks, to par hemostats, to sett med caramalt tang, to sprøyter med 27 G kanyler, to stykker av 0-gauge silke sutur (ca 15 cm i lengde), en 1/16 tomme kanyle piggtråd, og en trakeal kanyle.
- Å montere trakealkanyle, lim et kort stykke 1/16 tommers diameter plastrør til en Y-kobling.
- Å montere ballong apparat: feste en sonde nål til et stykke 1/16 tommers rør, deretter feste slangen til trykkgiver boliger. En liten sprøyte festet til den andre siden av trykk transducer boliger vil tillate fylling og tømming av ballongen.
- Skjær et torg i plastfolie og legg spissen av en sonde nål i sentrum. Pakk plastfolie rundt sonde nål.
- Fyll ballong med saltvann og feste med to sting. Blåse ballongen for å sikre at det ikke er noen lekkasjer. Volumet av saltoppløsning i den oppblåste ballongen bør være omtrent 200 ul, men kan variere avhengig av størrelsen på rotte.
- Alternativt kan du bruke en latex finger sprinkelseng i stedet for plastfolie. Plasser sonde nål i fingeren sprinkelseng, fyll med saltvann og feste.
2. Harvests hjertet
- Beherske et Sprague Dawley rotte bruker en decapicone eller annen manuell tilbakeholdenhet enhet. Vei rotte.
- Administrere ketamin / xylazin blanding (0,85 mg / kg ketamin og 0,15 mg / kg xylazin) via intraperitoneal injeksjon for å bedøve rotte. Denne dose av anestesi vil gi tilstrekkelig anestesi for20-40 min, men prosedyren skal gjennomføres så raskt som mulig etter anestesi er bekreftet.
- Bekreft riktig grad av anestesi ved testing tå klype refleks.
- Tracheotomy
- Fjern skinnet fra midten forepaw til base av kjeven, ved hjelp hemostats å heve pelsen og saks for å gjøre snittet. Hold pelsen forhøyet for å skille den fra den underliggende muskel, tillater en å klippe langs pelsen og fjerne det.
- Bruke hemostats, løft kjertelvevet og gjør en horisontal snitt i fascia dårligere kjertelvevet. Bruk hemostats å spre snitt åpent, tar seg ikke å nick vena vener.
- Ved hjelp av hemostats, klemme muskeloverliggende luftrøret, og ved hjelp av saks foreta en tverrgående snitt i muskelen rett under spissen av hemostatene. Bruke hemostats, spre vev fra hverandre for å avdekke luftrøret.
- Sett forsiktig hemostats henhold luftrør, clearing fascia mens framdrift ved forsiktig fremme og trekke hemostats.
- Når hemostats er vellykket plassert bak luftrøret, klemme 0-0 silke sutur med hemostats og hemisect luftrøret med en liten, skarp saks.
- Sett trakealkanyle inn i hemisected luftrøret, trekker sutur bak luftrøret, og knytte sutur rundt kanylerte luftrøret, forankring sutur til Y-lysken av kanylen med kirurger knute.
- Ved å bruke en 27 G nål, sprøyte 1000 U / kg heparin inn i vena jugularis og la det sirkulere i 30 sek.
- Toraktomi
- Fjern skinnet fra midten av magen til midten forepaw regionen ved å knipe med hemostats og kutte med saks.
- Lag en ¾ tommers tverrgående snitt i magemuskelen veggen, like under mellomgulvet.
- Lag en vertikal snitt opp bukveggen og brystveggen, klippe langs brystbenet.
- Kutt membranen tilbake bilateralt, deretter spredte brystkasse for å avdekke hjerte, klemme brystkasse med hemostats å sikre at den forblir spredning. Bruke hemostats fjern forsiktig thymus, utsette stigende aorta.
- Erte hemostats gjennom aorta loop, fremme og trekke hemostats og forsiktig spre konseptet slik at spissen av hemostats gjennom.
- Bruk hemostats å trekke 0-0 silke sutur bak stigende aorta, tie sutur i en løs halv firkantet knute.
