Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil

Published: December 4, 2015 doi: 10.3791/53313
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1Department of Veterinary Preventive Medicine, The Ohio State University

Abstract

Influenza A virüs hızla domuz toplumlarda gelişir ve yeni suşlar ortaya çıkmaya devam ediyor, çünkü domuz influenza A virüsleri için Gözetleme insan ve hayvan sağlığına için çok önemlidir. Domuz onlara çıkması ve yeni influenza A virüsünün bakımı suşları için önemli ana yapım influenza A virüsünün farklı soy tarafından enfekte edilmesi mümkün bulunmaktadır. Böyle ticari domuz çiftlikleri, tarım fuarları ve canlı hayvan pazarlarında gibi çeşitli ortamlarda domuz Örnekleme halen IAV suşları dolaşan kapsamlı bir görünüm sağlamak için önemlidir. Bu domuzların fiziksel kısıtlama gerektirdiğinden güncel altın standart ante-mortem örnekleme tekniği (burun bezlerden yani toplama) emek yoğundur. Burun mendiller hayvanın hiçbir kısıtlama minimal ile domuz burnu genelinde kumaş parçasını ovuşturarak barındırır. Burun prosedürü gerçekleştirmek için basit ve profesyonel veteriner veya hayvan taşıma eğitimi ile personel gerektirmez silin. Wnazal bezlerden biraz daha az duyarlı hile, virüs algılama ve izolasyon oranları nazal düşük stres örnekleme yöntemleri gerektiğinde bireysel domuz örnekleme için bir alternatif mendil yapmak için yeterli. Işlem protokolü uygulanabilir bir nazal toplamak için gerekli adımlar tek bir domuz silin özetliyor.

Introduction

Grip A virüsleri (IAV) evcil kuşlar, domuz ve insan da dahil olmak üzere pek çok türde, solunum hastalıklarına neden olur. Nedeniyle oluşabilir parçalı IAV genom hızlı viral evrim reassortment ve yeni IAV suşları sık sık ortaya çıkar. Domuz yaygın Kuzey Amerika domuz (H1N1, H1N2, H3N2) arasında dolaşan IAV üç ana alt tipi bulunmamaktadır. 1 birden çok ana türden iAVS yeniden yapılanması için bir karıştırma kabı olarak hizmet edebilen bir türün, ancak insan çoklu IAV tanıtımlar sahip Bu alt tipleri içinde yaygın IAV çeşitliliğe yol açtı. domuz bulaşmasını iAVS 2 Hızlı evrimi, insan, kuş ve domuz virüslerinin gen segmentleri içeren üçlü reassortant IAV 3 ABD'de domuzlar arasında yaygınlaşan 1998 yılından beri belirgin olmuştur. 4 dahili gen Bu üçlü reassortant IAV gelen segmentleri şu anda domuz bulaşmasını iAVS arasında oldukça yaygın kalır. 5

"> Dünya, IAV tipik klinik bulgular ateş, iştahsızlık, uyuşukluk, öksürük dahil olduğu domuz solunum hastalığı önemli bir nedenidir, burun akıntısı ve kilo alımının yetersiz hapşırma, nefes darlığı. IAV nerede üreme çiftlikleri ekmek özellikle pahalıya mal olabilir nedeniyle IAV kaynaklı ateş ve zayıf doğumlu domuz yavrusu başarısızlık belgelenmiştir. 6,7 Amerika Birleşik Devletleri içinde IAV yaygın ticari domuz sürüleri ve IAV bulaşmasını domuz arasında yaygın antijenik ve genomik çeşitlilik ve sürekli evrim tespit edildiğinde, bu kontrol engel olan Virüs. 8-11

Üçlü reassortant Kuzey Amerika domuz soy ve Avrasya kuş-benzeri domuz soyundan gelen gen segmentleri içeren bir domuz-soy IAV dünya çapında bir salgın nedeniyle zaman 2009 yılında gerçekleşmiştir domuzlarda reassortment kaynaklanan bir salgın IAV soyunun ortaya çıkışı hakkında halk sağlığı kaygıları İnsanlarda. 12 pandemik virüs (A (H1N1) pdm09) beri varendemik domuz ile reassorted IAV 13,14 suşları ve bu yeni reassorted suşların bazı insanlara geri ahiren paylaşılmıştır. 15 reassorment olaylar ve pandemi potansiyeli olan yeni IAV suşlarının ortaya çıkması domuz zorunlu olarak IAV virüs dolaşımdaki aktif sürveyans yapar sıklığı, özellikle domuz-insan arayüzünde.

