Summary
Bu kağıt dopamin ve Glutamat yüksek zamansal çözünürlük ile serbest bırakılması sırasında doğal tatmin edici davranışlara ölçmek için karbon fiber elektrotlar ve enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji kullanarak sabit potansiyel amperometric kayıtları kullanımı detayları kadın hamster.
Abstract
Nörotransmitter yayın bir hızlı zaman ölçeğinde ölçmek için yeteneği belirli davranışları veya manipülasyonlar bağlanacak şekilde neurotransmission şekillerinin sağlar; temel mekanizmaları ve devre elucidating güçlü bir araç. Microdialysis tekniği beyin ilgi hemen hemen her analit ölçmek için yıllardır kullanılan iken, bu teknik de geçici çözüm sınırlıdır. Alternatif olarak, hızlı tarama çevrimsel voltammetry geçici kesin ve son derece hassas biri; Ancak, teknik olarak zor bu yöntem ilgi analitin electroactivity üzerinde kullandığından, nonelectroactive maddeler (örneğin, nörotransmitter Glutamat) algılamak imkanı ortadan kaldırmıştır. Bu kağıt sabit potansiyel amperometry ve electroactive ve nonelectroactive nörotransmitter zamansal hassasiyetle ölçmek için enzimatik biosensing bir araya getiren bir anahtar teslim sistemi ayrıntıları. Bu iki güçlü teknikleri eşleştirme tonik ve phasic neurotransmission ölçüm için göreli kolaylıkla sağlar ve aynı anda birden fazla nörotransmitter kayıt izin verir. Bu yazının amacı görüntüleme nihai hedefi ile kadın hamster içinde doğal olarak tatmin edici davranış (Yani, cinsel davranış) kullanarak dopamin ve Glutamat neurotransmission in vivo ölçme işlemi göstermektir Teknik fizibilite diğer davranışları ve deneysel paradigmalar incelenmesi için bu testin.
Introduction
Nörotransmitter yayın davranıyor uyanık hayvanlarda ölçmek için yeteneği belirli davranışlar mekanizmaları ve her ikisi de temel devresi araştırmak için güçlü aracı neurotransmission bir kayma ve temporal desenleri ile bağlamak araştırmacılar doğal izin verir ve gerçek zamanlı olarak operant davranışları. Tarihsel olarak, microdialysis beyin1ekstraselüler ortamında hem elektrikle reaktif ve tepkisiz maddeler ölçmek için istihdam edilmiştir. Bu teknik ekstraselüler sıvı, benzer iyonik kompozisyon sulu bir çözüm, sürekli bir akış küçük bir şaft bir semipermeable hollow fiber membran2/ yapılan bir ucu ile oluşan bir microdialysis sonda aracılığıyla kullanır. Sonda eklemeden sonra nörotransmitter veya diğer analitler ilgi semipermeable membran daha sonraki analiz için aralıklarla yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC), tarafından toplanmakta önce pasif Difüzyon tarafından çapraz olabilir bir analitik kimya teknik ayırmak için yaygın olarak kullanılan tanımlamak ve heterojen karışım3bileşenlerinde ölçmek.
Microdialysis hemen her analit ilgi ölçmek için kullanılan hassas bir teknik olmasına rağmen zamansal çözünürlük ile dakika dakika1,2onlarca sırasına en yüksek örneklendirme oranı düşüktür. Hızlı tarama çevrimsel voltammetry (FSCV), electroactive türleri, redoks potansiyeli dayanır bir teknik icadı ekstraselüler sıvı ilgi analit anlık konsantrasyonları yakınındaki aydınlatmak. Kısaca (bkz: Robinson vd. 4 için kapsamlı bir inceleme), bir elektrot yükseltmek ve daha düşük bir üçgen dalga moda hızlı zaman ölçeği4gerilim uygulanır. Gerilim daha doğru varsa, bileşik faiz art arda okside azaltılmış ve. Küçük bir alternatif akım oluşturur bir hareket elektronların bu oksitlenmeye ve azaltma sonuçları. Oranları gerçekleşecek oksitlenmeye ve bileşikleri mikrosaniye cinsinden meydana gelen azalma ile alt ikinci ölçekte tarama. Arka plan geçerli elde edilen geçerli yoklama tarafından oluşturulan çıkararak, bir vs geçerli çizim her bileşik için benzersiz bir gerilim oluşturabilir. Gerilim salınımlarını zaman ölçeğini bilinir, bu veri geçerli bir arsa bir fonksiyonu olarak hesaplamak için kullanılabilir. Böylece, bileşik göreli konsantrasyonları aktarılan toplam elektron sayısı her oksidasyon ve Redüksiyon tepki4bilinen olarak belirlenebilir.
Bu kimyasal özgüllük ve yüksek zamansal çözünürlük FSCV kimyasal konsantrasyonu vivo içindedeğişen algılamak için güçlü bir teknik olun. Ancak, bu manifoldu avantajlara rağmen bu teknik kapsamlı teknik uzmanlık ve pahalı ekipman ve kurulum gerektirir. Ayrıca, nonelectroactive nörotransmiterler (örneğin, Glutamat) bu tekniği kullanarak ölçülen olamaz. Neyse ki, elektrokimya5, hem de ticari kullanım bu buluşlar alanında teknolojik gelişmeler electroactive sigara nörotransmitter davranıyor uyanık hayvanlarda ölçmek için nispeten basit bir yaklaşım tanıttı hassas bir enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji olarak bilinen zamansal tekniği ödün vermeden. Bu tekniği kullanan bir uygulanan potansiyel5 tarafından oluşturulan bir amperometric oksidasyon geçerli olarak belirlenen electroactive hidrojen peroksit biri enzimatik nonelectroactive nörotransmitter ilgi içine dönüşüm iki yüzeylerde, . Piyasada bulunan Biyoalgılayıcı sondalar (bkz. şekil 1) seçerek analitler ilgi rekabetçi endojen interferents katkısını azaltarak ölçmek. Glutamat durumunda, ortak interferent askorbik asit (AA) katkısını rekabetçi ölçülen geçerli AA oksidaz AA sigara electroactive için dönüştürme sensörün aktif enzimatik yüzeyine co yerelleştirme tarafından azalır dihydroascorbate ve su. Buna ek olarak, bir olumsuz ücret Nafion polimer tabaka enzim tabakasının altında mevcut endojen iyonik bileşikler içermez.