- Slå stoppekran for å starte strømmen av perfusjon buffer, hemisect aorta og umiddelbart sette kanylen inn i aorta lumen. Raskt cinch en halv firkantet knute og full knuten, strammer grundig.
- Bruk saks til å dissekere hjerte bort fra de store skipene, fjerne hjertet fra brystet og feste til perfusjon kolonne.
- Trimme vekk overflødig lungevev og la hjertet til stabilisering på kolonnen for ca 15 min før innsetting av ballongen. Bruk en normal strømningshastighet buffer gjennom sentrum av 10-20 ml / min.
3. Langendorff Perfusjons og iskemi reperfusjonsskade
- Plassering av LV pressure ballong
- Deflatere ballongen mens du ruller inn i en kjegleform og slå stoppekran for å sikre ballongen fortsatt nedpakket.
- Vesenet venstre atrium med en liten saks til å eksponere tilgang til mitralklaffen.
- Sett ballongen gjennom venstre atrium og mitralklaffen inn i venstre hjertekammer.
- Starte trykk overvåkingsprogram (LabChart Pro).
- Blåse ballongen ved å åpne kraner og forsiktig økende mengden av saltvann i ballongen før diastoliske trykket lesing fra mikromanometer stiger null.
- For å sjekke lengde-spenningsrespons, blåse ballongen sakte til en diastolisk trykk på 75 mmHg, deflate sakte, gjenta en gang.
- Sett diastolisk trykk til 10 mmHg ved å modulere mengden av saltvann i ballongen. Slå stoppekran for å forsegle ballong på dette nivået av inflasjon, og opprettholde lukket trykksystem mellom LV ballong og trykkgiver.
- Lavere hjerte i oppvarmet kammer og deksel kammer med plast.
- Administration av iskemi reperfusjonsskade
- Plugg bunnen av oppvarmet kammer og tillate kammeret fylles med effused buffer.
- Når bufferen er nedsenket hjertet, slår stengeventilen for å stoppe strømmen av bufferen inn i hjertet, indusere global ischemi. Iskemi tid kan variere avhengig av målene for forsøket.
- Etter 30 minutter av iskemi, slår stoppekran for å gjenopprette flyten av buffer i hjertet, initiere reperfusjon.
- Tillat reperfusjon av hjertet for en time før avslutning av forsøket. Bruk variable reperfusjons ganger, avhengig av målene for forsøket.
- Opphør av eksperiment og Innhøsting av Tissue
- Ved hjelp av sideporten til kraner, administrere 10 ml fosfatbufret saltoppløsning ved 4 ° C inn i hjertet ved en hastighet på 10 ml / min for å stanse hjertet.
- Fjern hjerte fra perfusjon kolonnen, trimme bort rester atrial vev.
- Plasser hjerte i rustfritt stål vev slicing matrise, dekk med Parafilm og sted ved -80 ° C i 8 minutter, eller inntil hjertet har en marshmallow-lignende konsistens.
- Fjern kvartal fra fryseren og sett barberblad til å skjære matrise for å skjære hjertet i 2 mm skiver. Vevsblokker kan også kjøpes med andre enn 2 mm skive størrelser.
- Fjern skiver om gangen, og faller ned i flytende nitrogen for å fryse blinke for biokjemiske studier. Beholde den tredje ventrikkel skive fra toppen for infarkt farging.
- Fjerne vev fra flytende nitrogen og oppbevares ved -80 ° C frem til anvendelse i biokjemiske forsøk.
- Infarkt Farging
- Inkuber den tredje ventrikkel skive i 10 ml av 1% w / v trifenyltetrazoliumklorid (TTC) ved 37 ° C i 15 min.
Note: inkubering i TTC kan utføres i 15 eller 30 min med ingen endring i effektivitet 15. - Overfør vev stykke fra TTC til 10% bufret formalin, og tillater å inkubere ved romtemperatur over natten. For optimale resultater, hørets bør tas ut av formalin og avbildes innen 24 timer 4.
- Foto farget skive og bruke programvare som ImageJ å anslå infarktstørrelsen i henhold til produsentens protokoll. Ta bilder så snart som mulig etter fiksering, som fargestoff vil svekkes over tid.