Domuz-insan arayüzü IAV çift yönlü türler arası iletimi için önemlidir. Insan-to-domuz ticari domuz üretiminde ortaya çıkan iletim domuz popülasyonda anda mevcut IAV çeşitlilik büyük miktarda sorumludur. Tarım fuarları ABD'de insanların domuz comingling için büyük ayarları ve bir varyant H3N2 IAV salgını sırasında, IAV zoonotik iletimi için siteler. 2012 yılında 15-21 bilinmektedir, vakaların% 93 katılımın bildirdi günlerde bir tarım fuarı hastalığın başlangıcında önce. 15 Genomik analizzoonotik iletim doğruladı insan izolatlar ile karşılaştırıldığında sergi domuzların viral izolatların. IAV ile enfekte 21 Sergi domuz genellikle doğrudan tanısal testler için ihtiyaç gösteren hastalık, 21-23 klinik belirtilerini göstermez.

Gözle görülür hasta domuz Örnekleme yalnız başarıyla domuzlarda IAV yaygınlığını tespit olmaz ve domuz arasında çıkan IAV yeni suşları belirlemek için dayanıyordu olamaz. Aktif sürveyans IAV ortaya çıkan suşlar domuzlarda ve domuz ve halk sağlığı hem de kendi tehdidi değerlendirmek tespiti için kesinlikle gereklidir. Çoğu IAV gözetim faaliyetleri gönüllü ve bu nedenle minimal yıkıcı yöntemlere ihtiyaç vardır vardır. IAV domuz bulaştırdıkları için üç önemli ölüm öncesi numune toplama prosedürleri vardır: Burun bezlerden, sözlü sıvılar ve burun mendil. IAV listesine sentetik elyaf sokulmasını algılamak için bireysel domuz örnekleme için akım tavsiyeler tercih edilen yöntem olarak burun deliklerine bezlerden uçluburun salgıları ve epitel hücreleri toplamak için. 24,25 domuz ya elle ya da bir tuzak hayvanın büyüklüğüne bağlı olan domuz dizginlemek gerekir bu prosedürü, eğitimli personel bir ekip önlemek için deneyebilirsiniz çünkü. 26 emniyet süreci için zahmetli personel ve domuzlar için stresli. Bir yarışma hayvan eklenen stres algısı gözetim çabalarına sahipleri dirençli yapabilirsiniz Ayrıca, sergi domuz genellikle fuarda birden yarışmalarda katılıyor.

80-100 den% IAV enfekte sürüler arasında değişen IAV algılama olasılıkları ile sözlü sıvılar domuzların popülasyonlarında IAV moleküler tespiti için bezlerden burun popüler bir alternatif haline gelmiştir. 27,28 Ayrıca, ağız sıvıları daha geniş bir pencere sağlayabilir İlk enfeksiyonu takiben nazal bezlerden daha IAV algılama. Ancak, ağız sıvılardan IAV izolasyon virus izolasyonu girişimleri sadece% 50'si IA ile sonuçlanan sorunlu olmuşturV kurtarma. 29

Domuzlarda IAV gözetim sırasında burun bezlerden yerine burun mendil kullanarak yukarıda açıklanan sınırlamalarının üstesinden gelir. Nazal mendiller bir yasaklama tuzak kullanımını gerektirmeyen ve prosedürün hayvan veya tanıkları zorlamadan yapılabilir. Minimal teknik eğitim gözetim örnekleri toplamak için, domuz sahipleri de dahil olmak üzere sivil veteriner profesyonelleri, izin verir burun mendil, toplamak için gereklidir. Burun silme bezleri, daha önce A virüsü 30 ve örnekleme bu invazif olmayan bir yöntem için ayrıntılı bir protokol, aşağıda tarif edilmiştir algılama ve grip izolasyonu için burun bezlerinde karşılaştırılmıştır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Aşağıdaki veri toplanmasında kullanılan tüm domuz Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu koruma altına alınmıştır (hayvan kullanım protokol numarası 2009A0134-R1).