Bu aynı Biyoalgılayıcı deneysel kurulum-ebilmek ölçü electroactive nörotransmiterler olduğu gibi FSCV ama bunun yerine bir sabit-potansiyel kayıt6kullanır. FSCV içinde uygulanan salınım voltaj aksine, bir sabit-potansiyel kayıt gerilim Redoks faiz analit için potansiyel tutulur. Birden çok nörotransmitter ezici bir çoğunlukla doğru bir nörotransmitter çarpık beyin alanlarda aynı Redoks potansiyeli olabilir gibi FSCV daha az kimyasal olarak seçime bağlı olsa da, bu yaklaşımın komple doğa kimyasal eksikliği daha ağır basar özgüllüğü.
Electroactive ve nonelectroactive nörotransmitter sürümde yakın gerçek zamanlı ölçmek ve belirli davranış olaylara bağlamak için yakınsak nörotransmitter yayın incelemek için bir fırsat sağlar. Bu el yazması yanıt uyanık davranan hamster doğal ödül olarak dopamin ve Glutamat neurotransmission sorguya çekmek için bu sistemi ayrıntıları. Bu kağıt bu nörotransmitter yayın sırasında diğer davranışları ve deneysel paradigmalar incelenmesi için onun fizibilite gösteren amacı ile kadın hamster cinsel davranışlara Ölçme işleminin detay amaçtır.
Elektrokimyasal kayıtları kullanmak için ideal bir model hamster are
Tarihsel olarak, sıçan ve fareler modelleri cinsel davranış çalışmada istihdam edilmiştir. Bu kemirgen türler atlamalı, darting ve kulak kovalamak ve sonuçta mount kadın7erkek ikna için kıpır kıpır dahil çok sayıda kadın talep davranışları içeren bir dinamik çiftleşme sırayla meşgul. Erkek (veya vajinal penetrasyon olmadan) tarafından montaj sırasında etkin talep davranışları sürdürme önce sadece birkaç saniye için ( lordozdenir) onun cinsel davranış duruş da dişi yürütmektedir yalnızca birkaç saniye sürer. Bu davranış, hareketsizlik, kısa süreler ile serpiştirilmiş etkinliği yüksek düzeyde oluşan hayvanlar davranışlar içinde neurotransmission ölçmek için sorunlu kalıptır. İlk olarak, sinirsel aktivite ile ilgili olmayan amperometric kayıtları hareketi eserler olabilir. İkinci olarak, hareket bazı beyin bölgelerinde belirli nörotransmitter sürümü ile ilişkilidir. Örneğin, dopamin yayın dorsal ve ventral striatum8,9, psikostimülan takiben dopamin microdialysis ölçümleri için temel bir bulgu Lokomotor aktivite birleştiğinde Yönetim10. Çünkü erkek tipik talep davranış ecek içindet kemirgenler Lokomotor aktivite düzeyi yüksek içerir ve bir 10 dakika cinsel davranış testi toplu tarafından temsil edilir, bu zor neurotransmission değişimler topluca sadece son açık bileşenleri cinsel davranış için atfetmek yapar dakika.
Nörokimyasal profil sahibi kadın cinsel davranışı çözümlemek için bu laboratuvar cinsel davranış eşlik eden en az Lokomotor aktivite olduğu bir tür aradı. Suriye hamster (Mesocricetus hava) çiftleşme sırayla talep davranışları genellikle görülen sıçanlar ve fareler11eksikliği nedeniyle nörokimyasal kayıtları için idealdir. Sonuç olarak, kadın hamster girmek ve korumak için lordoz duruş 10 dakikalık oturum12test 9 dakika yukarı. Lokomotor hareketlerle yabancı kadın, in vivo eksikliği ile erkek ile cinsel etkileşimlerin bileşenlerle ilişkili olabilir elektrokimyasal kayıtları elde edilebilir.
Çiftleşme nöbetleri hamster içinde
Test odasına erkek uyarıcı hayvan giriş sonra erkek başlangıçta onun (Şekil 2A) montaj önce anogenital soruşturma (AI) kadın meşgul olacak. Sırayla bağlamaya erkek, dişi bir alıcı cinsel duruş içinde onu geri kemerler ve montaj erkek penis vajinaya erişebilirsiniz böylece kuyruğunu saptırır lordoz, olarak bilinen varsaymalıyız. Erkek her iki paws (Şekil 2B), ile onun hindquarters clasping erkek, dağ ve penil sıra (Şekil 2C) elde etmek için bir girişim sokmak başlar. Erkek erkek (olmadan ekleme) mount yanı sıra sonunda boşalma ulaşmak daha önce birkaç kez intromit. Bu bağlar ve boşalma için önde gelen intromissions dizisi "çiftleşme ne dersin" olarak adlandırılır. Erkek-ecek-si olmak birkaç çiftleşme nöbetleri içinde tek bir oturum.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
burada açıklanan tüm yordamlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Minnesota Üniversitesi tarafından onaylanmıştır ve uygun bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları Guide olarak vardır 13 .
1. hayvanlar ve Cannulation cerrahi
- elde edilir Suriye hamster yaş yaklaşık 55 gün bir ortak hayvan tedarikçiden.
Not: hayvan yaş nedeniyle çeşitli deneysel paradigmaların kısıtlamalarını değişir, cinsel davranış için tüm yaklaşık aynı yaşta cinsel olgun hayvanlar elde etmek önemli olsa. - Ev hayvanlarda kontrollü bir sıcaklık (22 ° C) ve (14 10 h ışıklar, 13:00 h ile karanlık ardından h ışık) aydınlatma çevre, gıda ve su kullanılabilir ad libitum dönemlerde deneysel test ile.
Not: hamster sezona göre yeniden beri bu 1410: açık/koyu döngüsü taklit eden kendi doğal üreme koşulları. - Laboratuvar 1 haftalık calıştıkları aseptik ikili ovariectomies ve kafa içi stereotaksik cannulations (örneğin, Fentobarbital) genel anestezi altında yapmak ve yönetmek uygun kurumsal olarak onaylı Post-Operatif analjezik ve antibiyotik tedavisi daha önce açıklandığı gibi 14 , 15.
Not: cinsel davranış çalışma için ovariectomies hayvanlar düzgün eksojen hormon uygun olarak deneysel zaman çizelgesi ile cinsel algılama için indüklenen cinsel hormonları önemli endojen kaynağı kaldırmak gereklidir.- Dopaminerjik ve glutamatergic sonda implantasyonu, Stereotaxic Kılavuzu Kanüller (0.7 mm çap; implant şekil 3) ilgi alanı içine (örneğin, bu laboratuvar doğru nucleus accumbens (NAc) hedef) 15 başka bir yerde kademeli ayrıntılı olarak açıklandığı gibi.