- Inkuber den tredje ventrikkel skive i 10 ml av 1% w / v trifenyltetrazoliumklorid (TTC) ved 37 ° C i 15 min.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Venstre ventrikkel ballong apparat muliggjør sanntidsovervåking av trykket utviklet av avtalen venstre ventrikkel (figur 1). Som tidligere beskrevet 7, kan dette trykk trase kan brukes til å beregne mange av parametrene av ventrikulær funksjon. Disse beregningene kan utføres i referansefase så vel som reperfusjon fase, i gjennomsnitt over flere traser i hver gruppe, og sammenlignet for å bestemme hvorvidt den farmakologisk intervensjon resulterte i hjerte forkondisjonering, som vi har gjort tidligere ni. En slik parameter er utviklet trykk, beregnet som forskjellen mellom systolisk blodtrykk og slutt diastoliske trykket. Den utviklede trykk i normale perfuserte rottehjerter kan variere 70-130 mmHg (figur 1A). Etter en iskemisk fornærmelse, er utviklet trykket reduseres og slutt diastoliske trykket løfter (Figur 1b). Da rottene eradministreres en kjent prekondisjonering middel slik som klasse I og IIb HDAC-inhibitor Saha (vorinostat) 18 før excising hjertet, er reduksjonen i utviklede trykk og heving av diastolisk trykk assosiert med iskemi reperfusjonsskade dempes (figur 1C). Andre mål på venstre ventrikkel funksjon, for eksempel frekvensen av trykket generasjon (dP / dt maks), kan frekvensen av trykket avslapning (-dP / dt maks), og hastigheten trykket produkt (RPP) oppnås direkte eller beregnes ut fra Programvaren utgang (figur 2). Iskemisk fasen kan også overvåkes i sanntid, med den tilsynelatende opphør av press generasjon innen få minutter etter start av iskemi. Iskemisk sammentrekning kan også overvåkes ved å måle tid til utvikling av sammentrekning og tid til maksimal sammentrekning.
Trifenyltetrazoliumklorid (TTC) er vanligvis brukt for å skille mellom en metabolskctive og inaktivt vev, og er her brukt for infarkt farging. Når absorbert i vevet TTC reduseres med metabolske enzymer, snu det aktive vev rødt. Inaktiv vev reduserer ikke TTC, og som sådan vil farge hvit 8. Langendorff perfundert rottehjerter som ikke har vært utsatt for iskemisk skade ikke viser noen hvite områder (ikke vist), mens hjertene utsatt for iskemi reperfusjonsskade viser betydelige områder farget hvit, indikerer infarkt vev (figur 3).
Figur 1: Representative trykk spor fra venstre ventrikkel ballong Trykk registrert av LV ballong på ventrikkel sammentrekning.. Hjerter ikke utsatt for ischemi (A) oppstår et mindre tap av kontraktile egenskaper over tid. Hearts utsatt for iskemi (B) viser immedIate trykktap generasjon, etterfulgt av tonic sammentrekning. Ved reperfusjon, disse hjertene oppleve forhøyet EDP og redusert utviklet press. Hearts forbehandlet med Saha og utsatt for iskemi (C) viser demping av iskemi reperfusjonsskade. N = 1 per gruppe.
Figur 2: Beregnet parametere av ventrikkelfunksjon Valuta press generasjon (A), sats på trykk avslapning (B), utviklet trykk (C), og hastigheten press produkt (D) er noen parametre for ventrikkelfunksjon som kan beregnes fra. trykk overvåkingsprogram.
