Summary
우리 어디 보조 세포 유형 수 더 시드할 수이 microfibrous 구조 vascularized 조직 및 organoids를 생성 하는 틈새 공간으로 microfibrous 혈관 침대 엔지니어링에 대 한 미세 bioprinting 전략에 따라 일반화 된 프로토콜을 제공 합니다.
Abstract
엔지니어링 vascularized 조직을 생성 하 고 organoids 역사적으로 도전 하고있다. 여기는 다층 히드로 microfiber 인터레이스는 비 계 생성을 미세 bioprinting에 따라 새로운 방법에 설명 합니다. 부드러운 달성 bioprinting, 복합 bioink 배합 코어 흐름과 칼 흐름에 의해 운반 가교 솔루션에서 돌출을 포함 하는 핵-칼 미세 프린트 헤드 설계 하 고는 bioprinter에 장착. Alginate와 젤라틴 methacryloyl (GelMA)를 혼합 하 여 즉석 이온 가교의 존재를 겪 습 다 당 류 영구 안정화를 달성 하기 위해 GelMA 구성 요소의 보조 photocrosslinking 뒤 divalent 이온을 선택,이 bioprinting 전략을 사용 하 여 microfibrous 비 계를 얻을 수 있었습니다. 중요 한 것은, bioprinted microfiber 안에 캡슐화 된 내 피 세포는 16 일 문화에 걸쳐 있는 맥 관 구조를 닮은 루멘-같은 구조를 형성할 수 있습니다. Endothelialized microfibrous 비 계는 microfiber의 틈새 공간으로 보조 셀 형식의 후속 시드 통해 vascularized 조직을 구성 하 혈관 침대 추가 사용할 수 있습니다. 미세 bioprinting vascularized 조직에 높은 충실도의 편리한 공학 일반화 된 전략을 제공합니다.
Introduction
조직 공학 목표 생성 기능 조직 대체 대체, 복원, 또는 그 부상 또는 질병 인체1,2,3,4, 종종 원하는 세포 유형, 생리 활성 분자5,6및 생체 재료7,8,,910의 결합을 통해 증대 하는 데 사용할 수 있습니다. 더 최근에, 조직 공학 기술은도 점점 채택 되었습니다 모델을 생성 하 체 외에 조직과 기관 그들의 비보에 대응, 기존의 지나치게 간소화 평면 셀 문화11,12,13,14,15,,1617,18,19의 대체 약물 개발 등 응용 프로그램의 중요 한 기능을 모방 하는. 두 경우에는 복잡 한 마이크로 아키텍처와 인간의 조직의 계층 구조를 정리 하는 능력은 설계 조직10의 기능 활성화에 중요 한 되며 특히, 설계 조직으로 혈관 네트워크를 통합 하는 방법을 수요의 vascularization 필드20,21,,2223가장 큰 과제 중 하나 선물 때문.
날짜 하려면, 다양 한 접근법이 점에서 성공8의 다양 한 학위와 설계 조직 구조에 혈관 구조를 구축 하기 위해에서 개발 되었습니다. 예를 들어 자기 집합 내 피 세포의 수 microvascular 네트워크24;의 세대에 대 한 신생 성장 인자 전달 유도 지속적인된 neovascularization25,26; 혈관 조상 세포의 사용 및 pericytes 용이 내 피 세포 성장 및 어셈블리24,27; vascularization28,29;의 정확한 조음을 가능 하 게 설계 비 계 속성 그리고 셀 시트 기술은 혈관 레이어 링30의 편리한 조작을 위해. 그럼에도 불구 하 고, 이러한 전략의 맥 관 구조, 자주는 설계 조직 구조 및 따라서 제한 된 재현성 내 혈관의 무작위 배포로 이어지는 공간 패턴을 제어 하는 능력을 부여 하지 않습니다. 지난 몇 년 동안 bioprinting는 이러한 도전, 높은 충실도 및 재현성에 복잡 한 조직 패턴 자동 또는 반자동 방식으로31,,3233입금의 그들의 비교할 수 없는 다양성으로 인해 솔루션으로 기술 사용의 클래스로 떠오르고 있다. 희생 bioprinting34,35,36,,3738, 포함된 bioprinting39,,4041, 그리고 속이 빈 구조 bioprinting/biofabrication42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,,5253 는 모든 혈관 또는 vascularized 조직 생성의 가능성을 보여주었다.