1. Viral Transport Orta Hazırlanması ve Numune Toplama Flakon

  1. Saf su 900 ml beyin kalp infüzyon 37 g eklenir ve ısıtma 70 ° C, tamamen tozu çözmek için ise, bir karıştırma çubuğu ve manyetik bir karıştırıcı ile iyice karıştırın.
  2. 15 dakika boyunca 121 ° C'de suyu otoklava. Suyu kadar tezgah üstünde Serin oda sıcaklığını ulaşır. 4 ° C 'de bir gece buzdolabında gerekirse.
  3. Bir manyetik karıştırma çubuğu, Penisilin G Sodyum tuzu 6,02 g, oda sıcaklığında saflaştırılmış su içinde 50 ml streptomisin sülfat, 10 g ile karıştırılarak, eritin. 100 ml toplam hacmi getirmek için ilave saf su ekleyin. Steril şişe içine 0,22 um polietersülfon zarından solüsyonu filtre.
  4. Aseptik soğutmalı Beyin Kalp İnfüzyon Broth içine süzülmüş penisilin ve streptomisin çözüm ekleyin ve viral taşıma ortamı yapmak için iyice (karıştırma çubuğu ya da elle girdap şişesi) karıştırınız.
  5. Aseptik viral taşıma ortamı pH testi; Gerekirse, HCI veya NaOH kullanılarak 7.4 ± 0.2 pH ayarlamak.
  6. Zhang ve Harmon tarafından anlatıldığı gibi, RRT-PCR ile influenza A virüs matriks protein test ederek viral taşıma ortamında kalite güvence testleri gerçekleştirin. 22
  7. 8 ml kapasiteli steril, yüksek yoğunluklu polietilen şişeler içine viral taşıma ortamının 5 ml koyun. Alanında kullanım için şişeleri etiketleyin.
  8. Numune toplama kadar -20 ° C'de standart bir kriyo-kutularda hazır kullanım şişeleri saklayın.

Domuz adlı Burun Mendil 2. Koleksiyonu

  1. Toplama örnek hemen önce şişeleri uygun sayıda çözülme; tek şişe örneklenmiş domuz başına ihtiyaç duyulacaktır. Odasında çözündüktensıcaklığı yaklaşık 30-45 dakika sürer. Çözülmüş şişeleri kullanılana kadar buz paketleri üzerinde serin tutun.
  2. Don uygun kişisel koruyucu ekipman durumdan tarafından dikte (örn tulumlar, çizme kapakları, solunum, kulak tıkacı,) olarak.
  3. Hayvan alanını girin. Gerekirse, küçük bir alana domuz sınırlandırmak ama dizginlemek hayır yoktur. Hayvanları dinlenme canlandırmak etmeyin.
  4. Tek kullanımlık sınav bir çift eldiven giyin. Dokunmadan domuz, insanlar, ya da cansız nesneler tarafından eldiven kontamine etmemeye dikkat edin.
  5. (2 ile. Büyük × 2.) 5.08 cm x 5.08 cm steril kaldırmak için bir eldivenli elinizi kullanın pamuklu gazlı bez ambalajından. Steril gazlı bez, mümkün kullanılmalıdır. Bireysel sarılı gazlı bez paket başına iki gazlı bez ile sarılmış olanlar daha kullanmak daha uygundur.
  6. Bir elin parmak uçları örnekleme için mümkün olduğunca ped kadar açığa pamuk gazlı bez tutun.
  7. Alarak, domuz burnu genelinde gazlı bez silinMümkünse ekstra bakım harici burun deliğine girmek için. Aynı gazlı bezle görünür burun salgıları (yaklaşık 1 ml) toplayın.
  8. Aynı eli kullanarak, viral transport medium içeren flakon yerleştirilmesini kolaylaştırmak için kendi üzerine gazlı bez katlayın.
  9. Diğer elinizi kullanarak, şişenin kapağını kaldırın ve şişenin içine katlanmış gazlı bez yerleştirin. Şişeyi tekrarlamak ve gazlı bezle ve viral taşıma ortamı karışmasını sağlamak için şişeyi sallayın.
  10. Uygun bir kabın içinde eldiven ve yer çıkarın. Her domuz arasındaki eldiven değiştirin.
  11. Şişe tanımlayıcı doğrulayın. Kayıt domuz kimlik numarası, yaş, cinsiyet, klinik bulgular ve araştırmacı tarafından gerekli görülen diğer notlar.
  12. Toplandıktan hemen sonra numuneleri Chill. Birden donma-çözülme döngüleri önlemek için dondurmadan önce örnek hacimde yapma düşünün. En kısa sürede toplandıktan sonra mümkün olduğunca, laboratuara taşınması için kuru buz üzerinde örnekleri yerleştirin. Şişeleri de saklayın -80Test başlayana kadar ° C.