Not: bir Glutamat veya dopamin sondası hayvan başına tek sensör kayıtları üzerinden sunulan veriler olmasına rağmen tek bir hayvan 4 sensörler aynı anda kayıt için bu sistemi sağlar; Böylece, 1-4 Kanüller istenen deneysel tasarım ve sonuçları bağlı olarak implante.- Bölge stereotaksik atlas kullanarak ilgi implant koordinatlarını belirleyin (örneğin, Altın Hamster Brain Morin tarafından & ahşap), sensör 1 mm kanül altında beyin dokusu içine uzanır akılda tutulması.
- Sonra bir kanül Stereotaxic istediğiniz ventral dorsal yere indirdi, bir kap diş akrilik, paslanmaz çelik kemiği vida ve plastik bir kafa ile güvenli inşa kullanarak kafatası yapıştırmayın mount ( şekil 3 ; 15 daha fazla bilgi için bkz:).
- Karbon fiber test etmek için bir referans elektrot (350 mikron çapında, 7.5 mm toplam uzunluk) kontralateral Yarımküre takın.
Not: Bir belirli konum veya kanül mesafeden gerekli değildir; referans elektrotlar yer yerleştirilebilir herhangi bir yerde uygun kontralateral Yarımküre.
- Dopaminerjik ve glutamatergic sonda implantasyonu, Stereotaxic Kılavuzu Kanüller (0.7 mm çap; implant şekil 3) ilgi alanı içine (örneğin, bu laboratuvar doğru nucleus accumbens (NAc) hedef) 15 başka bir yerde kademeli ayrıntılı olarak açıklandığı gibi.
2. Biyoalgılayıcı ve karbon Fiber test
- 1 haftalık Cerrahi Kurtarma, cinsel algılama ikna etmek için hormon astar rejimi yönetmek.
- Estradiol benzoat ayçiçek yağı 0.1 ml 10 µg subkutan enjekte (SC), yaklaşık 48 saat ve cinsel davranış, cinsel algılama erkek 11 doğru ikna etmek için test önce 24 saat.
- Enjekte 500 µg, progesteron ayçiçek yağı, SC, erkek cinsel algılama 11 ikna etmek için giriş önce 4 h 0.1 ml.
- Beyaz ve kırmızı ışığı koşulları 16 , 17 test altında değişiklik tabi kemirgenler sosyal davranışlarını olduğu gibi onların günlük döngüsü, karanlık aşamasının başında bütün hayvanlar test , 18.
- enzimatik Biyoalgılayıcı Glutamat sınama, sensörler vitro ( şekil 4) 15 , daha önce açıklandığı gibi kullanımdan önce kalibre 19.
- yapmak kalibrasyon çözüm 20 mL cam test gününde taze tüpler santrifüj kapasitesi. Analit çözüm için 7.4 mg L-glutamik asit yavaşça tüp ters çevirme tarafından ultra-saf H 2 O 10 mL geçiyoruz. İnterferent çözüm 176.1 mg AA 10 ml ultra-saf H 2 O. çözülerek olun
- Kurmak için bir temel laboratuar yüzük stand temel alınarak bir manyetik karıştırıcı yerleştirerek kalibrasyon. 20 mL ceketli kabı manyetik karıştırıcı üstüne yerleştirin ve bir orta 2 prong kelepçe kullanarak yerde kelepçe.
- Ekle manyetik heyecan bar ve 100 mM fosfat 20 mL serum fizyolojik (PBS) ceketli kabı arabelleğe alınmış. Arabellek çözüm 37 ısıtmak için dolaşan bir su banyosu ceketli kabı bağlanmak ° C.
Not: enzimatik aktivite sıcaklığı ile etkilenir bu yana enzimatik Biyoalgılayıcı kalibrasyonlar vücut sıcaklığında gerçekleştirilmelidir.
- Ekle manyetik heyecan bar ve 100 mM fosfat 20 mL serum fizyolojik (PBS) ceketli kabı arabelleğe alınmış. Arabellek çözüm 37 ısıtmak için dolaşan bir su banyosu ceketli kabı bağlanmak ° C.
- Yer sensör kalibrasyonu tutucu üzerine ceketli kabı ve bir dik açılı mengene kullanarak yerde güvenliğini sağlama üstte 4 kanallı kalibrasyon Pre amplifikatör ayarla. Pre amplifikatör veri klima ve satın alma aygıtı kayıt kalibrasyon verilerine bağlanın.
- Her enzimatik Biyoalgılayıcı Glutamat (veya diğer analitler için diğer ticari olarak mevcut Biyoalgılayıcı sondalar örneğin, glikoz ilgi) duyarlılığını test önce deneysel kayıt kalibrasyon tutucusuna sonda yerleştirerek bir ceketli kabı, algılama kavite ve gümüş klorür (AgCl) başvuru tel tampon çözelti içinde bir kısmı batış.
- Bir bağlantı noktasına bir 4 kanallı kalibrasyon Pre amplifikatör test edilen her sensör (en fazla 4) bağlanmadan önce ücretsiz indirilebilir satın yazılım kullanan bilgisayar arayüzü yeni bir kayıt başlatmak. Alıcıları çok istikrarlı bir temel ulaşmak izin.
- Sensörler istikrarlı bir temel ulaştığında analit enjeksiyonları eklemeye başlamak. Delik kalibrasyon tutucu pipet ucu arabellek çözüm tanıtmak için kullanın. Bir enjeksiyon yapıldığında açıklama eklemek için kayıt yazılımı hızlı anahtar ek açıklama aracını kullanın.
- Olun 10 µM eklemeler Glutamat pipetting 40 μL analit çözüm arabellek çözüm içine. Eklemeler stabilize etmek sensör için bekleyin. İnterferent AA çözümden (50 μL enjeksiyon hacmi 250 Mikron değişim konsantrasyon için) tek bir enjeksiyon eklemeden önce analit çözüm 3 enjeksiyonlari ekleyin.