또는, microfibrous 건설 기계를 조작 하는 미세 bioprinting 전략 최근 개발 되었습니다, 그리고 alginate 하이브리드 bioink 구성 및 젤라틴 methacryloyl (GelMA) 동심 프린트 헤드 및 염화 칼슘 (CaCl2) 솔루션의 코어를 통해 전달 된 프린트 헤드54,55의 외부 칼 집 흐름을 통해 실시 됐다. 후속 photocrosslinking 멀티 레이어 microfibrous 비 계의 영구 안정화를 보장 하는 동안 마이크로 화이버 형성 있도록 alginate 구성 요소의 즉각적인 물리적 가교에 대 한 허용 하는 두 흐름의 공동 압출. 노트, bioprinted microfiber를 캡슐화 하는 내 피 세포 증식 및 유사 관 침대54,55루멘-같은 구조를 가정 하는 microfiber의 peripheries 향해 마이그레이션을 발견 했다. 이러한 bioprinted endothelialized 혈관 침대 수 이후에 채울 수 원하는 추가 구성 vascularized 조직55보조 세포 유형. 이 프로토콜은 따라서 같은 미세 bioprinting 전략 vascularized 조직의 조직 공학 및 organoid 모델링에 잠재적인 응용 프로그램에 대 한 편리한 제조 보장 동심 노즐 설계로 사용의 상세한 절차를 제공 합니다.
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Protocol
이 프로토콜에 사용 되는 신생아 쥐 cardiomyocytes 잘 설립 절차56 기관 동물 관리 및 사용 위원회 Brigham와 여자의 병원에 의해 승인에 따라 2 일 된 Sprague-Dawley 쥐에서 분리 했다.
1입니다.는 Bioprinter의 계측
- 듀얼-레이어, 동심 미세 프린트 헤드; 생성 하 칼 집으로 큰 무딘 바늘 (예를 들어, 18 G, ½ 인치)의 중심으로 핵심으로 (예를 들어, 27 G, 1 인치)의 작은 무뚝뚝한 바늘 삽입 코어 바늘 약간 튀어나온 다는 것을 확인 (~ 1 m m) 외피 (그림 1A) 이상. 맞춤 팁와 동심 맞춤 지원 하기 위해 총 신 옆에 내부/외부 바늘 사이 적절 한 크기의 필요한 스페이서 일시적으로 끼여 경우 될 수 있습니다 하지만 일반적으로 수동으로 조정 됩니다. 에폭시 접착제로 배럴의 봉인 고 때 적용 가능한 팁 사이드에서 맞춤 스페이서를 제거 합니다.
- 반대 방향에서 중앙 바늘의 배럴에서 다른 바늘 (23 G)를 삽입 합니다. 다음 외부 바늘의 배럴의 측면에 구멍을 생성 하 고 에폭시 접착제 씰링 뒤 구멍에 일치 하는 크기의 금속 커넥터를 삽입.
- 2 PVC 튜브를 통해 개별적으로, 듀얼-채널 주사기 펌프는 bioink와 가교 솔루션의 주입을 위해 프린트 헤드의 후미를 연결 합니다. Poly(methyl methacrylate) (PMMA)로 만든 플라스틱 홀더를 사용 하 여 bioprinter의 머리에 압출 기를 탑재 합니다.
참고: Bioprinter 선택 여부에 따라 달라 집니다. 우리의 경우, 여러 상용 bioprinters에이 설치 성공적으로 테스트 했습니다. 그러나, x-y-z 전동된 스테이지는 어떤 bioprinter, 원칙적으로, 설정 해야이 미세 프린트 헤드의 통합 합니다.
2입니다. Bioprinting Microfibrous 혈관 침대
- Alginate (4 w/v%, 낮은 점도),58, 젤라틴의 methacryloyl (GelMA, 1-2 w/v%)57,및 photoinitiator Irgacure 2959의 혼합물을 사용 하 여 bioink를 확인 (0.2-0.5 wt.%) 25 m m 2-[4-(2-hydroxyethyl) piperazin-1-yl에 녹아] 탄 술 폰 산 (HEPES 버퍼, pH 7.4) 포함 10 vol.% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS).
- 10 vol.% 가교 캐리어 액체로 FBS를 들어 HEPES 버퍼에 0.3 M CaCl2 의 솔루션을 확인 합니다.