3. Tespit Gribi A Virüsü Nükleik Asit

  1. 5 dakika boyunca 37 ° C kuru boncuk banyosunda örnekleri çözülme ve daha sonra 20-30 dakika için oda sıcaklığında, bir tezgah üstünde örnekleri çözülme tamamlanır. Boncuklara birkaç flakon eş-zamanlı ilavesinin banyosu ısıya neden olur; dikkatli şişeleri ısınmasına değil gibi olunmalıdır.
  2. RNA ekstraksiyonu için viral taşıma ortamının 100 ul çıkarın.
    1. Örneklerin çok sayıda RNA çıkarmak için yüksek verim (96 oyuklu plaka formatı) manyetik boncuk platformu kullanın. 31
  3. Hızlı algılama influenza A virüs için gerçek zamanlı ters transkriptaz PCR deneyleri kullanın. 31

Grip 4. İzolasyon Burun Mendil A Virüsü

  1. Bölüm 3.1'de tarif edildiği gibi numuneler çözülme
  2. (1000 gentamisin sülfat ile çözülmüş örnekleri tedavi| ig / ml), amfoterisin B (22.5 ug / ml) ve kanamisin sülfat (325 ug / ml).
  3. Madin-Darby Köpek Böbrek içine inoküle (MDCK), daha önce tarif edildiği gibi epitel hücreleri. 32

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Bu yöntemin başarılı kullanımı RRT-PCR herhangi bir çevresel enkaz numune alma sırasında aldı RNA ekstraksiyonu ve RRT-PCR sırasında iç kontrolün kullanımı ile birlikte, gösteri örnekleri PCR inhibitörleri içermiyordu, bu sonuçlar verir. Örnek aşılamadan sonra, virüs izolasyon kuyuları örnekten görülebilir çevre enkaz arındırılmış olmalıdır. PCR viral nükleik asit, ille canlı virüs tespit, çünkü PCR genellikle virüs izolasyonu daha yüksek IAV pozitif oranı getirir anlayışı ile RRT-PCR sonuçları ve virüs izolasyonu sonuçları arasında makul bir anlaşma vardır.

Sonuçlar burun mendil IAV için geçerli altın standart örnekleme tekniği olan bezlerden, burun kullanışlı bir alternatif olduğunu göstermektedir. Edwards ve diğ. Bu çalışmada 2013 döneminde ABD'de tarım fuarlarda domuzlar toplanmıştır burnu mendil ve burun sürüntü karşılaştırmasını gerçekleştirilen, domuzlar hem nazal ile örneklenmiştirbezlerden ve burun mendil ve örnekler RRT-PCR ve virüs izolasyonu ile paralel test edildi. Edwards ve diğ. tespiti ve IAV izolasyonu RRT-PCR ile ve kültürlü hücrelerde virüs izolasyonu hem uyum 553 eşleştirilmiş burun sürüntü karşılaştırılması ile ortaya konmuştur ve burun örnekleri silin bildirdi. Bu test örnekleri Of 30,% 93.5 (517/553) RRT-PCR testi sonuçlarının anlaşması (Tablo 1) ve% 92,4 (511/553) idi MDCK hücrelerinde virüs izolasyonu ile anlaşmaya burun bezlerden karşılaştırıldığında burun mendil tahmini RRT-PCR hassasiyeti (Tablo 2). 21 idi % 92.9 ve burun bezlerden karşılaştırıldığında burun mendil tahmini IAV izolasyon duyarlılığı% 82.9 idi. Edwards ve diğ., Daha önce RRT-PCR ve virüs izolasyonu hem pozitif nazal mendil virüs izolasyonu (= 31.96 Ct) için RRT-PCR ile pozitif ama negatif bulunmuştur nazal mendil daha düşük Ct değeri (24.32) ortalama belirtti. 21