Not: Kalibrasyon (Adım 2.12 enzimatik deneysel kayıt sırasında görülen) amperometric sinyal değişiklikleri dönüşüm Glutamat konsantrasyonu, değişikliklere istenirse sağlar. Başvuru 15 kademeli yönerge için bkz:. Bu laboratuvar tarafından kullanılan dopaminerjik probları üretim sürecinde ticari sağlayıcı tarafından kalibre. 19 enzimatik bileşenleri aşağılamak gibi zaman içinde onların hassasiyeti düşürebilir gibi Glutamat probları kullanım zaman ayarlanması gerekir. Karbon fiber elektrotlar bozulması tabi olmayan, şirketin Sevkiyat öncesinde gerçekleştirdiği kalibrasyon t yeterli boyunca çünküİşte ek işleme aracılığıyla ince karbon fiber (350 mikron çapında) zarar bir artış olasılığı.
- Olun 10 µM eklemeler Glutamat pipetting 40 μL analit çözüm arabellek çözüm içine. Eklemeler stabilize etmek sensör için bekleyin. İnterferent AA çözümden (50 μL enjeksiyon hacmi 250 Mikron değişim konsantrasyon için) tek bir enjeksiyon eklemeden önce analit çözüm 3 enjeksiyonlari ekleyin.
- Test odası ile yatak hayvandan alınan satır ' s ev kafes.
Not: Bu dişi artırır ' test ile s aşinalık odası, yanı sıra cinsel uyarıcı estradiol tedaviye yanıt kadın tarafından dağıtıldı koku çiftleşme ipuçları erkek ortaya koyar. - Hafifçe isoflurane ya da başka bir uçucu anestezi indüksiyon odasında hayvanlar sonda ekleme öncesinde anestezi.
- Tıkayıcı obdurator Kılavuzu kanül çıkarıp karbon fiber elektrot veya rehber şaft aracılığıyla enzimatik sonda takın.
- Sonda eklemeden sonra hayvan test odasında yerleştirin.
Not: Bu laboratuvar 10-gal cam akvaryum (24,5 x 48.9 x 29.4 cm) kullanır, ancak eşit alan yuvarlak odaları-da var istihdam. - Video ve zaman kilitli amperometric sinyal kayıt bir ticari yazılım programı, Begin açıklanan ayrıntılı olarak başka bir yerde 15.
- Bağlanmak duyumsal için kayıt sistemi: elektrikle korumalı bir kablo ve bir elektrik döner üzerinden potansiyostat. Sensör bağlantı bir PIN eki baş bağlama üzerine vidalama ile sabitleyin. Gerekirse laboratuvar film kullanarak bağlantı güçlendirmek.
Not: Özelleştirilmiş bir bağlayıcı enzimatik Glutamat sensörleri doğrudan potansiyostat için bağlı olma varken potansiyostat için karbon fiber elektrot ve referans elektrot eklemek gereklidir. - İzin deneysel test etmeden önce beyinde equilibrate sensörü.
Not: Denge saatleri kayıt sensör bağlı olarak farklılık gösterir (örneğin, enzimatik sensörler gerektirir 2-4 h denge, karbon-fiber elektrotlar sadece yaklaşık 30 dk gerektiren süre). Her iki tip sensörler implante edilir, enzimatik sensör uzun equilibrate. - Sensör denge sonra bir uyarıcı erkek test odasına tanıtmak.
- Uyarıcı erkek tarafından penis ekleme (adlandırılan sıra) ile ilk mount, kayıt için ek bir 10-30 dakika bağlı olarak deneysel gol devam.
- Davranış test, takip kesin dişi ' s sensörü.
- Her iki hamster test odasından kaldırın. Yatak çıkarmak ve % 70 etanol kullanarak odası temiz.
Not: karbon fiber kayıtları için gerekli kısa denge nedeniyle adımları 2.3-2,14 aynı gün içinde birden fazla hayvan test etmek için tekrar edilebilir. Enzimatik sensörler yaklaşık 4 h denge gerektirdiğinden, hayvanların farklılıkları nedeniyle mümkün arası konu varyasyon sınırlamak için günlük sadece bir hayvan buna ek olarak, test ' test sırasında sirkadiyen saat.
3. Fedakarlık ve perfüzyon
- test sürelerin takip derin anestezi kadın denek bir euthanizing maddesi ile (örneğin, laboratuar kullanır 0.2 mL fenitoin ve Fentobarbital çözüm mayi bir enjeksiyon) .
- Transcardially sıvı 25 mM %4 paraformaldehyde-PBS kullanarak 20 dk saplantı tarafından takip tüm dolaşımdaki kan kaldırmak için PBS pH 7,6, hayvanla.
- Beyin kaldırmak ve içinde postfix ~ 30 mL 50 mL konik tüp gecede %4 paraformaldehyde çözeltisi.
- Mağaza % 10 beyinde Sükroz PBS çözüm hazır seri bölümüne kadar.
Not: Beyin kirletici potansiyel büyüme önlemek için haftalık Sükroz çözüm değişiklikleri ile 2 hafta için depolanmış olabilir.
- Mağaza % 10 beyinde Sükroz PBS çözüm hazır seri bölümüne kadar.
- Seri Bölüm 40 µm beyinde dilim ile ikisinden biri implant bölgesi boyunca buz gibi bir microtome ya da cryostat daha önce açıklandığı gibi 19.
- Dilimleri seri olarak piyasada bulunan Yapışkan kaplı slaytlarda mount (veya yapmak için 20 bakın). En az bir gecede kurumaya izin.
- Kresil Mor boya, açık, slaytlarla leke ve coverslip daha önce açıklandığı gibi 20.
- Görüntü sensörünün anatomik yerleşim onaylamak için parlak alan mikroskobu kullanarak slaytları.
4. Davranışsal kodlama
- görünümü ve videoları ücretsiz ticari olarak indirilebilir yazılım kullanarak açıklama (Tablo malzemeleri görmek) tam kod davranışları amperometric sinyal zaman kilitli yavaş çekimde.
Not: MATLAB kodu kullanabilmek için (bkz: ), başlangıcı ve sonu her kadın açıklama ' s ve erkek ' s davranışlar.- Açıklama Ekle startLordosis kadın onu geri dorsoflexion başlatır ve kuyruğunu yukarıya doğru kusurları çerçeve içinde. Dişi dişi test odasında başka bir konuma readjusts bağlandığınızda sık sık oluşur bu duruş, sonlandırıldığında endLordosis açıklama.
- Açıklama startAI dişi lordoz duruş ve erkek onun burun dişi doğru hamle olduğunda ' s anogenital bölge, nerede koklama, yalama veya onun perineal bölgesini koklaşmaya oluşabilir. Ne zaman erkek dişi yakın bir mesafede onun burun kaldırır endAI açıklama ' s anogenital bölge.