- Bioprinting, 직전 5-10 분, 0.05 w/v% 트립 신에 의해 치료를 사용 하 여 플라스 크에서 인간의 탯 줄 정 맥 내 피 세포 (HUVECs) 해리 그리고 셀 5-10 × 106 셀/mL의 농도에서 bioink에 resuspend. 플라스틱 정지 균일 분포 되도록 천천히 5 ~ 10 배.
- 5 µ L/mL의 동일한 흐름 속도에서 듀얼 채널 주사기 펌프를 사용 하 여 bioink/가교 액체의 주입을 시작 합니다. 흐름 그들이 안정 될 때까지 최대 1 분 동안 지속적으로 실행 수 수 있습니다. 그 후, bioprinter 약 4 m m/s (그림 1B)의 증 착 속도 제어 하 여 프린트 헤드의 움직임을 시작 합니다. 이러한 속도 잘 할 수 있습니다 최적의 bioprinting를 보장 하기 위해 각각의 새로운 설치와 튜닝. Bioprinting 프로세스는 일반적으로 실내 온도 (21-25 ° C)에서 실시 하지만이 온도 변경 될 수 있습니다. Bioprinting 프로세스 alginate 구성의 빠른 이온 겔 화 및 microfibrous 비 계 (그림 1B)의 증 착에 대 한 허용 해야 합니다.
- 발판 bioprinted 후에, 20-30 s (그림 1C)에 대 한 추가 photocrosslinking GelMA 구성 요소, 약 5-10 mW/cm2 UV 빛 (360-480 nm)에 의해 화학 겔 화를 달성.
- Bioprinting 고 가교, 인산 염 버퍼 염 분 제거 초과 CaCl2(PBS)와 비 계를 씻어 부드럽게. 문화 매체와 최대 16 일 동안 37 ° C와 5 vol.% CO2 인큐베이터에서 내 피 세포 성장 매체 (EGM) HUVECs-라덴 microfibrous 비 계 매 2 일 변경. 문화 기간 동안 현미경 HUVECs의 형태학을 모니터링 합니다.
3. 건설 Vascularized 조직
- 일단은 HUVECs 루멘-같은 구조 (그림 1의D)를 비 계에 microfiber의 peripheries 마이그레이션한, 발판을 검색 하 고 부드럽게 소수 성 표면 (예를 들면, polymethylsiloxane [PDMS]의 슬 래 브)의 표면에 놓습니다. 살 균 필터 종이 사용 하 여 조심 스럽게 모 세관 힘으로 발판의 틈새 공간에서 모든 매체를 제거 하.
- 즉시 1 10 × 106 셀/mL 비 계 (그림 1E)의 전체 틈새 공간을 침투 한다 발판 위에 밀도에 매체에 보조 세포 유형 (예를들면, cardiomyocytes)의 현 탁 액의 한 방울 (약 20-40 µ L)를 추가 합니다. 인큐베이터에서 (37 ° C, 5 vol.% CO2, 95% 상대 습도) 0.5-개별 microfiber에 준수를 셀 수 있도록 2 h에 대 한 이러한 구성 품 어. 아니 눈에 띄는 증발 관찰 되도록 기간 동안 작은 물방울 크기를 모니터링 합니다.
- 부드럽게 원하는 vascularized 조직 형성 될 때까지 관련 매체에서 어떤 비 부착 한 세포 및 문화 구조를 제거 하는 PBS 목욕에 떨고는 건설 기계를 세척.
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Representative Results
미세 bioprinting 전략 낮은 점도 bioinks54,55를 사용 하 여 microfibrous 장비의 직접 압출 bioprinting 수 있습니다. 같이 그림 2A, 한 비 계 6 × 6 × 6 m m의 크기와3 포함 된 > microfiber의 30 레이어 10 분 이내 bioprinted 수 있습니다. CaCl2 alginate 구성 요소의 즉각적인 이온 가교 과정에서 bioprinting의 최고 보기 및 사이드 보기 그림 2B와2c에 표시 된 대로 bioprinted microfibrous 발판의 장기적인 안정성을 보장 GelMA 컴포넌트의 이후 실제 photocrosslinking 동안 우수한 구조적 무결성에 대 한 허용. 이 경우에 프로토콜에 지정 된 bioprinting 조건 달성 microfiber 붓기와 약간 증가 초과 것 직경에서 대략 100-150 µ m 이었다.
bioink, 이온 가교 및 photocrosslinking, 미세 돌출을 포함 하 여 bioprinting 프로세스는 크게 캡슐화 된 HUVECs의 미치지 않았다. 셀의 상대적으로 높은 생존 능력을 유지할 수 있는 > (그림 2D) 이러한 모든 절차 완료 후 80%. 보고 이전54,55로 HUVECs 수 점차적으로 확산 하 고 하루 16 게시물-bioprinting 문화 (그림 2F)에 루멘 같은 구조를 가정 하는 microfiber의 peripheries에 하루 0 (그림 2E)에서 처음 무작위 배포에서 microfiber 마이그레이션할. 이러한 문제는 HUVECs에 대 한 관찰 했다 내 피 세포의 기본 인터페이스 기반 경향으로 영양분과 산소를 둘러싼 그들의 인테리어55,59보다 microfiber의 더 높은 가용성으로 인해.
Microfibrous 비 계 또한 조직 공학에 대 한 독립 실행형 플랫폼으로 작동할 수 있습니다. 예를 들어 심근 조직을 사용 하 여, 신생아 쥐 cardiomyocytes 5 × 106 셀/mL, 밀도 bioprinted 발판의 틈새 공간에 시드 되었고 경작에 Dulbecco의 수정이 글 중간 (DMEM) 10 vol.% FBS와 보충. 매체는 cardiomyocytes 박동, 시작 될 때까지 처음 2-3 일에 매일 후 유일한 ½ 매체는 모든 2-3 일55,60,,6162교환 바뀌었다. 세포는 그들의 자연 및 동기화 된 셀 소스 및 건설 기계55의 구성에 따라 최대 9-28 일 동안 구타 유지할 수 있었다. 발판에 성숙한 cardiomyocytes confocal 형광 이미지에 그림으로 기능 심장 biomarkers의 강한 표현 그림 3, sarcomeric α-actinin (그림 3B) 등 connexin-43 (그림 3C)도 보였다.
내 피 세포 및 2 차 전지 종류 결합, vascularized 조직 수 추가 건설 된다. 다시, 후 관 침대는 bioprinted microfibrous 비 계에 약 16 일 문화의 후 예를 들어, 심근 사용 하 여, 신생아 쥐 cardiomyocytes 했다 이후 시드 발판의 틈새 공간으로. 경작 및 일반적인 매체에 성숙 EGM:DMDM의 1:1 볼륨 배급의 구성, 후 endothelialized 심근 조직 자연과 동기 박동55전시 형성 될 수 있습니다. 그림 4에서 단일 평면 confocal 형광 이미지 추가 주로 microfiber (그림 4B)의 경계에 있는 HUVECs와 세포 유형 및 microfiber (그림 4C)의 외관을 둘러싼 cardiomyocytes의 밝혔다.
그림 1 : Vascularized 조직을 생성 하기 위한 미세 Bioprinting 전략 구성.
(A) 공동 압출 복합 bioink와 CaCl2에 대 한 핵-칼 동축 프린트 헤드의 디자인. (B-E) Vascularized 직물의 제조 절차를 보여주는 회로도 구성 합니다. 이 그림은 참고55에서 허가로 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : Bioprinting Microfibrous 혈관 침대.
(A) bioprinted 30 레이어 microfibrous 비 계를 보여주는 사진. (B, C) Bioprinted 비 계를 보여주는 현미경의 상단과 측면 전망. (D) 생존의 HUVECs bioprinted microfibrous 비 계에 라덴. 녹색과 적색 라이브 하 고 죽은 세포를 각각 나타냅니다. (E, F) 형광 현미경 보여주는 녹색 fuorescent 단백질 (GFP)의 조직-0에서 bioprinted microfiber에서 HUVECs와 하루 16 게시 bioprinting, 각각. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : Bioprinted Microfibrous 비 계에 Cardiomyocytes의 후속 성장.
형광 현미경 (A) 핵, sarcomeric α-actinin를 (B) , (C) connexin-43, 및 (D) 자취를 보여주는. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : Endothelialized 심근 조직의 건설.
형광 현미경 (A) 핵, (B) GFP-HUVECs, HUVECs 및 cardiomyocytes, 및 (D) 자취의 (C) f 걸 보여주는. D에서 인세트 endothelialized 심근 조직에의 낮은 확대 이미지를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
보조 데이터 집합입니다.
G-코드 샘플 파일이 bioprinting 6 × 6 m m2 사각형 격자 인접 microfiber 220 µ m 간격으로.
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Discussion
동축 프린트 헤드의 코어와 칼 집에서 교차 결합 시키는 대리인에서 두는 bioink의 동시 전달 수 있도록 성공적인 미세 bioprinting 향한 중요 한 단계를 나타냅니다. 이 프로토콜에서 예제 프린트 헤드 포탄으로 핵심 및 18 G 바늘 27g 바늘을 사용 하 여 만든, 동안 다양 한 조합 바늘의 다른 크기를 사용 하 여 쉽게 확장할 수 있습니다. 그러나, 흐름의 변화에서 결과 각 단계에 전달, 바늘 크기에서 변경 모두는 bioink (개별적으로 조절 가능한 듀얼 채널 하나 대신 두 개의 주사기 펌프를 사용 하 여), 교차 결합 시키는 대리인 및 잠재적으로 bioprinter에 의해 발생 한 증 착 속도의 흐름 속도의 더 최적화를 요구할 것 이다.
현재 프로토콜에서 매개 변수 (바늘 크기, 흐름 율 및 증 착 속도)의 조합 증 착, 보통55에서 평형 후 대략 150 µ m 팽창 직후 약 120 µ m의 직경을 가진 bioprinted microfiber를 이끌었다. 이러한 크기는 microfiber의 층 사이 공간이 되면서 bioprinted 구문의 레이어 두께 또한 약 같습니다. Bioprinted microfiber의 직경은 모든 세 매개 변수54,63; 프린트 헤드의 코어 바늘과는 bioink의 유량의 크기는 칼 바늘, 교차 결합 시키는 대리인 및 증 착 속도의 흐름 속도의 크기는 microfiber의 직경 상관 부정적인 반면는 microfiber의 직경와 긍정적으로 상관 된다. 임의 구조54,55의 microfibrous 장비의 증 착에 대 한 전동된 스테이지는 프린트 헤드의 움직임을 제어할 수 있습니다.
또한,는 bioink의 정립도 bioprinting의 프로 파일을 변경할 수 있습니다. 예를 들어 alginate와 GelMA 특정 응용 프로그램에 따라 약간 변조 될 수 있다 그리고 bioink, 폴 리 에틸렌 글리콜-tetraacrylate (PEGTA) bioprinted microfiber40의 역학을 증가 등으로 추가 재료를 혼합 수 있습니다. 자외선 가교는 또한 추가 포함 된 내 피 세포54의 동작에 영향을 미칠 수 있는 bioprinted microfiber의 중심의 기계적 특성을 결정 합니다. 이 프로토콜에 보고 된 매개 변수는 HUVECs에 대 한 최적화 되었다. 그러나, 그것은, 내 피 세포의 각 다른 유형에 대 한 가교 매개 변수 필요가 있을 것 이다 다시는 microfiber에 루멘 형성을 달성 하기 위해 최적화 된 예상.
Bioprinted 혈관 침대에 2 차 전지 유형 씨앗, 그것은 소수 성 표면의 조각에 발판을 놓고 발판의 틈새 공간에 대부분 매체 제거 되도록 하는 데 필요한. 이 microfiber의 표면에 연결 된 셀의 수를 극대화 물방울 무료 서와 시드의 과정에서 발판을 캡슐화 microfibrous 구조에 세포 현 탁 액의 즉각적인 침투를 허용할 것 이다. Cardiomyocytes 5 × 106 셀/mL에서의 상대적으로 높은 밀도 현재 프로토콜에서 심근 조직 구축을 위해 사용 되었다, 비록 이러한 밀도 특정 조직 종류에 맞게 임의로 조정 될 수 있습니다. 그것은 또한 메 마른 물 작성 하 여 실현 될 수 있다 습도 환경을 유지 중요 또는 비 계 (즉, 주변 우물 이나 PDMS 슬 래 브를 둘러싼 공간), 주변 PBS 보장 시드를 위한 매체의 작은 양을 뿌리기의 기간 동안 증발 하지 않습니다.
요약 하자면, 우리가 제공한 미세 bioprinting의 상세한 프로토콜 vascularized 조직의 편리한 제작을 위해. 이 전략 핵-칼 동축 프린트 헤드는 칼 집에서 코어 및 가교 에이전트에서 하이브리드 bioink의 동시 압출 수 있도록 데 사용 됩니다. 공동 압출 시는 bioink는 계층화 된 microfibrous 비 계를 형성 하는 bioprinter의 움직임에 의해 프로그래밍 alginate 구성 요소에 대 한 물리적 가교에 즉시 겪 습, 전체 구조는 화학적 photocrosslinked 장기 안정성 있도록 GelMA 구성 요소에 대 한 더. Bioprinting 과정은 microfiber에 캡슐화 하는 내 피 세포 증식 하 고 혈관 침대 발판 선회 루멘-같은 구조를 가정 peripheries 마이그레이션할 수 있습니다. 2 차 전지 종류를 시드 vascularized 조직 구조를 연속적으로 생성할 수 있습니다. 이 미세 bioprinting 전략 고유, 그리고 다양 한 조직 유형 간, 골격 근육, 편리 하 게 확장 될 수 있습니다 그리고 심근 외 암 원하는 종류의 합리적인 조합에 의해 현재 프로토콜에 특별히 bioprinted microfibrous 장비의 패턴. 같은 방법으로 생산 vascularized 조직 구조에 비보 조직 재생 또는 조직 모델링 생체 외에서 사용할 수 있습니다.
이 프로토콜에서 설명 하는 미세 bioprinting 전략와 관련 된 몇 가지 제한이 있습니다. 첫째, bioprinted microfiber의 직경 CaCl2 솔루션 효율적으로 crosslink 코어에서 alginate 구성 요소에 대 한 하이드로 겔 매트릭스의 확산 장벽으로 인해 몇 백 마이크로미터로 제한 됩니다. 지나치게 낮은 물리적 가교 밀도 다층 구조 불안정 한 만들 것 이다. 둘째, CaCl2 솔루션의 물리적 가교 에이전트는 내 피 뿌리 세포와 같은 HUVECs 보다 더 깨지기 쉬운 특정 내 피 세포 유형에 부정적인 영향을 발휘할 수 있습니다. Bioprinting 메서드를 사용 하 여 보다 다양 한 종류의 내 피 세포에 대 한 타당성은 추가 조사를 요구할 수 있습니다. 셋째, 내 피 세포는 microfiber 루멘-같은 구조를 형성할 수 있다, 이러한 microfiber의 코어 관류 수 있도록 투명 하지 않습니다. 따라서, 영양소와 산소 여전히 bioprinted 건설 기계에서 중간 공간을 통해 주로 제공 됩니다. Bioink64 의 photocrosslinkable 구성 요소와 희생 물자의 적응 기술의 이후 버전에서이 문제를 해결할 수 있습니다. 또는, bioprinted 빈 microfibrous 구조42,43,65,66,,6768 vascularized 조직의 직접 관류 되도록 혈관 침대로 사용할 수 있습니다 생성 합니다. 마지막으로, bioprinting 임상 크기의 조직의 여전히 수 있습니다 도전, 어떤 가능성이 높은 처리량 확장 규모 bioprinting를 달성 하기 위해 기준점과 미세 프린트 헤드69 의 디자인을 통합 하 여 해결할 수 있습니다.
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Disclosures
저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.
Acknowledgments
저자는 독립 상 (K99CA201603) 건강 통로의 국립 연구소의 국립 암 연구소를 인정합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alginic acid sodium salt from brown algae | Sigma-Aldrich | A0682 | BioReagent, plant cell culture tested, low viscosity, powder |
| Gelatin type A from porcine skin | Sigma-Aldrich | G2500 | Gel strength 300 |
| Irgacure 2959 (2-Hydroxy-4'-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone) | Sigma-Aldrich | 410896 | 98% |
| HEPES buffer | Sigma-Aldrich | H0887 | 1 M, pH 7.0 - 7.6, sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture |
| Fetal bovine serum | Thermo Fisher Scientific | 10438026 | Qualified, heat-inactivated, USDA-approved regions |
| Calcium chloride dihydrate | Sigma-Aldrich | C5080 | BioXtra, ≥99.0% |
| Phosphate buffered saline | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | pH 7.4 |
| Human umbilical vein endothelial cells | Angio-Proteomie | cAP-0001 | Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVECs) |
| GFP-expressing human umbilical vein endothelial cells | Angio-Proteomie | cAP-0001GFP | GFP-Expressing Human Umbilical Vein Endothelial Cells (GFPHUVECs) |
| Endothelial cell growth medium | Lonza | CC-3162 | EGM-2 BulletKit |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium | Thermo Fisher Scientific | 12430054 | High glucose, HEPES |
| Sylgard 184 silicone elastomer kit | Ellsworth Adhesives | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | Clear 0.5 kg Kit |
| UV curing lamp system | Excelitas Technologies | OmniCure S2000 | Spot UV Light Curing System with Intelligent UV Sensor |
References
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