Tablo 1:.. Influenza RRT-PCR tespiti 29 ilçe fuarları (en domuz toplanan nazal sürüntü ve burun mendil A virüsü ve arkadaşları (burnu 2014) Utility sergi domuz popülasyonlarında influenza A virüs gözetim örnekleri silin Edwards Gribi ve gelen Diğer Solunum Virüsleri 8 (5), 574-579.

Tablo 2

Tablo 2:.. Influenza izolasyonu 29 ilçe fuarları (en domuz toplanan nazal sürüntü ve burun mendil A virüsü Edwards ve arkadaşları (burnu 2014) Yardımcı grip için sergi domuz toplumlarda A virüsü gözetim örnekleri silin Gribi ve Diğer Solunum Virüsler 8 (5), 574-579).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Polyester uçlu nasal swapları ile domuz örnekleri toplanması IAV gözetim yürütülmesi yararlı olduğu kanıtlanmıştır; Ancak, nazal sürüntü prosedürünün kullanılması kısıtlama için tuzak gerekli kullanımı nedeniyle gözetim çabalarını engellemektedir. Burun mendil numune toplama sırasında insanlar ve domuzlar üzerinde stresi en aza indirmek için mevcut domuz örnekleme teknikleri bir arıtma temsil etmektedir. Yöntem için geliştirilen ve sergi domuz ayarlarında valide edilmiş olsa da domuzlarda IAV ve ölüm öncesi algılama gerekli olduğu, kolayca diğer durumlara uygulanabilir (yani ticari domuz, canlı hayvan pazarları, biyomedikal araştırma, vs.)

Yukarıda belirtildiği gibi, bu numune alma tekniğinin ana sürücü fuar domuz popülasyonu olmuştur. Tarım fuarları sırasında, domuz sahipleri domuz genel bileşimine dayalı finansal ödül ve ün kazanmak için yarışacak. Resmi olmayan verilere göre o, bir domuz iyi görünmüyor, eğer olduğunu gösterirwners kısıtlama ve örnek toplama sırasında domuz stres seviyeye özellik olabilir. Burun mendil düşük hayvansal stresi gerektiren ortamlarda örnekleme bireysel hayvanları içeren gözetim çabalar için yararlıdır. Nazal yaparken snaring ve gözle görülür üzücü domuz önlemek yeteneği tekniği silin sergi domuzlarda IAV gözetim çalışmalarının halk tarafından kabul geliştirdi. Nazal 33 düşük stres doğa yöntemi de ticari domuz çiftlikleri için çok uygundur silin. Ayrıca, burun yöntemi daha az personel gerektirir ve özel eğitim zorunlu kılmaz, çünkü maliyetleri azaltmaya yardımcı olabilir silin.

Bezlerden burun ek olarak, ticari bir domuzlarda patojenin tespit edilmesi bir başka yaygın olarak kullanılan bir form, birlikte yerleştirilmiştir domuz kalemlerini yerleştirilmiş olan bir pamuk ip çiğnemek izin verilmesini içerir. Onlar ip alınabilir sözlü sıvıları mevduat. 27,34,35 Oral sıvı toplama süredenbir hayvan grubundan toplanan numuneler göre ve patojen sıklığı veya iletim çalışmaları için sınırlamalar vardır CES sonuçlanır. Ayrıca, ağız sıvılardan IAV izolasyonu zayıf olmuştur. Ipleri doyurmak için domuz personel kaynaklar için verimsiz olabilir 29 Oral sıvılar bireysel domuz süredir kullanılmaktadır ama zaman ipleri asmak için gerekli ve. Burun mendil kullanarak 36 sağlar Bireysel hayvanların hızlı değerlendirilmesi. Her iki burun mendil IAV algılamak ve izole etme yeteneği ağız sıvıları üzerinde ayrı bir avantaj sağlamaktadır. Diğer örnekleme yöntemleri gibi, burun mendil zirve viral dökülme esnasında en etkili olabilir.

