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Cancer Research

एक Bioluminescent और फ्लोरोसेंट Orthotopic Syngeneic Murine मॉडल एण्ड्रोजन के आश्रित और बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर

Published: March 6, 2018 doi: 10.3791/57301
Automatic Translation
1, 1, 1, *1,3, *1,2,3
1Department of Urology, Northwestern University Feinberg School of Medicine, 2The Robert H. Lurie Comprehensive Cancer Center, Northwestern University Feinberg School of Medicine, 3Department of Pathology, Northwestern University Feinberg School of Medicine
* These authors contributed equally

Summary

इस प्रोटोकॉल के लक्ष्य को प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं के अंतर-स्थिर इंजेक्शन का प्रदर्शन है, बाद में बधिया के साथ । Orthotopic पूर्व नैदानिक मॉडल एण्ड्रोजन के आश्रित और बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर के लिए एक नैदानिक प्रासंगिक ट्यूमर microenvironment और एक असुरक्षित मेजबान के संदर्भ में रोग का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण हैं ।

Abstract

Orthotopic ट्यूमर मॉडलिंग पूर्व नैदानिक प्रोस्टेट कैंसर अनुसंधान के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है, के रूप में यह दोनों चमड़े के नीचे और ट्रांसजेनिक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल पर कई फायदे हैं । चमड़े के नीचे ट्यूमर के विपरीत, orthotopic ट्यूमर अधिक नैदानिक सटीक vasculature, ट्यूमर microenvironment, और कई उपचारों के लिए प्रतिक्रियाओं होते हैं । आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल के विपरीत, orthotopic मॉडल कम लागत के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है और कम समय में, अत्यधिक जटिल और विषम माउस या मानव कैंसर सेल लाइनों का उपयोग शामिल है, बल्कि है कि एक आनुवंशिक परिवर्तन, और इन सेल लाइनों आनुवंशिक रूप से संशोधित किया जा सकता है, जैसे एक्सप्रेस इमेजिंग एजेंटों के लिए । यहां, हम शल्य चिकित्सा के लिए एक प्रोटोकॉल वर्तमान चूहों के पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि में एक luciferase-और mCherry-व्यक्त murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन इंजेक्शन । इन चूहों orthotopic ट्यूमर है कि गैर इनवेसिव vivo में नजर रखी थी और आगे ट्यूमर की मात्रा, वजन, माउस अस्तित्व, और प्रतिरक्षा घुसपैठ के लिए विश्लेषण विकसित की है । इसके अलावा, orthotopic ट्यूमर असर चूहों शल्य चिकित्सा castrated थे, तत्काल ट्यूमर प्रतिगमन और बाद की पुनरावृत्ति, बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर का प्रतिनिधित्व करने के लिए अग्रणी । हालांकि तकनीकी कौशल के लिए इस प्रक्रिया को पूरा करने की आवश्यकता है, दोनों एण्ड्रोजन पर निर्भर है और बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर के इस syngeneic orthotopic मॉडल क्षेत्र में सभी जांचकर्ताओं के लिए महान उपयोग की है ।

Introduction

प्रोस्टेट कैंसर के लिए सबसे अधिक घटना (१६१,३६० पुरुषों) का अनुमान है और तीसरे सबसे पुरुष कैंसर की मौतों (८४,५९० पुरुषों) के कारण 20171में । निदान पर, प्रोस्टेट ट्यूमर एण्ड्रोजन पर निर्भर हैं, और शल्य चिकित्सा prostatectomy द्वारा इलाज कर रहे हैं, विकिरण चिकित्सा, और/या एण्ड्रोजन अभाव चिकित्सा (ADT), अभी तक प्रत्येक उपचार कई प्रमुख रुग्णता और जटिलताओं के साथ जुड़ा हुआ है2 , 3 , 4 , 5 , ६ , 7 , 8 , 9 , 10. ADT के बाद ट्यूमर प्रतिगमन के बावजूद, लगभग सभी ट्यूमर बधिया प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर (सीआरपीसी) के रूप में पुनरावृत्ति । इस स्तर पर, अनुमोदित चिकित्सा docetaxel, Sipuleucel-टी immunotherapy, और विरोधी एण्ड्रोजन छोटे अणुओं enzalutamide और abiraterone, अभी तक कोई व्यक्ति चिकित्सा से अधिक 5.2 महीने11के अस्तित्व के लाभ प्रदान शामिल है, 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17. इसलिए, प्रोस्टेट कैंसर के सभी चरणों में पुरुषों दोनों बेहतर उपचार के विकल्प और रुग्णताओं के प्रबंधन की जरूरत है, जिसके लिए इष्टतम पूर्व नैदानिक रोग मॉडलिंग महत्वपूर्ण है ।