Figur 3: TTC farging for infarkt området.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den isolerte perfuserte rottehjerte med hell kan anvendes for å studere effekten av farmakologisk intervensjon på kardial iskemi prekondisjonering i reperfusjonsskade 9. Det er imidlertid noen viktige skritt til prosedyre som må standardiseres for å sikre reproduserbare resultater. Å opprettholde en temperatur på 37,4 ° C i systemet er kritisk, som selv mild hypotermi og hypertermi kan forårsake hjerte prekondisjonering 10,11. Den totale tiden det tar fra injeksjon av anestesi til fjerning av hjertet må holdes på et minimum, som langvarig eksponering for ketamin kan forstyrre hjerte preconditioning 12. Rettidig kanylering av aorta in situ er avgjørende for å hindre utvikling av hypoksi i hjertet eller blodtapping av dyret før hjertet excision. Totalt sett er tiden fra første innsnitt til fjerning av hjertet bør ikke være lenger enn 6-8 min. Den venstre ventrikkel balloon må sjekkes for lekkasjer før hvert forsøk, og eventuelt skiftes ut. Systemet må omhyggelig opprettholdes, inkludert spyling av hele apparatet med destillert vann etter hver kjøring, og erstatte utslitte rør som er nødvendig for å hindre lekkasje eller forurensning av det indre av produksjonsrøret.
Det isolerte hjerte kan modifiseres for en rekke nye anvendelser, inkludert fluorescensavbildning 13, NMR-spektroskopi 7, og optisk mapping 14 blant mange andre. Systemet kan også modifiseres for å perfuse hjerter fra forskjellige dyr, inkludert mus. Denne endringen er spesielt nyttig som det gir mulighet for eksperimenter ved hjelp av transgene mus. For å modifisere systemet for mus hjerter, mindre kanyler og en mindre perfusjon kolonne må benyttes, i tillegg til andre modifikasjoner. Detaljerte beskrivelser av hvordan man kan utnytte den Langendorff metode for mus hjerter er blitt publisert andre steder 16,17. Andre modifikasjoner avdenne protokollen omfatter administrasjon av ulike rusmidler på ulike tidspunkter. Ved å undersøke muligheten av et medikament for å forårsake farmakologisk prekondisjonering eller post kondisjonering, er det viktig å administrere medikamentet ved forskjellige tidspunkter i forhold til iskemi reperfusjonsskade. Medikamentet kan administreres til dyret før hjertet er skåret ut, eller blandes inn i bufferen enten før hjertet er plassert på kolonnen eller i løpet av ischemiske fasen slik at medikamentet er til stede ved reperfusjon. Alternativt kan en side-port benyttes for å administrere en bolus av medikament som helst punkt i løpet av protokollen. I tillegg kan protokollen endres for å endre varigheten av ischemi, reperfusjon, eller begge deler. Dette tillater analyse av funksjonelle og biokjemiske data ved flere tidspunkter og kan benyttes til å følge tidsforløpet av den akutte effekten av et legemiddel. Hvis reperfusjon periode endres, er det viktig å merke seg at minst 60 minutter av reperfusjon er nøssary for TTC flekker å effektivt avgrense infarkt område 15.
Den største begrensningen av den isolerte hjertet modellen i form av iskemi reperfusjonsskade er at det ikke står for mange av de systemiske faktorer som er til stede i innstillingen av iskemi reperfusjon in vivo. Denne eliminering av systemisk innflytelse må tas hensyn til i analysen av data som genereres ved hjelp av Langendorff-modellen, men utelukker ikke muligheten av modellen for å svare på nye spørsmål om responsen av muskelceller, fibroblaster og endotelceller til ischemi og påfølgende reperfusjon. Det isolerte hjerte modellen gir mulighet for fullstendig manipulering av mange av de variabler som påvirker iskemi reperfusjonsskade i tillegg til sanntids analyse av de funksjonelle effekter på hjertet over korte tidsintervaller. De data som genereres ved hjelp av isolerte hjertesystemet er uvurderlig for å forstå farmakologisk prekondisjonering eller post kondisjonering avhjerte i respons til forskjellige farmasøytiske intervensjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Denne publikasjonen ble støttet av South Carolina Klinisk og translasjonell forskning (SCTR) Institute, med en akademisk hjem ved Medical University of South Carolina, NIH / NCATS Grant Antall UL1 TR000062. Ytterligere støtte ble gitt av VA merit award BX002327-01 til DRM. DJH ble støttet av NIH / NCATS Grant Antall TL1 TR000061 og ved NIH Grant Antall T32 GM008716. SEA ble støttet av NIH Grant Antall T32 HL07260.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Potassium Chloride | Sigma Aldrich | P9541 | |
| Magnesium Sulfate | Sigma Aldrich | 203726 | |
| Potassium Phosphate Dibasic | Sigma Aldrich | RES20765-A7 | |
| Calcium Chloride Dihydrate | Sigma Aldrich | C8106 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S5761 | |
| D-Glucose | Sigma Aldrich | G8270 | |
| Octanoic Acid | Sigma Aldrich | C2875 | |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Sigma Aldrich | T8877 | |
| Medical Pressure Transducer | MEMSCAP | SP844 | |
| Masterflex Peristaltic Pump | Cole Parmer | EW-07521-40 | |
| Masterflex Easy Load Pump Head | Cole Parmer | EW-07518-10 | |
| Heated circulating water bath | Lauda | M3 | |
| Tubing Flow Module | Transonic | TS410 | |
| Modular Research Console | Transonic | T402 | |
| Inline flow sensor | Transonic | ME2PXN | |
| PowerLab Data Acquisition Device | AD Instruments | PL3508 | |
| LabChart data acquisition software | AD Instruments | MLU60/8 |
References
- Bainey, K. R., Armstrong, P. W. Clinical perspectives on reperfusion injury in acute myocardial infarction. American Heart Journal. 167 (5), 637-645 (2014).
- Beyersdorf, F. The use of controlled reperfusion strategies in cardiac surgery to minimize ischaemia/reperfusion damage. Cardiovascular Research. 83 (2), 262-268 (2009).
- Langendorff, O.
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).
- Tyers, G. F., Todd, G. J., Neely, J. R., Waldhausen, J. A. The mechanism of myocardial protection from ischemic arrest by intracoronary tetrodotoxin administration. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 69 (2), 190-195 (1975).
- Murry, C. E., Jennings, R. B., Reimer, K. A. Preconditioning with ischemia: A delay of lethal cell injury in ischemic myocardium. Circulation. 74 (5), 1124-1136 (1986).
- Kolwicz, S. C., Tian, R. Assessment of cardiac function and energetics in isolated mouse hearts using 31P NMR spectroscopy. The Journal of Visualized Experiments. (42), (2010).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: Validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. American Heart Journal. 101 (5), 593-600 (1981).
- Aune, S. E., Herr, D. J., Mani, S. K., Menick, D. R. Selective inhibition of class I but not class IIb histone deacetylases exerts cardiac protection from ischemia reperfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 138-145 (2014).
- Yellon, D. M., et al. The protective role of heat stress in the ischaemic and reperfused rabbit myocardium. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 24 (8), 895-907 (1992).
- Khaliulin, I., et al. Temperature preconditioning of isolated rat hearts--a potent cardioprotective mechanism involving a reduction in oxidative stress and inhibition of the mitochondrial permeability transition pore. The Journal of Physiology. 581 (Pt 3), 1147-1161 (2007).
- Molojavyi, A., et al. Effects of ketamine and its isomers on ischemic preconditioning in the isolated rat heart). Anesthesiology. 94 (4), 623-629 (2001).
- Asfour, H., et al. NADH fluorescence imaging of isolated biventricular working rabbit hearts. The Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).
- Sill, B., Hammer, P. E., Cowan, D. B. Optical mapping of langendorff-perfused rat hearts. The Journal of Visualized Experiments. (30), (2009).
- Ferrera, R., Benhabbouche, S., Bopassa, J. C., Li, B., Ovize, M. One hour reperfusion is enough to assess function and infarct size with TTC staining in langendorff rat model. Cardiovascular Drugs and Therapy. 23 (4), 327-331 (2009).
- Sutherland, F. J., Shattock, M. J., Baker, K. E., Hearse, D. J. Mouse isolated perfused heart: Characteristics and cautions. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 30 (11), 867-878 (2003).
- Reichelt, M. E., Willems, L., Hack BA,, Peart, J. N., Headrick, J. P. Cardiac and coronary function in the langendorff-perfused mouse heart model. Experimental Physiology. 94 (1), 54-70 (2009).
- Xie, M., et al. Histone deacetylase inhibition blunts ischemia/reperfusion injury by inducing cardiomyocyte autophagy. Circulation. 129 (10), 1139-1151 (2014).