Nazal ile ilgili bazı sınırlamalar prosedürü uygulamadan önce düşünülmelidir yöntemi yoktur mendil vardır. Domuzlar kendi snouts ile kök meraklı hayvanlardır. Genellikle karşılaştırıldığında burun bezlerden için, bir burun silme toplanan fazla enkaz nedeniyle nemli, kirli çevre, oradadomuz burnu dış kişileri silin. Nazal arasındaki temas yüzey silinmelidir ve pik nazal ilgili burun bezlerinde çok solunum yolu, çoğu zaman çevresel artıkları (örneğin, yatak, yem, gübre, vs) istenmeden birikimi ile sonuçlanan bir durum, bir daha fazla dış yüzeyi ile sınırlıdır siliyor. Bu çevresel kirleticiler PCR inhibe veya viral izolasyon girişimleri sırasında hücresel toksisiteye neden olabilir. Örnekleme yeri ve çevre enkaz seviyelerinin temizlik burun protokolleri silin devam etmeden önce değerlendirilmelidir gerekebilir. Burun mendil çevresel kirlilik oluşumu da IAV bu yöntemin test hayvan tarafından dökülen olmayabilir ile tespit değil, çevrede mevcut olduğunu gösterir. Bir IAV nitelik yeteneği gözetim faaliyetleri veya sürü tabanlı teşhis için bir endişe olmayabilir, belirli bir hayvana izole ederken, bu laboratuar bazlı tr için göz önünde bulundurulacak bir sınırlama olabiliransmission çalışmaları.

Bu yöntemi seçme nazal sayıda örnekleri gerektirir silin o artan depolama ve nakliye alanıdır önce ihtiyacı olan bir diğer konu da ele alınacak. Mendil kullanılan şişeler nazal sürüntü depolama için kullanılan standart 2 ml kriyojenik depolama şişeleri çok daha büyüktür ve uzun süreli depolama ve laboratuara geri taşınması için soğutucu alan için yaklaşık üç-dört kat daha fazla dondurucu yer alacak. Soğutma altında, oda sıcaklığında, uzun zaman süreleri için numune saklama ya da donma-çözülme örnekleri olacak virüsü canlılığının bir azalma tüm sonuç. Ekstra bakım Bu örnekleri çözülme sırasında alınması gerekir. Gazlı bez, viral taşıma ortamı çok emer çünkü, numuneler kuru boncuk banyosunda hızla ısınmasına olacaktır. Yanlışlıkla aynı zamanda virüs canlılığı bir azalmaya neden olabilir çözdürme işlemi sırasında numune aşırı ısınma. Ayrıca, bağlı mendil comp in vitro olarak IAV kurtarma azalmaçubuklar için ared, burun canlı virüs kurtarma için yüksek hassasiyet gerektiren durumlarda kullanılmaması mendil tavsiye edilir. 30