सही प्रक्रिया के साथ, प्रोस्टेट कैंसर कोशिका लाइनों शल्य चिकित्सा murine प्रोस्टेट में फिर भी हो सकता है, दोनों syngeneic या xenogeneic orthotopic ट्यूमर के विकास के लिए अग्रणी । Orthotopic ट्यूमर मॉडलिंग एक नैदानिक प्रतिनिधि ट्यूमर microenvironment (टीएमई) के साथ ट्यूमर के विकास के लिए अनुमति देता है, सभी ट्यूमर जीव विज्ञान और दवा विकास अनुसंधान के लिए आदर्श है । पहले के अध्ययनों का प्रदर्शन किया है कि चमड़े के नीचे (एस॰सी॰) ट्यूमर एक बदल ट्यूमर vasculature है, अंतर के लिए अग्रणी और कम नैदानिक विरोधी angiogenic चिकित्सा के लिए सही जवाब18,19। इसके अलावा, एकाधिक अध्ययनों से मनाया गया है या एक ही सेल लाइन के इलाज में कई chemotherapeutics की कमी हुई प्रभावकारिता, पर निर्भर करता है कि यह एस॰सी॰ या orthotopically प्रशासित किया गया था, जो के बाद सबसे अच्छा प्रतिनिधित्व क्या मानव में देखा जाता है कर्क२०,२१,२२. इसके अलावा, केवल बृहदांत्र कैंसर के एक orthotopic मॉडल में है, लेकिन एस॰सी॰ मॉडल में नहीं, ट्यूमर सही degradative के लिए आवश्यक मेटास्टेसिस23प्रेरित एंजाइमों का उत्पादन किया । अंत में, के रूप में immunotherapies कैंसर थेरेपी में सबसे आगे उभरने के लिए जारी है, और विशेष रूप से के रूप में वे अभी तक प्रोस्टेट कैंसर के लिए महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करने के लिए24,25, syngeneic पूर्व-सटीक टीएमई के साथ नैदानिक मॉडल और असुरक्षित होस्ट्स में लिम्फ नोड्स draining महत्वपूर्ण हैं ।

कई कारकों ट्यूमर साइट पर आधारित इन असंगत निष्कर्षों के लिए जिंमेदार हैं । एक अलग टीएमई के साथ, कैंसर कोशिकाओं को विभिंन ऊतक विशिष्ट endothelium और बदल angiogenesis, जिससे ट्यूमर विकास को प्रभावित करने के लिए उजागर कर रहे है26,27। सही टीएमई के साथ Orthotopic ट्यूमर नैदानिक प्रासंगिक दवा वितरण, hypoxic शर्तों, और विरोधी angiogenic चिकित्सा के मूल्यांकन के लिए अनुमति देते हैं28. जबकि आनुवंशिक रूप से इंजीनियर मॉडल (रत्न) एक सटीक टीएमई होते हैं, वे प्रजनन, उच्च लागत के लिए लंबे समय की आवश्यकता है, और अक्सर एकल या कुछ जीनों की जोड़तोड़ के आधार पर बाहर खटखटाया या नैदानिक प्रासंगिक स्तरों से परे व्यक्त । इसके विपरीत, मानव या murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों orthotopic ट्यूमर में इस्तेमाल किया, मानव ट्यूमर की तरह, और अधिक आनुवंशिक रूप से दोनों एकल कोशिकाओं के भीतर और कोशिकाओं के बीच विविधता प्रदर्शित करने में29,30से अधिक जटिल हैं । इसके अलावा जवाहरात के विपरीत, orthotopic कैंसर सेल लाइनों के लिए इमेजिंग विधियों या ब्याज के अंय अणुओं की वृद्धि हुई है या कम स्तर एक्सप्रेस इंजीनियर जा सकता है, और इन विट्रो में और vivo में प्रयोगात्मक परिणाम सीधे तुलना में किया जा सकता है । Orthotopic ट्यूमर भी प्राथमिक रोगी व्युत्पंन कोशिकाओं से गठित किया जा सकता है । यहां, हम प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं है कि orthotopic एण्ड्रोजन-निर्भर ट्यूमर फार्म का अंतर-स्थिर इंजेक्शन प्रदर्शन के लिए पद्धति की रिपोर्ट, और, बधिया के बाद, orthotopic सीआरपीसी के रूप में पुनरावृत्ति ।