- Erkek yaklaşımlar ve Bağlama girişimi (örneğin, yan, kıç) yönünü ne olursa olsun bir montaj duruş kadın onun forepaws koyar startMount açıklama.
- Açıklama startIntromission ne zaman başarılı agresif bağlı erkek penis dişi erişir ' s vajina.
Not: Bir sıra bağlı olarak erkek gözle görülür onun üst bacaklarda bedeni doğru çeker onun pelvis ileri bindirmeler ve kuyruğunu yukarıya doğru penetrasyon gösteren bukleler sıra önce oluşan agresif üzerinden davranışsal ayırt (bkz < güçlü sınıfı "xfig" = > şekil 4 C).- Uygun olduğunda ek açıklama boşalma.
Not: bir çiftleşme butik ve başarılı bir sıra ile birlikte sonunda, erkek boşalmak olacaktır. Bir gerçek emisyon görselleştirmek mümkün olsa da, ortaya çıkışı, boşalma ayak hareketi açıklama onların arka ayak hareketlerle bir sıra 21 sırasında böylece ayakla basma karakteristik bir erkek hamster var.
- Uygun olduğunda ek açıklama boşalma.
- Açıklama endIntromission ve endMount aynı anda çerçeve içinde erkek onun açık iki pençesi kaldırdığı ve böylece dişi ile hiçbir temas vardır. Görselleştirmek için sık yetersizlik nedeniyle kararla, eşzamanlı kod nöbetleri çiftleşme arasında tutarlılık ve güvenilirlik için izin vermek için bu iki davranışlar.
Not: Bir çiftleşme butik ya başarılı bir boşalma izler ya da dişi en az bir bağlama takip lordoz duruş kırıldığında.
5. Örnek veri analizi
Not: sabit potansiyel karbon fiber ve enzimatik kayıtları kullanımı için dopamin birND Glutamat, sırasıyla, tonik ve elektrokimyasal yayın phasic kalıpları ölçmek için yeteneği sağlar. Bu laboratuar ücretsiz, ticari kazanç sistemi kullanır ve yazılım dönüştürmek ve kaydetmek için analog sinyalleri dijital kaydedilen (0,600 V, örnekleme hızı önyargı 1 Hz =).
- Örnek veri çözümleme protokolü açıklaması
- diğer programları kullanılabilse ölçmek tonik ve MATLAB kullanarak kaydedilmiş elektrokimyasal sinyal phasic (geçici) değişiklikleri.
- İçin sunulan veri, 50 puanlık hareketli ortalama filtre kullanarak tonik sinyali hesaplamak. Sinyal bir salt geçici normalleştirilmiş temsil ham veri tonik sinyali çıkarılarak hesaplanır. Phasic doruklarına tanımlarken, çeşitli algoritmik seçenek vardır (1'den daha fazla sinyal değişiklikleri olarak tepeler etiketleme örneğin, ortalama yukarıda SD).
- Bu tepeler, Yani, yerel maxima konumlarını tanımlamak, normalleştirilmiş sinyalini en az pik genlik ile MATLAB işlevi peakfinder kullanarak kök ortalama kare sinyal için ayarlayın. Normalleştirilmiş sinyalini tespit doruklarına konumunu her ayında en yüksek genlik ayıklamak için kullanıldı. Olabilir ile rastlayan, ya da göreli tepe nörokimyasal soruşturma altında sürüş herhangi bir zaman kilitli davranışların tanımlanması için zirveleri algılama yeteneğini sağlar.
- Kesimi (bkz. Adım 3) davranış ek açıklamalar doğrultusunda işlenen verileri; bir öğrenci ' s t-testi tonik nörotransmitter düzeyinde, geçişler oluşumunu ve genlik farklılıkları değerlendirmek için kullanılan geçişler sırasında nöbetleri çiftleşme sırasında önceden çiftleşme ne dersin lordoz lordoz karşı. Tonik desenleri elektrokimyasal sürüm değişiklikleri ölçmek için lordoz konumu (örneğin, önceden çiftleşme ne dersin lordoz) çiftleşme bir müddet önce doğrudan sırasında meydana gelen veri noktaları veri noktaları için bir çiftleşme bout sırasında karşılaştırıldı bir t-test kullanarak oturumu
- diğer programları kullanılabilse ölçmek tonik ve MATLAB kullanarak kaydedilmiş elektrokimyasal sinyal phasic (geçici) değişiklikleri.
- Açıklanan veri çözümleme protokolü için ham veri hazırlanması
Not: diğer programlar veya analizler aynı derecede uygun seçenekler olsa da belirtildiği gibi yukarıda açıklanan MATLAB kodu kullanmak için ham veri olarak hazırlanmalıdır Şu şekilde:- ek açıklama ve gerilim dosyalarını verme. Altında bunun için ' dosya ' sekme, seçme ' ihracat ' işlev ve seçin ' ek açıklamaları ' ek açıklamaları kaydetmek için sekme. Altında ' dosya ' sekme, seçme ' ihracat ' işlev ve seçin " TSV ' voltaj ölçümleri TSV uzantısı dosya olarak kaydetmek için sekme.
- Her dosyayı bir elektronik tablo programı ile açın ve Farklı Kaydet'i ' xls/xlsx ' dosyaları MATLAB ile uyumlu hale getirmek için.
Not: İçin ' ek açıklama ' dosyası, ek el ile ek açıklamaları başlangıcı ve sonu her iki önceden çiftleşme ne dersin lordoz (PreMBlordorsis açıklamalı, dikte etmek için bir elektronik tablo programında sonrası ihracat eklendi ) ve çiftleşme ne dersin bu zaman Puan doğrudan belirtildiği gibi karşılaştırılabilir içinde gaza 5.1.2. - Açıklama önceden çiftleşme ne dersin lordoz (startPreMBlordosis) başlangıcı aynı anda lordoz davranış (startLordosis) aynı zamanda başlar gibi bir bağlama davranışı içerir ve aynı zamanda yeni bir başlangıcında çiftleşme ne dersin Eğer dişi lordoz duruş kalır.
- İlk monte başladığında önceden çiftleşme ne dersin lordoz (endPreMBlordosis) sonunda açıklama.
- Bu çiftleşme bir müddet başlangıcı anlamına gelir gibi çiftleşme dersin (startMB) başlangıcı endPreMBlordosis, aynı zamanda ek açıklama.
- Bir çiftleşme ne dersin (endMB) iki ucundaki bir boşalma içeren bir bağlama sonu açıklama (bkz. Adım 4.1.4.1), ya da dişi takiben ' s sona ermesi lordoz duruş (endLordosis).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Elektrokimyasal ve davranışsal yukarıda açıklanan metodoloji kodlama kullanarak, bu lab tonik ve dopamin ve Glutamat phasic dalgalanmalar cinsel davranış vivo kayıtları sırasında karakterize etmek başladı. Bu metodoloji geçici hassas şekilde nedeniyle, daha doğrusu cinsel davranış sırasında neurotransmission karakterize olabilir; aynı zamanda yayın şekillerindeki belirli değişiklikler karşılık gelen tonik değişiklikleri için karşılık gelen geçici dalgalanmalar ve çiftleşme nöbetleri sırasında atfetmek bireysel çiftleşme davranışları (örneğin, sıra, boşalma) dişinin alınması sırasında Montaj erkeğe ait.
Özellikle, dopamin ve Glutamat NAc ayrı hayvanların içinde yayın şablonlarını ölçmek üzerinde odaklanmak için bu yöntemi kullandık. Kak ödül22 işleme dahil kritik bir bölgedir ve cinsel davranış23ödül yönleriyle ayrılmaz bir bölge olarak tarif edilmiştir.
Biz cinsel davranış sırasında nöbetleri (şekil 5) çiftleşme sırasında bir tonik dopaminerjik düzeylerinde artış NAc çekirdek kadın göstermek gözlenen. Bu tonik değişiklikler olmakla birlikte tüm çiftleşme nöbetleri için gösterilen yukarıda açıklanan yöntem arasındaki çiftleşme her dersin tonik değişiklikleri ölçebilir ve böylece nörotransmitter yayın tonik düzeyde genel değişiklikler geçici kimlik artışı tüm oturum. Ayrıca, açıklanan Bu metodoloji phasic değişiklikleri kesin olarak belirlemek ve geçici büyük olasılıkla bu phasic nörotransmitter dalgalanmalar ile ilişkilendirilen davranışlar eşleyin. Özellikle, bu ilk sonuçlar nöbetleri çiftleşme sırasında Kak dopaminerjik geçişler sırasında vajinal ekleme (sıra) erkek (şekil 6) tarafından ortaya öneririz. Ayrıca, bu sıra ile belirli, AI gibi diğer çiftleşme davranışları ihmal edilebilir dopaminerjik yanıt ile birliğidir.
Benzer bir yol Glutamat açıklaması, bireysel intromissions dorsal NAc çekirdek bir çiftleşme butik (Şekil 7) sırasında karşılık gelen hızlı geçişler ile ilgili diğer hayvanlarda gözlenmiştir. Bu desen belirli, NAc kabuk veya medial diğer hayvanların kaudat oluşan discernable sinyal bölgesidir.
Resim 1 : Enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji.
Nörotransmitter enzim-aracılı işleme (sol görüntü) via algılamak piyasada bulunan enzimatik Biyoalgılayıcı sondalar standart imalatı. Glutamatergic sensörler söz konusu olduğunda, Glutamat oksidaz enzimatik Katmanı (sağ görüntü) nonelectroactive nörotransmitter oksidasyon tarafından algılanan electroactive hidrojen peroksit (H2O2) dönüştürmek için istihdam edilmektedir Platin-iridyum (Pt-IR) elektrot. Askorbik asit (AA), aynı potansiyel okside ortak bir parazit AA oksidaz parazit nonelectroactive suya dönüştürür enzimatik katmanı ekleme yoluyla söz konusu değildir. Beyinde mevcut diğer negatif electroactive interferents pasif bir seçici membran ile bırakılır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : Bir Hamster ne dersin çiftleşme bileşenlerinin.
Hamster, çiftleşme bir müddet çiftleşme davranışları süre erkek anogenitally inceler (A), (B)bağlar ve sıra elde sırasında hareketsiz lordoz duruş dişi kalır, bir dizi oluşur (C). . Not bir sıra erkek onun üst bacaklarda bedeni doğru çeker gibi montaj davranışsal ayırt onun pelvis ileri bindirmeler ve kuyruğunu yukarıya doğru penetrasyon gösteren bukleler. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : Kafatası Cap inşaat.
Kılavuzu Kanüller, kemik vidaları ve diş akrilik bir kafatası kapağı yapımında karbon fiber veya enzimatik sonda ekleme izin için kullanılır (15 kademeli Ayrıntılar için bakınız). Bu resimde bir enzimatik sensör (implante referans elektrot) ve sensör istikrar için plastik baş bağlama için doğru NAc üzerinde bir tek kanül implant gösterilmektedir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4 : Glutamat Biyoalgılayıcı kalibrasyon.
(Enzimatik aktivite sıcaklığı ile etkilenir) her Biyoalgılayıcı için Glutamat duyarlılık test vitro deneysel kayıt Glutamat (yeşil) 37 ° C'de 10 µm eklemeler ile daha önce olduğu için. Her sensör sigara-askorbik asit (AA; kırmızı) veya dopamin (DA; mavi) yanıt olarak onaylandı. Bu kalibrasyon Glutamat konsantrasyonu değişikliklere deneysel kayıt sırasında görülen amperometric sinyal değişiklikleri dönüşüm sağlar. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5 : Tonik bir çiftleşme Bout sırasında dopamin içinde artar.
A. dersin lordoz sinyal. çiftleşme vs ne dersin lordoz sinyal premating Stylized örnek Tonik dopamin yayın ölçmek için bu bir MB sırasında dopamin düzeyleri lordoz çiftleşme dersin (MB) daha önce sırasında amperometric yanıtlarını karşılaştırıldı. Gri kutular lordoz bir MB önce gösterir. BLUE kutuları lordoz MB sırasında gösterir. B. temsilcisi miktar ortalama gerilim preMB lordoz ve MB lordoz arasında karşılaştırma bir hayvan. Hata Çubuklarõn standart hata ortalamaya (SEM) ve yıldız işareti gösterir önemli fark (p-değeri < 0,05). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 6 : Temsilcisi dopamin izleme.
Phasic dopamin intromissions için erkek dorsal NAc çekirdek zaman kilitli sürümüdür. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 7 : Temsilcisi Glutamat izleme.