Nazal domuzlarda IAV gözetim başarılı kullanımı yöntemi hayvanlar üzerinde örnekleme daha kolay, gözetim çalışmalarının artan kabulü ve daha az stres neden olabilir silin. Gelecekte, adil bir ya da ticari domuz sürüleri bireysel domuz düşük stres testi için girişte domuz örnekleme için yararlı olabilir. Bu yöntem domuz diğer solunum patojenleri tespit kullanmak için soruşturma olabilir. Domuz roman IAV soylarının ortaya çıkmasında önemli bir rol oynadığı için, domuz IAV için aktif sürveyans önemlidir devam etti. Bu nedenle, bu yöntem yeni iAVS arasında ortaya çıkan suşlarının tespit ve epidemiyolojik araştırmanın yardımcı olabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BBL Brain Heart Infusion Becton, Dickinson and Company 211059
Penicillin G Sodium Salt MP Biomedicals, LLC 021194537 1500 u/mg
Streptomycin Sulfate AMRESCO LLC 0382
Gentamicin Solution Mediatech, Inc. 30-005-CR 50 mg/ml
Amphotericin B Solution Fisher S 24 25 250 ug/ml
Kanamycin Sulfate Teknova K2105 5000 ug/ml
TPP Rapid Filtermax System TPP Techno Plastic Products AG  99150
Nalgen Diagnostic Bottles Thermo Scientific 342002-9025 HDPE with white PP closure
Dermacea Gauze Sponge, 8 ply Covidien 441211 5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in) 
Nitrile Exam Gloves Saftey Choice 19-170-010 (A-D)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications. J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).
  2. Nelson, M. I., Vincent, A. L. Reverse zoonosis of influenza to swine: new perspectives on the human-animal interface. Trends Microbiol. 23, (2015).
  3. Zhou, N. N., et al. Genetic reassortment of avian, swine, and human influenza A viruses in American pigs. J. Virol. 73 (10), 8851-8856 (1999).
  4. Webby, R. J., et al. Evolution of swine H3N2 influenza viruses in the United States. J. Virol. 74 (18), 8243-8251 (2000).
  5. Vincent, A., et al. Review of influenza A virus in swine worldwide: a call for increased surveillance and research. Zoonoses Public Health. 61 (1), 4-17 (2014).
  6. Karasin, A. I., Olsen, C. W., Anderson, G. A. Genetic characterization of an H1N2 influenza virus isolated from a pig in Indiana. J. Clin. Microbiol. 38 (6), 2453-2456 (2000).
  7. Zhou, N. N., et al. Emergence of H3N2 reassortant influenza A viruses in North American pigs. Vet. Microbiol. 74 (1-2), 47-58 (2000).
  8. Corzo, C. A., et al. Active Surveillance for Influenza A Virus among Swine, Midwestern United States, 2009-2011. Emerg. Infect. Dis. 19 (6), 954-960 (2013).
  9. Lorusso, A., et al. Genetic and antigenic characterization of H1 influenza viruses from United States swine from 2008. J. Gen. Virol. 92 (Pt 4), 919-930 (2011).
  10. Loving, C. L., et al. Efficacy in pigs of inactivated and live attenuated influenza virus vaccines against infection and transmission of an emerging H3N2 similar to the 2011-2012 H3N2v. J. Virol. 87 (17), 9895-9903 (2013).
  11. Vincent, A. L., et al. Efficacy of inactivated swine influenza virus vaccines against the 2009 A/H1N1 influenza virus in pigs. Vaccine. 28 (15), 2782-2787 (2010).
  12. Smith, G. J., et al. Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic. Nature. 459 (7250), 1122-1125 (2009).
  13. Vijaykrishna, D., et al. Reassortment of Pandemic H1N1/2009 Influenza A Virus in Swine. Science. 328 (5985), 1529 (2010).
  14. Ducatez, M. F., et al. Multiple Reassortment between Pandemic (H1N1) 2009 and Endemic Influenza Viruses in Pigs, United States. Emerg. Infect. Dis. 17 (9), 1624-1629 (2011).
  15. Jhung, M. A., et al. Outbreak of variant influenza A(H3N2) virus in the United States. Clin. Infect. Dis. 57 (12), 1703-1712 (2013).
  16. Vincent, A. L., et al. Characterization of an influenza A virus isolated from pigs during an outbreak of respiratory disease in swine and people during a county fair in the United States. Vet. Microbiol. 137 (1-2), 51-59 (2009).
  17. Killian, M. L., et al. Simultaneous Infection of Pigs and People with Triple-Reassortant Swine Influenza Virus H1N1 at a U.S. County Fair. Zoonoses Public Health. 60 (3), 196-201 (2013).