Protocol

इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित पशु प्रक्रियाओं के सभी नैतिक नियमों और उचित विश्वविद्यालय संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) के अनुमोदन के अनुपालन में प्रदर्शन किया जाना है ।

1. शल्य चिकित्सा सामग्री और कैंसर कोशिकाओं की तैयारी

  1. सर्जरी के दिन से पहले, आटोक्लेव सूक्ष्म विदारक कैंची, Graefe संदंश, Graefe ऊतक संदंश, सीवन कटर के साथ सुई धारक, और पर्दे के उपयुक्त संख्या । ईथीलीन ऑक्साइड गैस (फिगर 1C) द्वारा एक 50 µ एल सिरिंज और 28 गेज की सुई को निष्फल करें ।
  2. सर्जरी के दिन से पहले, संस्कृति Myc-RPMI में 10 मुख्यमंत्री व्यंजन में 10% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) और 1% पेनिसिलिन/streptomycin (पी/एस) में एक 37 डिग्री सेल्सियस 5% कं2 मशीन के साथ पूरक । bioluminescent के लिए और/या फ्लोरोसेंट ट्यूमर की निगरानी, transfect 293T कोशिकाओं के साथ उपयुक्त वैक्टर और बाद में transduce Myc-कैप कोशिकाओं के साथ 0.45 µm फ़िल्टर्ड lentivirus31. कक्षों को 100% transduction धनात्मकता के साथ स्थिर कक्ष रेखा बनाने के लिए सॉर्ट करें ।
    नोट: सभी ऊतक संस्कृति बाँझ शर्तों के तहत प्रदर्शन, और सत्यापित करें कि सभी कक्ष पंक्तियाँ माइकोप्लाज्मा-मुक्त हैं । इस अध्ययन में उपयोग murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन, Myc-कैप32, transduced के लिए छुरा दोनों जुगनू luciferase और mCherry व्यक्त है । Myc-कैप सेल लाइन एक सी-Myc-एक्सप्रेस हाय-Myc माउस से अलग आईएसएस, और इन कोशिकाओं को एक प्रवर्धित एण्ड्रोजन रिसेप्टर (एआर), जो एण्ड्रोजन-निर्भर32 और फार्म सीआरपीसी ट्यूमर है murine बधिया33के बाद होते हैं । इस अध्ययन में सभी चूहों 6-8 सप्ताह पुराने पुरुष FVB/ वैकल्पिक murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों उचित आनुवंशिक पृष्ठभूमि के चूहों के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है, साथ ही मानव प्रोस्टेट कैंसर कोशिका लाइनों या प्राथमिक रोगी immunodeficient चूहों के साथ प्रोस्टेट कैंसर की कोशिकाओं को व्युत्पंन । प्रति इंजेक्शन कक्षों की श्रेष्ठतम संख्या वैकल्पिक कक्ष रेखाओं के लिए empirically निर्धारित की जानी चाहिए । इसके अलावा, वैकल्पिक इमेजिंग विधियों ट्यूमर, चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई), पोजीट्रान उत्सर्जन टोमोग्राफी (पीईटी), या गणना टोमोग्राफी (सीटी), साथ ही mCherry के लिए एक विकल्प के रूप में GFP सहित, कल्पना करने के लिए उपयोग किया जा सकता है ।
  3. रात सर्जरी से पहले, जगह matrigel तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स और phenol लाल-4 डिग्री सेल्सियस पर बर्फ पर मुक्त करने के लिए गल ।
  4. सर्जरी के दिन, उन्हें फॉस्फेट बफर खारा (पंजाब) के साथ धोने और 0.25% trypsin-EDTA के साथ अलग से कोशिकाओं को इकट्ठा । RPMI के साथ 10% FBS और 1% पी/एस के साथ trypsin बेअसर ।
  5. 5 मिनट के लिए 400 x g पर कोशिकाओं के केंद्रापसारक ।
  6. कोशिकाओं को धोकर बिना RPMI के 10 मिलीलीटर FBS या पी/
  7. कोशिकाओं की गणना और 6.67 x10 की एकाग्रता पर पंजाब में कोशिकाओं reसस्पैंड7 कोशिकाओं/एमएल (1 × 106 कोशिकाओं/
  8. 1 × 106 कक्षों/30 µ l की अंतिम एकाग्रता में एक 1:1 पंजाबन/matrigel सेल सस्पेंशन बनाने के लिए matrigel के बराबर वॉल्यूम जोड़ें, और solidification को रोकने के लिए इंजेक्शन तक बर्फ पर कोशिकाओं रखें ।
    नोट: matrigel सेल सस्पेंशन की तैयारी के 3 एच के भीतर अंतरराज्यीय स्थिर इंजेक्शन प्रदर्शन । यदि 5 से अधिक चूहों पर अंतर-स्थिर इंजेक्शन प्रदर्शन, एक ताजा matrigel सेल निलंबन तैयार करने के लिए उपरोक्त कदम दोहराने.

2. पूर्व को-ऑपरेटिव माउस तैयारी

नोट: सर्जरी के लिए पर्याप्त अनुकूलन के लिए अनुमति देने के लिए और पशु तनाव कम से कम एक सप्ताह के लिए विश्वविद्यालय पशु सुविधा में घर चूहों । चरण 2.1-2.6 सर्जन सहायक द्वारा किया जाता है । सभी अनुवर्ती शल्य चिकित्सा कदम बाँझ तकनीक के साथ बाँझ दस्ताने और शल्य चिकित्सा उपकरणों का उपयोग सर्जन द्वारा प्रदर्शन कर रहे हैं.

  1. isoflurane के साथ चूहों Anesthetize (2-5% चैंबर के माध्यम से प्रेरण के लिए, नाक शंकु के माध्यम से रखरखाव के लिए 1-3%). पैर की अंगुली चुटकी पलटा के नुकसान से पूर्ण प्रेरण सत्यापित करें ।
  2. चूहों का वजन और प्रशासन कम से कम 0.05 मिलीग्राम/एनाल्जेसिक buprenorphine एस॰सी॰ के किलो
    नोट: माउस वजन ≥ 20 जी सफल इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन के लिए आदर्श है ।
  3. लागू नेत्र मरहम स्नेहन दोनों आंखों को corneal सुखाने को रोकने के लिए ।
  4. पेट से सभी फर दाढ़ी ।
  5. बाँझ गैर पालन पैड बाँझ शराब पोंछे के बाद का उपयोग कर सर्जिकल सफ़ाई के परिपत्र आवेदन के तीन दौर से पेट को निष्फल. पेट को सूखने दें ।
    नोट: शल्य प्रक्रिया के बाकी के लिए, केवल बाँझ दस्ताने और शल्य चिकित्सा उपकरणों निष्फल माउस पेट से संपर्क कर सकते हैं.
  6. एक साफ सर्जिकल माइक्रोस्कोप के उद्देश्य के तहत सीधे एक हीटिंग पैड पर एक साफ सतह पर माउस लापरवाह स्थानांतरण ।
  7. एक छोटा सा छेद पेट पर कटौती के साथ एक बाँझ कपड़े के साथ माउस को कवर ।

3. इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन

नोट: बाँझ शर्तों के तहत सभी शल्य चिकित्सा चरणों का पालन करें. माइक्रोस्कोप का समायोजन, माउस प्लेसमेंट, या किसी भी अन्य गैर बाँझ वस्तुओं सर्जन सहायक द्वारा किया जाना चाहिए.

  1. लिंग और preputial ग्रंथियों (चित्रा 1 डी) के लिए बेहतर पेट के midline साथ बाहरी त्वचा के एक लगभग 1 सेमी चीरा प्रदर्शन.
  2. बाहरी उदर त्वचा और भीतरी उदर पेशियां परतों के बीच कैंची खोल कर के बीच संयोजी ऊतक अलग ।
  3. आंतों या मूत्राशय (चित्रा 1 d) puncturing से बचने के लिए पेशियां बढ़ाने के लिए संदंश का उपयोग करते हुए भीतरी उदर पेशियां का एक समान चीरा प्रदर्शन करते हैं ।
  4. द्विपक्षीय लाभदायक बुलबुले (चित्र 1a, सफेद)/anterior प्रोस्टेट पालियों (आंकड़ा 1a, काला), जो अक्सर पीछे हैं, पार्श्व, और थोड़ा मूत्राशय (आंकड़ा 1a, पीला) करने के लिए बेहतर में से एक का पता लगाएं, लेकिन यह चूहों के बीच भिन्न हो सकते हैं . पूर्वकाल प्रोस्टेट पालियों पारदर्शी और सफेद लाभदायक बुलबुले के कम वक्रता से जुड़ी हैं ।
  5. धीरे लाभदायक पुटिका की नोक Graefe ऊतक संदंश का उपयोग करने के लिए लाभदायक पुटिका (चित्रा 1E) puncturing बिना ऊतक पर तनाव पैदा बढ़ा ।
  6. अंयजातियों pipetting द्वारा Myc कैप matrigel समाधान मिश्रण (सर्जन सहायक द्वारा प्रदर्शन), के रूप में कोशिकाओं को गोली मारके हो सकता है, और धीरे से हवा के बुलबुले से बचने के लिए सुई में 30 महाप्राण एल (µ6 कोशिकाओं) 1x10.
  7. ध्यान से पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि की लंबी धुरी के समानांतर सुई के बेवल डालें । धीरे से पालि में 30 µ एल इंजेक्षन और धीरे से रिसाव को रोकने के लिए सुई वापस लेना (चित्रा 1F) । पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि (चित्रा 1G) के engorgement द्वारा पर्याप्त इंजेक्शन सत्यापित करें ।
  8. ध्यान से लाभदायक पुटिका पकड़ और लगभग 30 एस के लिए माउस के बाहर प्रोस्टेट पालि इंजेक्शन के लिए matrigel को आंशिक रूप से पालि के भीतर जमना अनुमति देते हैं । इस समय के दौरान, एक बाँझ पॉलिएस्टर का उपयोग कर पेट में किसी भी सेल समाधान रिसाव को इकट्ठा applicator गैर orthotopic ट्यूमर विकास को रोकने के लिए इत्तला दे दी, इंजेक्शन प्रोस्टेट पालि पर दबाने के बिना.
  9. ध्यान पालि पर दबाव डालने के बिना लाभदायक पुटिका और पेट में इंजेक्शन प्रोस्टेट पालि वापस । किसी भी बाह्य ऊतकों की जगह ।
  10. 5-0 vicryl अवशोषित रिवर्स काटने सुई टांके के साथ भीतरी उदर पेशियां बंद करने के लिए सतत टांके प्रदर्शन ।
  11. 4-0 नायलॉन monofilament गैर अवशोषित रिवर्स काटने सुई टांके के साथ बाहरी पेट की त्वचा को बंद करने के लिए बाधित टांके प्रदर्शन ।
    नोट: नसबंदी किए गए 9 एमएम स्टेपल्स का इस्तेमाल बाहरी उदर की त्वचा को बंद करने के लिए भी किया जा सकता है । हालांकि, टांके के विपरीत, वे किसी भी बाद bioluminescent और फ्लोरोसेंट ट्यूमर इमेजिंग संकेत के साथ हस्तक्षेप ।
  12. साफ बाँझ इथेनॉल पोंछे के साथ सभी उपकरण (सर्जन सहायक द्वारा खोला) और उन्हें एक गिलास मनका नसबंदी में 30 एस के लिए जगह है. अगले माउस पर उपयोग करने से पहले उपकरण शुष्क करने की अनुमति दें ।
  13. फ्लश में सिरिंज और सुई बाँझ खारा (सर्जन सहायक द्वारा खोला) कॉलेस्ट्रॉल को रोकने के लिए अवशेष matrigel.
    नोट: एक सर्जन सहायक सभी आपरेशनों के लिए उपस्थित होना चाहिए, सभी गैर बाँझ पूर्व ऑपरेटिव माउस की तैयारी और पोस्ट ऑपरेटिव माउस देखभाल, साथ ही इंजेक्शन से पहले Myc टोपी matrigel समाधान मिश्रण करने के लिए प्रदर्शन. समय को कम करने के लिए, प्रत्येक अंतर के रूप में स्थिर माउस प्रक्रिया 20-30 मिनट की आवश्यकता होगी, सर्जन सहायक के रूप में सर्जन मौजूदा माउस suturing है अगले माउस की तैयारी शुरू कर सकते हैं ।

4. पोस्ट को-ऑपरेटिव माउस केयर

  1. प्रशासन के 1 मिलीग्राम/एनाल्जेसिक meloxicam एस॰सी॰ तुरंत, 24 एच, और सर्जरी के बाद 48 एच के ।
  2. कोई बिस्तर के साथ एक पिंजरे में ठीक करने के लिए चूहों की अनुमति दें आधे रास्ते एक हीटिंग पैड पर रखा । जब तक वे सामांय गतिशीलता और गतिविधि, जो उंहें पिंजरे की फर्श पर भोजन के साथ एक साफ पिंजरे में जगह पाने के बाद सर्जरी के बाद कम से कम 30 मिनट के लिए चूहों पर नजर रखें ।
  3. इसके अलावा उचित घाव भरने के लिए दैनिक चूहों की निगरानी, शरीर के वजन, सौंदर्य, और सर्जरी के बाद ambulation । लड़ने के किसी भी सबूत पर व्यक्तिगत पिंजरों में चूहों अलग.
  4. सर्जरी के बाद 14 दिनों के भीतर किसी भी शेष टांके निकालें ।