Glutamat geçişler sırasında genişletilmiş bir cinsel deneyim dorsal NAc çekirdek erkek için bireysel intromissions karşılık gelir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Nispeten basit olsa da, bazı sorunlar bu tekniği istihdam ortaya çıkabilir. İlk olarak, sondalar stereotaksik yerleşimini kesin olmalıdır: sonda çevreleyen ekstraselüler ortamın daha geniş bir yarıçap örnekleri microdialysis bu teknik yalnızca doğrudan temas gelir bir nörotransmitter ölçüm verir sonda ile. İkinci olarak, kablo, küçük genişliği nedeniyle karbon fiber kayıt durumunda kırılması meydana gelebilir ve sonda kasıtlı bakımı ile eklenmesi gerekir. Sonda garantili-süre içinde 3-hafta kullanılırsa glutamatergic biyosensörler söz konusu olduğunda, enzimatik bozulması oluşabilir. Neyse ki, tüm bu sorunların adreslenebilir ve uygun bakım ve dikkat ile ortadan kaldırılabilir.
Sorunlu bir ihtar sabit potansiyel karbon fiber kayıtları özgüllük içinde ortaya çıkar. Kayıtları her iki nörotransmitter serbest bölgelerde yapılırsa dopamin için uygulanan potansiyel norepinefrin gibi diğer monoamines ile denk geliyor çünkü kimyasal özgüllüğü bu eksikliği daha sonuçları yorumu sınırlayabilir. NAc içinde bu birincil katekoiamin verici24olmak dopamin ile önemli bir sorun teşkil etmez. Kabaca NAc hücrelerde % 98'i dopaminerjik neurotransmission24için yanıt orta dikenli nöronlar olduğu için sinyal dopamin tespiti doğru önyargılı ve bu daha komple yaklaşımın kullanımını kolaylaştırmaktadır.
Böylece hem electroactive hem de nonelectroactive nörotransmiterler gibi dopamin ve Glutamat ve ölçülebilir çift-sonda kayıtları yapılabilir Bu enzimatik Biyoalgılayıcı ve sabit-potansiyel karbon fiber kayıt sistemi başka bir faydası nedir aynı anda aynı hayvan. Burada sunulan veri kayıtları ayrı hayvanlarda geldi rağmen böyle bir çift taraflı neurotransmission birden çok beyin bölgeleri veya aynı bölgede yakınsama değerlendirebilir bu teknikleri aynı anda istihdam edilebilir. Kayıtları aynı hayvan içinde kombinasyonu veya karşılaştırma kayıtları burada gösterildiği gibi hayvanlar arasında ağ bağlantıları arkasında mekanizmalar elucidating ve sinyal güçlü her iki araç vardır.
Özetle, bu kağıt enzimatik biosensing ve tek bir deneysel tertibat kullanan birden çok electroactive ve nonelectroactive nörotransmitter ölçmek için sabit potansiyel kayıt güçlü teknikleri gösteriyor. Verileri burada bireysel nörotransmitter kayıtları gelen birden çok hayvanlar arasında sunulan., bu sistem 4 sensörler bir hayvan kayıt yeteneği sağlar aynı anda15. Toplu olarak sunulan örnek sonuçlarını hızlı neurotransmission erkek çiftleşme Uyarım belirli kalıpları ortaya çıkan kadın hamster içgörü sağlamak. Ayrıca, bu deneyler bu sürüm ayrı ödüllendirici özelliklerini kodlamak için sorumlu olabileceğini düşündüren erkek, sıra için dişi NAc çekirdek dopaminerjik ve glutamatergic geçişler zaman kilitli tepkiler göstermek cinsel davranış. Amacımız ilişkisi içinde vivo dopamin ve çiftleşme uyaranların bireysel bileşenleri için temel devre ve Glutamat sürümü, daha kapsamlı bir görünümünü geliştirmek için kadın Suriye hamster çiftleşme desende kullanan devam etmektir erkeğe ait. Biz inanıyoruz bu nörotransmitter şekillerinin ayırdetmek yeteneği sadece ama aynı zamanda ödül davranış bu tür patolojik formlar için potansiyel tedavi yaklaşımları elucidating içinde bir temel bilim perspektif23, yararlı değil uyuşturucu bağımlılığı25.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Yazarlar lisans Daniel Korus onun yardım Matlab kodu çalıştırmak için ve lisans Alex Boettcher davranışsal deney çalışan onun yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu proje NSF IOS 1256799 R.L.M. için ve ulusal sağlık Enstitüleri Ödülü numarası T32DA007234 altında ilaç kötüye Ulusal Enstitüsü tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Nembutal | Oak Pharmaceuticals Inc. | 76478-501-50 | Pentobarbital sodium injection, USP. This lab uses 8.5 mg/100 g body weight, injected intraperotineally. |
| Loxicom analgesic | Norbrook Laboratories | 6451603670 | NSAID antinflammatory and analgesic used for post-operative pain control. Generic: meloxicam. |
| Enroflox antibiotic | Norbrook Laboratories | 5552915411 | Fluoroquinolone antibiotic for post-operative infection prevention. Generic: Enrofloxacin. |
| Beuthanasia-D | Merck Animal Health | 00061047305 | Pentobarbital Sodium, Phenytoin Sodium euthanasia agent. |
| Bone screws | Pinnacle Technologies, Inc. | 8111-16 | 1/8" bone screw (Pkg. of 16) used to affix skull cap to skull. |
| Dental acrylic (Bosworth Duz-All) | Bosworth | 166261C | Self curing dental acrylic is used in construction of a skull cap to affix cannula and head mount to skull. |
| Hardware biosensor setup | Pinnacle Technologies, Inc. | 8400-K2 | Pinnacle offers complete hardware kits for new users of our tethered biosensor system for rats. Kits include a commutator, preamplifier, and data conditioning and acquisition system |
| Base video computer package | Pinnacle Technologies, Inc. | 9000-K1 | The base computer package includes a preconfigured computer with ample hard disk storage, a high-definition monitor, a keyboard and mouse, an uninterruptible power supply, and all necessary cables. |
| Video EQ700 EverFocus camera package | Pinnacle Technologies, Inc. | 9000-K10 | EQ700 night vision capable box camera with independent IR source was obtained as part of Pinnacle video computer package. Dome camera (9000-K9) and HD camera (9000-K11) options are also available. |
| Sirenia Acquisition software | Pinnacle Technologies, Inc. | Free--available to download from pinnaclet.com | Sirenia Acquisition provides a single platform for recording data from any Pinnacle hardware system. The software features synchronization of all data streams, user-configurable settings, data consolidation, and multiple export options. In addition, the software includes basic review and analysis modules for biosensor recordings. Sirenia delivers free ll-in-one software that is ideal for data acquisition and review. |
| Tethered rat in vitro calibration kit | Pinnacle Technologies, Inc. | 7000-K2-T-BAS | In order to relate the current changes measured by a biosensor to actual changes in analyte concentration, it is necessary to calibrate the biosensor prior to implantation into the animal. The process also confirms the integrity and selectivity of the sensors. Calibration kit includes 20 mL jacketed beaker (#7058), 1/2" by 1/8" magnetic stir bar (#7059), right angle clamp (#7056), 2 prong single-adjustment clamp (#7055), 4-channel calibration preamplifer (#7053), and calibration holder (#7051). |
| Stir plate | Corning | 6795-410D | Corning digital Stirrer, 5" x 7", 120 VAC used to spin magnetic stirrer in jacketed beaker during in vitro calibration of glutamate biosensors. |
| Water bath capable of closed loop circulation | PolyScience | 8006A11B | PolyScience 8006A11B 6L Standard Digital Heated Circulating Bath, 120VAC water bath was used with plastic tubing to heat jacketed beaker to physiological temperature. |
| Carbon fiber sensor with BASi rat cannulae | Pinnacle Technology, Inc. | 7002-CFS | Carbon fiber electrode used for recording dopamine neurotransmission. |
| Ag/AgCl reference electrode | Pinnacle Technology, Inc. | 7065 | Necessary for carbon fiber recordings. |
| Glutamate biosensors | Pinnacle Technology, Inc. | 7001 | Enzymatic biosensor probe used for recording glutamatergic neurotransmission. |
| BASi guide cannulae | Pinnacle Technologies, Inc. | 7030 | Guide cannulae implanted into brain region of interest to guide probe. |
| BASi cannula plastic headpiece for rats | Pinnacle Technologies, Inc. | 7011 | Headmount stabilizes probe and attaches to potentiostat. |
References
- Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. Overview of brain microdialysis. Curr Protoc Neurosci. , Chapter 7, Unit 7.1.1-7.1.28 (2009).
- Chaurasia, C. S., et al. AAPS-FDA Workshop white paper: Microdialysis principles, application and regulatory perspectives. Pharm Res. 24 (5), 1014-1025 (2007).
- Lindsay, S., Kealey, D. High performance liquid chromatography. , John Wiley and Sons. New York, NY. (1987).
- Robinson, D. L., Venton, B. J., Heien, M. L., Wightman, R. M. Detecting subsecond dopamine release with fast-scan cyclic voltammetry in vivo. Clin Chem. 49 (10), 1763-1773 (2003).
- Hu, Y., Mitchell, K. M., Albahadily, F. N., Michaelis, E. K., Wilson, G. S. Direct measurement of glutamate release in the brain using a dual enzyme-based electrochemical sensor. Brain Res. 659 (1-2), 117-125 (1994).
- Agnesi, F., et al. Wireless instantaneous neurotransmitter concentration system-based amperometric detection of dopamine, adenosine, and glutamate for intraoperative neurochemical monitoring. J Neurosurg. 111 (4), 701-711 (2009).
- Erksine, M. S. Solicitation behavior in the estrous female rat: A review. Horm Beh. 23 (4), 473-502 (1989).
- Weiner, I., Gal, G., Rawlins, J. N., Feldon, J. Differential involvement of the shell and core subterritories of the nucleus accumbens in latent inhibition and amphetamine-induced activity. Behav Brain Res. 81 (1-2), 123-133 (1996).
- Heidbreder, C., Feldon, J. Amphetamine-induced neurochemical and locomotor responses are expressed differentially across the anteroposterior axis of the core and shell subterritories of the nucleus accumbens. Synapse. 29 (4), 310-322 (1998).
- Pierce, R. C., Kalivas, P. W. Amphetamine produces sensitized increases in locomotion and extracellular dopamine preferentially in the nucleus accumbens shell of rats administered repeated cocaine. J Pharmacol Exp Ther. 275 (2), 1019-1029 (1995).
- Pfaff, D. W. Drive: Molecular and physiological analyses of a simple reproductive behavior. , The M.I.T. Press. Cambridge, MA. (1999).
- Carter, C. S. Postcopulatory sexual receptivity in the female hamster: The role of the ovary and the adrenal. Horm Behav. 3 (3), 261-265 (1972).
- Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. , The National Academies Press. New York, NY. National Research Council (2011).
- Meisel, R. L., Camp, D. M., Robinson, T. B. A microdialysis study of ventral striatal dopamine during sexual behavior in female Syrian hamsters. Beh Brain Res. 55 (2), 151-157 (1993).
- 4 Channel EEG/EMG/Biosensor Manual V005. , Pinnacle Technology. (2012).
- Pellis, S. M., Pellis, V. C. Play-fighting differs from serious play fighting in both target of attack and tactics of fighting in the laboratory rats Rattus norvegicus. Aggress Behav. 13 (3), 227-242 (1987).
- Pellis, S. M., Pellis, V. C. Differential rates of attack, defense and counterattack during the developmental decrease in play fighting by male and female rats. Dev Psychobiol. 23 (3), 215-231 (1990).
- Pellis, S. M., Hastings, E., Shimizu, T., Kamitakahara, H., Komorowska, J., Forgie, M. L., Kolb, B. The effects of orbital frontal cortex damage on the modulation of defensive responses by rats in playful and non-playful social contexts. Behav Neurosci. 120 (1), 72-84 (2006).
- Wakabayashi, K. T., Kiyatkin, E. A. Rapid changes in extracellular glutamate induced by natural arousing stimuli and intravenous cocaine in the nucleus accumbens shell and core. J Neurophysiol. 108 (1), 285-299 (2012).
- Kapelsohn, K. I. Improved methods for cutting, mounting, and staining tissue for neural histology. Protoc Exch. , (2015).
- Siegel, H. I. Chapter 7: Male sexual behavior. The Hamster: Reproduction and Behavior. , Plenum Press. New York, NY. (1985).
- Day, J. J., Carelli, R. M. The nucleus accumbens and pavlovian reward learning. Neuroscientist. 13 (2), 148-159 (2007).
- Meisel, R. L., Mullins, A. J. Sexual experience in female rodents: Cellular mechanisms and functional consequences. Brain Res. 1126 (1), 56-65 (2006).
- Meredith, G. E., Pennartz, C. M., Groenewegen, H. J. The cellular framework for chemical signaling in the nucleus accumbens. Prog Brain Res. 99, 3-24 (1993).
- Hedges, V. L., Staffend, N. A. Neural mechanisms of reproduction in females as a predisposing factor for drug addiction. Front Neuroendocrinol. 31 (2), 217-231 (2010).