  18. Wong, K. K., et al. Outbreak of influenza A (H3N2) variant virus infection among attendees of an agricultural fair, Pennsylvania, USA, 2011. Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1937-1944 (2011).
  19. Bowman, A. S., et al. Molecular evidence for interspecies transmission of H3N2pM/H3N2v influenza A viruses at an Ohio agricultural fair, July 2012. Emerg. Microbes. Infect. 1 (10), e33 (2012).
  20. Wells, D. L., et al. Swine influenza virus infections. Transmission from ill pigs to humans at a Wisconsin agricultural fair and subsequent probable person-to-person transmission. JAMA. 265 (4), 478-481 (1991).
  21. Bowman, A. S., et al. Swine-to-human transmission of influenza A(H3N2) virus at agricultural fairs, Ohio, USA, 2012. Emerg. Infect. Dis. 20 (9), 1472-1480 (2012).
  22. Bowman, A. S., Nolting, J. M., Nelson, S. W., Slemons, R. D. Subclinical influenza virus A infections in pigs exhibited at agricultural fairs, Ohio, USA, 2009-2011. Emerg. Infect. Dis. 18 (12), 1945-1950 (2012).
  23. Gray, G. C., et al. Influenza A(H1N1)pdm09 Virus among Healthy Show Pigs, United States. Emerg. Infect. Dis. 18 (9), 1519-1521 (2012).
  24. Van Reeth, K., Brown, I. H., Olsen, C. W. Ch. 40, Influenza virus. Diseases of Swine. Zimmerman, J. J. , Wiley-Blackwell. 557-571 (2012).
  25. Culhane, M. R., Detmer, S. E. Ch. 21, Sample types, collection, and transport for influenza A viruses of swine. Methods in Molecular Biology. Spackman, E. Animal Influenza Virus, Methods in Molecular Biology; 1161. 259-263 (2014).
  26. Sheldon, C. C., Sonsthagen, T., Topel, J. A. Animal Restraint for Veterinary Professionals. , Mosby. (2006).
  27. Detmer, S. E., Patnayak, D. P., Jiang, Y., Gramer, M. R., Goyal, S. M. Detection of Influenza A virus in porcine oral fluid samples. J. Vet. Diagn. Invest. 23 (2), 241-247 (2011).
  28. Goodell, C. K., et al. Probability of detecting influenza A virus subtypes H1N1 and H3N2 in individual pig nasal swabs and pen-based oral fluid specimens over time. Vet. Microbiol. 166 (3-4), 3-4 (2013).
  29. Romagosa, A., Gramer, M., Joo, H. S., Torremorell, M. Sensitivity of oral fluids for detecting influenza A virus in populations of vaccinated and non-vaccinated pigs. Influenza Other Respir. Viruses. 6 (2), 110-118 (2012).
  30. Edwards, J. L., et al. Utility of snout wipe samples for influenza A virus surveillance in exhibition swine populations. Influenza Other Respir. Viruses. 8 (5), 574-579 (2014).
  31. Zhang, J., Harmon, K. M. Ch. 23, RNA extraction from swine samples and detection of influenza A virus in swine by real-time RT-PCR. Animal Influenza Virus. Spackman, E. , Methods in Molecular Biology; 1161. 277-293 (2014).
  32. Zhang, J., Gauger, P. C. Ch. 22, Isolation of swine influenza virus in cell cultures and embryonated chicken eggs. Animal Influenza Virus. Spackman, E. , Methods in Molecular Biology; 1161. 265-276 (2014).
  33. Bowman, A. S., et al. The Inability to Screen Exhibition Swine for Influenza A Virus Using Body Temperature. Zoonoses Public Health. , (2015).
  34. Prickett, J. R., Kim, W., Simer, R., Yoon, K. J., Zimmerman, J. Oral-fluid samples for surveillance of commercial growing pigs for porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine circovirus type 2 infections. J. Swine Health Prod. 16 (2), 86-91 (2008).
  35. Prickett, J., et al. Detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in porcine oral fluid samples: a longitudinal study under experimental conditions. J. Vet. Diagn. Invest. 20 (2), 156-163 (2008).
  36. Pepin, B., Liu, F. F., Main, R., Ramirez, A., Zimmerman, J. Collection of oral fluid from individually housed sows. J. Swine Health Prod. 23 (1), 35-37 (2015).

Tags

İmmünoloji Sayı 106 Teşhis teknikler ve işlemler influenza A virüsü domuz domuz gözetim burun patojen tespiti
Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Nolting, J. M., Szablewski, C. M.,… More

Nolting, J. M., Szablewski, C. M., Edwards, J. L., Nelson, S. W., Bowman, A. S. Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine. J. Vis. Exp. (106), e53313, doi:10.3791/53313 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter