Protocol
هذا البروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات البحوث البشرية المحلية.
1. إعداد
- جدولة قياس الأوعية الدقيقة بحيث لا تتزامن مع إجراءات أخرى مثل أخذ عينات الدم. في حديثي الولادة المصطلح الأفضل تنفيذ ذلك بعد الرضاعة. هذا يمنع التحريض وسيخفف من القياس.
- ضمان ممرضة أو أحد الوالدين يحضر لدعم ومواساة الوليد أثناء الفحص، وذلك باستخدام مبادئ الوليد الفردي العناية التنموي وبرنامج تقييم 12.
ملاحظة: على الرغم من القياسات يمكن أن يقوم بها شخص واحد، فمن المستحسن جدا أن يكون لديك شخص ثان مساعدة. احد يحمل الكاميرا وتركز على حديثي الولادة في حين أن البعض يعمل الكمبيوتر والبرمجيات. في تجربتنا، فإن هذه النتائج في صور ذات جودة أعلى وأقصر مدة الإجراء. - إذا كانت الحالة السريرية للتصاريح الوليد، ضعالوليد في موقف ضعيف. تصوير الأوعية الدقيقة لا يمكن أن يؤديها في موقف المعرضة، ولكن هذا يتطلب المزيد من المهارة والصبر.
- تأكد من أن درجة حرارة الجسم للخديج تقع ضمن النطاق المناسب (36،5-37،5 درجة مئوية).
2. إجراء
- تثبيت الجهاز على طول الحاضنة. تأكد من الحاضنة هي في ذروة الصحيح.
- وضع الغطاء القابل للتصرف على الكاميرا.
- تطبيق هلام أو النفط أو المياه المالحة على غيض من التحقيق. هذا سيساعد على تنعيم الاتصال بين التحقيق والجلد.
- ضع الكاميرا على الجانب بطني إنسي الرضع العضد. لمنع التركيز المصنوعات اليدوية، تأكد من أن التحقيق هو عمودي على الجلد. وهذا قد يتطلب اعادة تموضع الذراع الرضع.
ملاحظة: الجانب بطني إنسي من الجزء العلوي من الذراع هو الموقع الأساسي لقياس دوران الأوعية الدقيقة الجلدي. هذا الموقع لديه شعر الوبري قليلا، وبالتالي فهو أقل عرضة للالتحف. يتم التوصل الأكثر بسهولةإذا تم وضع المريض في موقف ضعيف. - للحد من الطول الكلي الداخلي، كسب الوقت من خلال إيجاد عمق الأمثل للتركيز (الشكل 3)، في حين البحث في الموقع مع أقل عدد من القطع الأثرية.
ملاحظة: عمق التركيز يعتمد بالدرجة الأولى على العمر بعد الولادة بدلا من عمر الحمل. متوسط عمق التركيز في الأسبوع الأول من الحياة هو 0-80 ميكرون. الآخرة، بسبب نضج الجلد، وعمق التركيز يزيد بسرعة مع متوسط قيم 80-200 ميكرون بين 1-4 أسابيع من العمر بعد الولادة (الشكل 2). في حديثي الولادة المدى لدت متوسط عمق التركيز 80-160 ميكرون عند الولادة. - استقرار التحقيق لتجنب القطع الأثرية الحركة. للقيام بذلك، ضع الكوع على النافذة الحاضنة والرسغ بجانب الوليد. بدلا من ذلك، ضع التحقيق جنبا إلى جنب مع الوليد على وسادة.
- تجنب القطع الأثرية الضغط عن طريق السماح للكاميرا لا تملك إلا أدنى تماس مع الجلد. يمكن القطع الأثرية الضغط سيكون صecognized أثناء التقاط الصور إذا كان هناك تدفق ذهابا وإيابا في السفن أو في حالة السفن الكبيرة هي غير perfused بينما هناك تدفق جيد في الأوعية الصغيرة. أيضا إذا كان نمط تدفق غير متطابقة في جميع أنحاء الشاشة بأكملها، حذار من القطع الأثرية الضغط.
- تسجيل الفيديو لمدة لا تقل عن 5 ثانية.
- بعد القبض على النجاح، تحريك الكاميرا إلى مكان آخر على الجزء العلوي من الذراع.
ملاحظة: من المستحسن لالتقاط في مجموع 5-10 أشرطة الفيديو في 3-5 مواقع مختلفة، كما هي متعارف بعض القطع الأثرية فقط في تحليل غير متصل، وهو ما يعني أن الفيديو في المسألة ليست صالحة للاستعمال لتحليلها. - إزالة بلطف جل والنفط أو المياه المالحة من الجلد مع الشاش صغير.
3. تحليل غير متصل
- اقتصاص الفيديو إذا كان هناك حركة كبيرة أن يعوق تحليل. انتقل إلى القسم "أدوات" واستخدم زر 'محرر'. حدد الإطار الزمني مؤهلة للحصول على تحليل وانقر على 'المحاصيل فيديو' بutton. ملاحظة: الفيديو مقبولة إذا الحركة داخل ½ لعرض حقل 13.
- حدد الفيديو اقتصاص والاستقرار فيه. انتقل إلى القسم "أدوات" واستخدم زر "تحليل". انقر على زر 'استقرار'.
ملاحظة: يجب أن يستقر جميع الأفلام قبل أن تتمكن من إجراء تحليل التلقائي. - حدد الفيديو استقرت. انتقل إلى القسم "تحليل" وانقر على 'كشف' زر. تأكد من أبرز الخيارات "الشعرية" و "سفن".
- بعد الكشف عن (الشكل 4)، انقر فوق الزر "دو باكر '' CNA" أو للحصول على تقرير الأوعية الدقيقة الكامل. ويشمل هذا التقرير المعلمات الأكثر استخداما نتائج مثل مجموع كثافة الأوعية الدموية (TVD)، كثافة السفينة perfused (PVD) ونسبة السفن perfused (PPV).
ملاحظة: كبديل، وأشرطة الفيديو يمكن تصديرها حاليا ليتم تحليلها يدويا. هذا الخيار يمكن العثور عليها في قسم 'أدوات'. SElect خيار "تصدير"، ثم انقر على زر "AVA التصدير.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
أرقام 1 و 2 عرض ممثل الصور الثابتة عالية الجودة الفيديو MI. هذه الأمثلة تبين الفرق في سماكة الجلد في نفس الرضع بين يوم 1 (الشكل 1)، ويوم 28 (الشكل 2) من العمر بعد الولادة. في يوم 1، هناك إضاءة ساطعة، والتركيز الكافي على السفن الصغيرة وجود الحد الأدنى من القطع الأثرية. يوم 28 هو أكثر صعوبة لإيجاد التوازن الصحيح بين التركيز على السفن الصغيرة والقطع الأثرية بسبب الجلد أكثر سمكا. لاحظ أن الاستقرار ومدته ولا يمكن الحكم على القطع الأثرية الضغط على هذه الصور الثابتة. وينبغي أن يكون لاحظت خلال الحصول على الصور أو قبل تحليل غير متصل.
الشكل 1. MI من الخدج الرضع 24 أسابيع الحمل العمر، يوم 1. عبر الجلد Mأنا رضيع ولدوا في سن الحمل 24 أسبوعا. عصر ما بعد الولادة للطفل هو 1 يوم. عمق المستخدمة من التركيز هو 40 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 2. MI من الخدج الرضع 24 أسابيع الحمل العمر، يوم 28. عبر الجلد MI لرضيع ولدوا في سن الحمل 24 أسبوعا. عصر ما بعد الولادة للطفل هو 28 يوما. عمق المستخدمة من التركيز 160 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. الاختلافات هو التركيز Depth. هذه الصورتين من نفس المنطقة بالضبط تبرز أهمية عمق التركيز الكافي. عدم كفاية التركيز (يسار) النتائج في فقدان الرؤية سفينة مقارنة مع التركيز الكافي (يمين). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4. نتائج التحليل الآلي دون اتصال. ويبين هذا الرقم نتائج تحليل غير متصل التلقائي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذه المخطوطة وصفنا وإظهار النهج لتصوير الأوعية الدقيقة عبر الجلد عند الخدج. وتصور هذه الطريقة تساعد الباحثين على التغلب على اثنين من أكبر التحديات في مجال البحوث: استنساخ والوقت والعمل الطبيعة المكثفة لتعلم تقنيات جديدة. يمكن هذه التقنية توفر معلومات مفيدة من دوران الأوعية الدقيقة الطرفية عند الخدج بطريقة غير الغازية. قياسات التسلسلية يمكن أن تساعد الأطباء على تقييم آثار التدخلات العلاجية. دوران الأوعية الدقيقة هو المجال الذي يحدث في الخطوة الأخيرة من سلسلة نقل الأكسجين. وقد أثبتت الدراسات الرصدية علاقة بين الأوعية الدقيقة تدهور مع مرور الوقت وجود التهابات بكتيرية 14. كما تدهور دوران الأوعية الدقيقة الطرفية هي واحدة من العلامات الأولى للإنتان عند الخدج، وافترض عموما أن دوران الأوعية الدقيقة الطرفية يمكن أن تساعد في التنبؤ تطويرالإنتان.
جودة الصور يعتمد أساسا على مهارات المشغل. على الرغم من أن أحدث الأجهزة الكاميرا توفر أفضل المواصفات الفنية والأجهزة، وهذا لا يزال ذا أهمية ثانوية. المشغلين يجب أن يكونوا مدربين في مجال التصوير الأوعية الدقيقة. يجب أن تكون على دراية توصيات مؤتمر المائدة المستديرة الذي عقد في أمستردام في عام 2006 15 ومع معايير الجودة التي وضعتها ماسي وآخرون 13. هذه المعايير الستة (الإضاءة، والمدة، والتركيز، والمحتوى، والاستقرار، والضغط) هي أساس بيانات عالية الجودة وجديرة بالثقة. ومن المرجح أن تفشل في التعرف كثيرا ما تحدث الضغط التحف 16 شركات الخبرة. ومع ذلك نلاحظ أن هذه معايير الجودة والتوصيات قد صيغت لقياس MI تحت اللسان عند البالغين ولا يمكن استقراء مباشرة لقياسات MI الجلدية عند الخدج. معايير الجودة لمدة ومضمونولذلك من الصعب تحقيقه.
أيضا، فإنه ينصح بشدة لتنفيذ القياسات مع اثنين من المشغلين ونسأل ممرضة أو الأم للحضور. يجب أن تعقد الكاميرا ثابتة، ويجب تجنب القطع الأثرية الضغط، يجب أن تعمل البرمجيات ويجب النظر الرضيع الرفاه. خاصة إذا كان الطفل يتحرك كثيرا، وهذا كثير جدا بالنسبة لمشغل واحد. ولذلك فمن الأفضل أن يكون شخص واحد التعامل مع الكاميرا والتركيز على مجال القياس وشخص آخر يعمل البرنامج والتحقق من العلامات الحيوية للرضيع. وبطبيعة الحال، بالإضافة إلى الجوانب التقنية لMI، خبرة في التعامل مع (المريض مرضا خطيرا) خدج أمر ضروري للمشغلين.
وبالرغم من الطابع غير الغازية، MI لا يزال يحمل الأعباء والمخاطر المحتملة. تحديد مدة القياسات إلى أدنى حد ممكن لمنع ذلك الحاضنة وبالتالي تنخفض درجة حرارة الجسم أكثر من اللازم. تطبيق دائما غطاء حماية للتصرف على الكاميراقبل القياسات. وظيفة هذا الغطاء ذو شقين: لأنه يحمي الجلد من ظاهرة الاحتباس المحتمل للتلميح التحقيق وأنها بمثابة حاجز اصطناعي لمنع انتقال البكتيريا. وبالإضافة إلى ذلك، ويجب تطهيرها بانتظام المعدات MI.
أيضا، مجرد تطبيق كمية قليلة من الجل أو الزيت على الجلد وإزالته بلطف بعد القياس. إذا ما أسيء استخدامها، ومزيج من الزيت والعلاج بالضوء العلاجي يمكن أن يكون لها آثار مدمرة على الجلد. على الرغم من أن معظمهم من الأطفال لا يكاد الرد على القياسات، لا يمكن استبعاد عدم الاستقرار القلب والجهاز التنفسي. هذا هو السبب في أننا نوصي وجود الرضيع بدعم من أحد الوالدين أو ممرضة.
بعد الحصول على البيانات، ينبغي إجراء تحليل حاليا من أشرطة الفيديو بطريقة موحدة. البرنامج متوفر تجاريا لتحليل أشرطة الفيديو تلقائيا MI فقا للمبادئ التوجيهية 15. ويضم التحليل اليدوي ثلاث خطوات. أولا، يمكن تعزيز النقيض يكون ا ف ب إجتهد من أجل تحقيق النقيض الأمثل. ثانيا، ينبغي أن يستقر أشرطة الفيديو. وهذه الخطوة تبرز أهمية الاستقرار خلال القياسات. لأدنى انحراف يمكن أن تجعل شريط فيديو غير صالحة للاستعمال لتحليلها. ثالثا، يجب الانتباه السفن ويجب تصنيفها التدفق. لاحظ أن هذه الخطوة الأخيرة تحمل مخاطر عالية من الفقراء مراقب أمور تقلب 17. ولذلك ينبغي إجراء تحليل متواجد حاليا اليدوي من قبل الباحثين المدربين فقط. هناك طريقتان للإبلاغ عن مقاييس النتائج. الطريقة التقليدية لتحليل الشبكة الشعرية (CNA) يعكس طول إجمالي عدد السفن مقسوما على مساحة قياس (مم / مم 2). بدلا من ذلك، أقل استهلاكا للوقت دو باكر نتيجة (DBS) يمكن استخدامها. في هذا الشأن، يتم رسمها ثلاثة الأفقي على مسافة واحدة وثلاثة خطوط عمودية على مسافة واحدة على الشاشة. ويمكن حساب كثافة سفينة حيث بلغ عدد السفن المارة خطوط مقسوما على إجمالي طول خطوط (ن / مم).
_content "> هناك عيوب في مجال البحوث من دوران الأوعية الدقيقة. التجانس من دوران الأوعية الدقيقة يجعل معقدة لتحديد القيم المرجعية. ولذلك، فإن معظم البحوث والدراسات الرصدية أو مقارنات بين المجموعات. التقييم تعقيدا بدلا من أشرطة الفيديو الدقيق microcirculatory والتدخل البشري شخصي يزيد من إمكانية سوء استنساخ (فان دن بيرغ، 2015 17). ولذا فمن المهم أن طريقة الحصول على أشرطة الفيديو وموحدة.وبالنسبة للمستقبل القريب، فإن التقدم التقني تحسين البحوث في الجلدي MI. آليا مثال تحليل الكمبيوتر من صور الفيديو، والتي سوف تحل محل تقدير البشري شخصي نسبيا من microvessels وبالتالي يستبعد تقلب مراقب أمور. وخير مثال لتوحيد هذا المجال من البحث هو استخدام أجهزة الاستشعار التصوير اللاسلكية، التي تقيس بشكل متسلسل دوران الأوعية الدقيقة في نفس المكان المحدد. وهذا سيجعل الجلدي MIأقل المشغل تعتمد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cytocam | Braedius | http://www.braedius.com/magnoliaPublic/braedius/products.html | Other well known handheld microscopes to visualize the microcirculation are MicroScan (Microvision Medical) using SDF technique or the CytoScan (CytoMetrics) using OPS technique |
| Disposable Lens Cover | Glycocheck | http://www.glycocheck.com/lenscovers.php | |
| CCTools | Braedius | http://www.braedius.com/magnoliaPublic/braedius/products.html | Another well known offline analysis programme is AVA (Microvision medical). |
References
- Groner, W., et al. Orthogonal polarization spectral imaging: a new method for study of the microcirculation. Nat Med. 5 (10), 1209-1212 (1999).
- Goedhart, P. T., Khalilzada, M., Bezemer, R., Merza, J., Ince, C. Sidestream Dark Field (SDF) imaging: a novel stroboscopic LED ring-based imaging modality for clinical assessment of the microcirculation. Opt Express. 15 (23), 15101-15114 (2007).
- Sherman, H., Klausner, S., Cook, W. A. Incident dark-field illumination: a new method for microcirculatory study. Angiology. 22 (5), 295-303 (1971).
- Trzeciak, S., et al. Early microcirculatory perfusion derangements in patients with severe sepsis and septic shock: relationship to hemodynamics, oxygen transport, and survival. Ann Emerg Med. 49 (1), 88-98 (2007).
- Sakr, Y., Dubois, M. J., De Backer, D., Creteur, J., Vincent, J. L. Persistent microcirculatory alterations are associated with organ failure and death in patients with septic shock. Crit Care Med. 32 (9), 1825-1831 (2004).
- De Backer, D., et al. Microcirculatory alterations in patients with severe sepsis: impact of time of assessment and relationship with outcome. Crit Care Med. 41 (3), 791-799 (2013).
- Buijs, E. A., et al. Early microcirculatory impairment during therapeutic hypothermia is associated with poor outcome in post-cardiac arrest children: A prospective observational cohort study. Resuscitation. , (2013).
- Genzel-Boroviczeny, O., Christ, F., Glas, V. Blood transfusion increases functional capillary density in the skin of anemic preterm infants. Pediatr Res. 56 (5), 751-755 (2004).
- Ergenekon, E., et al. Peripheral microcirculation is affected during therapeutic hypothermia in newborns. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 98 (2), F155-F157 (2013).
- Schwepcke, A., Weber, F. D., Mormanova, Z., Cepissak, B., Genzel-Boroviczeny, O. Microcirculatory mechanisms in postnatal hypotension affecting premature infants. Pediatr Res. , (2013).
- van Elteren, H. A., Ince, C., Tibboel, D., Reiss, I. K., de Jonge, R. C. Cutaneous microcirculation in preterm neonates: comparison between sidestream dark field (SDF) and incident dark field (IDF) imaging. J Clin Monit Comput. , (2015).
- Als, H., et al. Individualized Behavioral and Environmental Care for the Very-Low-Birth-Weight Preterm Infant at High-Risk for Bronchopulmonary Dysplasia - Neonatal Intensive-Care Unit and Developmental Outcome. Pediatrics. 78 (6), 1123-1132 (1986).
- Massey, M. J., et al. The microcirculation image quality score: development and preliminary evaluation of a proposed approach to grading quality of image acquisition for bedside videomicroscopy. J Crit Care. 28 (6), 913-917 (2013).
- Weidlich, K., et al. Changes in microcirculation as early markers for infection in preterm infants--an observational prospective study. Pediatr Res. 66 (4), 461-465 (2009).
- De Backer, D., et al. How to evaluate the microcirculation: report of a round table conference. Crit Care. 11 (5), R101 (2007).
- Sallisalmi, M., Oksala, N., Pettila, V., Tenhunen, J. Evaluation of sublingual microcirculatory blood flow in the critically ill. Acta Anaesthesiol Scand. 56 (3), 298-306 (2012).
- van den Berg, V. J., et al. Reproducibility of microvascular vessel density analysis in Sidestream dark-field-derived images of healthy term newborns. Microcirculation. 22 (1), 37-43 (2015).