5. Bioluminescent ट्यूमर इमेजिंग

  1. तैयार बाँझ-फ़िल्टर्ड ना+ या K+ D-luciferin, निर्माता द्वारा वर्णित के रूप में और प्रकाश से सुरक्षित.
  2. luciferin के शरीर के वजन के 10 µ l/जी के साथ चूहों इंट्रा peritoneally सुई.
  3. 10 मिनट बाद में, एक IVIS स्पेक्ट्रम इमेजिंग प्रणाली के साथ छवि चूहों, के रूप में पहले से वर्णित34,35।
  4. छवि सॉफ्टवेयर रहने का उपयोग कर छवियों का विश्लेषण, जैसा कि पहले34,35वर्णित है ।
    नोट: IVIS इमेजिंग विश्लेषण प्रायोगिक समूहों के बीच ट्यूमर बोझ को सामान्य करने के लिए सफल अंतर-स्थिर इंजेक्शन और प्रारंभिक ट्यूमर के विकास का निर्धारण करने के लिए उपयोगी है । हालांकि, bioluminescent या फ्लोरोसेंट संकेत की तीव्रता पर निर्भर करता है, संतृप्ति वास्तविक ट्यूमर आकार में वृद्धि के बावजूद छवि ठहराव में एक पठार का कारण हो सकता है । इसलिए, ट्यूमर विकास के बाद के चरणों में, IVIS इमेजिंग छवि संतृप्ति के बाद आकार में वृद्धि के बजाय सफल उपचार पर ट्यूमर के आकार में कम हो जाती है निर्धारित करने के लिए और अधिक उपयोगी हो सकता है ।

6. ट्यूमर संग्रह, ट्यूमर विश्लेषण, अस्तित्व समापन बिंदु

  1. यदि विश्लेषण के लिए ट्यूमर का संग्रह, humanely euthanize चूहों द्वारा सह2 एक्सपोजर और माध्यमिक ग्रीवा विस्थापन, या वैकल्पिक IACUC अनुमोदित विधियों द्वारा, और पेट से काटना ट्यूमर । ट्यूमर प्रोस्टेट पर orthotopically स्थित होना चाहिए ।
    नोट: पूर्वकाल पेट की दीवार से जुड़ी ट्यूमर या पेट भर में बीज गरीब या टपका हुआ इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन का संकेत है, और orthotopic ट्यूमर नहीं माना जाना चाहिए ।
  2. ट्यूमर वजन ।
  3. π/6 × l × w × h के रूप में ट्यूमर की मात्रा की गणना (एल = ट्यूमर की सबसे लंबी धुरी की लंबाई, डब्ल्यू = सीधा चौड़ाई, H = सीधा ऊंचाई) ।
  4. ट्यूमर प्रोटोकॉल द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है (10% तटस्थ buffered formalin में फिक्स), cytometry प्रवाह (सिंगल सेल सस्पेंशन बनाने), प्रोटीन (RIPA बफर में ऊतक lysate तैयार), या आरएनए (तुरंत RNAlater में ऊतक जगह) ।
  5. प्रतिरक्षा विश्लेषण के लिए भी प्रोस्टेट ट्यूमर-draining पैरा-महाधमनी लिम्फ नोड्स (आंकड़ा 1b, नारंगी) और तिल्ली इकट्ठा ।
    नोट: यदि अस्तित्व के लिए चूहों का पालन, इस मॉडल का समापन बिंदु रक्तस्रावी उदर जलोदर के रूप में परिभाषित किया गया है36 और/ambulation, ग्रूमिंग, and/या piloerection37. अस्तित्व विश्लेषण के लिए चूहों पूर्व और बाद ऑपरेटिव analgesia (प्रोटोकॉल कदम 2.2, 4.1) प्राप्त करते हैं और नियमित रूप से निगरानी की जानी चाहिए. चूहों व्यक्तिगत पिंजरों में अलग किया जाना चाहिए अगर किसी भी लड़ होती है, और इसके बाद के संस्करण समापन बिंदु readouts में से किसी की उपस्थिति पर humanely euthanized होना चाहिए ।

7. मॉडल सीआरपीसी के लिए सर्जिकल बधिया

  1. सीआरपीसी मॉडल करने के लिए, उपर्युक्त इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन प्रोटोकॉल (प्रोटोकॉल चरण 1-5) निष्पादित करें ।
  2. एक सप्ताह के बाद, ट्यूमर के विकास के बाद, दाग़ना के माध्यम से शल्य बधिया प्रदर्शन, के रूप में पहले38वर्णित है ।
  3. bioluminescent इमेजिंग द्वारा ट्यूमर प्रतिगमन और पुनरावृत्ति की निगरानी । बधिया के बाद, ट्यूमर प्रतिगमन 3 दिनों के भीतर हो जाएगा और ट्यूमर पुनरावृत्ति लगभग 30 दिनों के भीतर हो जाएगा, सीआरपीसी का प्रतिनिधित्व ।

Representative Results

इस पांडुलिपि में, हम शल्य चिकित्सा murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन, Myc-कैप, पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि (आंकड़ा 1a) में, एक नैदानिक प्रासंगिक टीएमई और सही के साथ orthotopic प्रोस्टेट ट्यूमर के विकास के लिए अग्रणी इंजेक्शन प्रोस्टेट-draining लिम्फ नोड्स (चित्र 1b) । इस सूक्ष्म विदारक कैंची, Graefe संदंश, Graefe ऊतक संदंश, टांका कटर के साथ एक सुई धारक का उपयोग किया गया था, और एक 50 µ एल एक 28 गेज सुई (चित्रा 1C) के साथ सिरिंज । preputial ग्रंथियों (चित्र 1 d) के ऊपर लगभग 1 सेमी midline उदर चीरा प्रदर्शन करने के बाद, एक लाभदायक पुटिका और संलग्न पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि स्थित थे और बाह्य (चित्रा 1E) और 30 µ l (1x106 कोशिकाओं) के एक 1:1 पंजाबन/matrigel सेल निलंबन प्रोस्टेट (चित्रा 1F) में इंजेक्ट किया गया था, के रूप में शुरू में पालि के engorgement द्वारा सत्यापित और रिसाव की कमी (चित्रा 1G) ।

orthotopic ट्यूमर के विकास की निगरानी करने के लिए, हम छुरा transfected Myc-कैप कोशिकाओं दोनों जुगनू luciferase और mCherry व्यक्त करने के लिए, ट्यूमर के लिए अनुमति देने के लिए गैर इनवेसिव vivo में bioluminescence (चित्रा 2a) और प्रतिदीप्ति (चित्रा बी), क्रमशः । इस इमेजिंग की एक सीमा है कि, संकेत की शक्ति के आधार पर, इमेजिंग ठहराव जबकि ट्यूमर आकार में वृद्धि जारी है संतृप्त कर सकते हैं । इसलिए, उच्च संकेत तीव्रता के साथ, इस vivo में इमेजिंग प्रयोगात्मक समूहों में ट्यूमर के बोझ को सामान्य करने के लिए अधिक उपयोगी है और बाद में निर्धारित करने के लिए प्रयोगात्मक उपचार के बाद ट्यूमर के आकार में कम हो जाती है. अतिरिक्त इमेजिंग मोडलों का उपयोग भी किया जा सकता है, जैसे छोटे जानवर एमआरआई, पीईटी, या सीटी ।

Orthotopic ट्यूमर 30 दिन पर पेट से अंतर के बाद स्थिर इंजेक्शन (चित्रा 3) विच्छेदित किया गया । Orthotopic ट्यूमर पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि के स्थल पर स्थित होना चाहिए । पेट भर में ट्यूमर जनता या पूर्वकाल पेट की दीवार से जुड़ी अनुचित इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन और रिसाव का संकेत है । उचित तकनीक के साथ, ट्यूमर की मात्रा (चित्र 3 बी) और वजन (चित्रासी) अपेक्षाकृत छोटे मानक त्रुटि के साथ दर्ज किया जा सकता है । हालांकि, के रूप में मनाया, वहां छोटे और बड़े ट्यूमर जनता के साथ कुछ परिवर्तनशीलता होगा । इसलिए, पूर्व उपचार इमेजिंग ठहराव के प्रारंभिक उपयोग प्रयोगात्मक हथियारों के बीच बराबर ट्यूमर बोझ के लिए सभी प्रयोगों के लिए महत्वपूर्ण है । इसके अलावा, के रूप में इन murine कैंसर की कोशिकाओं को असुरक्षित FVB में इंजेक्शन थे/एनजे चूहों, टीएमई immunohistochemistry (आइएचसी) द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है (या प्रवाह cytometry या अंय तकनीकों) CD3 टी कोशिकाओं के लिए (चित्र 3d) (या अंय प्रतिरक्षा कोशिका प्रकार) । अंत में, यह मॉडल एक उद्देश्य अस्तित्व समापन बिंदु प्रदान करता है, के रूप में बड़े प्राथमिक ट्यूमर द्रव्यमान का कारण बनता है रक्तस्रावी उदर जलोदर36 (चित्रा 3E) और/या कम ambulation, सौंदर्य, और/ कभी कभार, मौत भी ट्यूमर के विकास अवरुद्ध मूत्र उत्पादन की वजह से हो सकता है ।

अंत में, इस मॉडल दोनों एण्ड्रोजन पर निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी, जो की उत्तरार्द्ध गरीब रोग का निदान प्रदान करने के लिए और उपंयास उपचार के विकल्प की जरूरत है अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है । orthotopic ट्यूमर के विकास के बाद, चूहों शल्य चिकित्सा castrated थे, के रूप में पहले से वर्णित38। के रूप में यह दूसरा प्रमुख अस्तित्व सर्जरी है, अतिरिक्त देखभाल के लिए वसूली और किसी भी प्रतिकूल घटनाओं या जटिलताओं के लिए निगरानी दिया जाना चाहिए । बधिया के बाद 3 दिनों के भीतर, मजबूत ट्यूमर प्रतिगमन, लगभग 30 दिनों के बाद बाद में ट्यूमर पुनरावृत्ति के बाद सीआरपीसी (चित्रा 4a) का प्रतिनिधित्व करते हुए मनाया गया था । सीआरपीसी ट्यूमर विच्छेदन और विश्लेषण histologically किया जा सकता है, और किसी भी neuroendocrine भेदभाव प्रदर्शित नहीं करते हैं, के रूप में वे उच्च एआर स्तर को बनाए रखने और neuroendocrine मार्कर के लिए नकारात्मक हैं, synaptophysin (चित्रा 4B) ।

Figure 1
चित्रा 1: पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि, लिम्फ नोड्स draining, और अंतर-स्थिर सेल इंजेक्शन के लिए प्रतिनिधि तकनीक । (क) सही पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि (काले, की छवियां *), सही लाभदायक पुटिका संलग्न (सफेद), सही अंडकोष और वसा पैड (हरा), और मूत्राशय (पीला), (ख) द्विपक्षीय प्रोस्टेट-नाली पैरा-महाधमनी लिम्फ नोड्स (नारंगी), (ग) सूक्ष्म विदारक कैंची, Graefe संदंश, Graefe ऊतक संदंश, टांका कटर के साथ एक सुई धारक, और 50 µ एल 28 गेज सुई के साथ सिरिंज (सही करने के लिए छोड़ दिया), (घ) midline चीरा, (ई) लाभदायक पुटिका और पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि externalization, (च), अंतर-स्थिर इंजेक्शन, और (छ) पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि के engorgement । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: vivo में bioluminescent और फ्लोरोसेंट ट्यूमर इमेजिंग. (क) Luciferase-और (ख) mCherry-व्यक्त orthotopic Myc-कैप ट्यूमर एक IVIS स्पेक्ट्रम इमेजिंग प्रणाली का उपयोग कर imaged थे । Bioluminescence कुल प्रवाह (फोटॉनों s) द्वारा quantified था । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: ट्यूमर की मात्रा, वजन, प्रतिरक्षा घुसपैठ के लिए प्रोटोकॉल द्वारा Orthotopic ट्यूमर विश्लेषण, और अस्तित्व । Orthotopic ट्यूमर 30 दिन पर विच्छेदित-स्थिर इंजेक्शन के बाद किया गया था और द्वारा विश्लेषण (क) सकल इमेजिंग, (ख) ट्यूमर की मात्रा (π/6 × L × W × H; एल = ट्यूमर की सबसे लंबी धुरी की लंबाई, डब्ल्यू = सीधा चौड़ाई, ज = सीधा ऊंचाई), (ग) ट्यूमर वजन, (घ) CD3 आइएचसी (स्केल बार = 100 µm), और (ई) अस्तित्व, रक्तस्रावी उदर की उपस्थिति के रूप में उद्देश्य समापन बिंदु के साथ जलोदर. (A-B) माध्य का अर्थ ± मानक त्रुटि के रूप में प्रस्तुत डेटा । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: दोनों एण्ड्रोजन-निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी मॉडल करने के लिए बाद में शल्य बधिया के साथ अंतर-स्थिर इंजेक्शन. (क) चूहों असर orthotopic luciferase-व्यक्त ट्यूमर bioluminescence पूर्व और पोस्ट बधिया (Cx) द्वारा imaged थे, और (ख) recurred सीआरपीसी ट्यूमर विच्छेदित थे (काले = orthotopic प्रोस्टेट ट्यूमर; पीला = मूत्राशय) और द्वारा विश्लेषण एच एंड E, AR आइएचसी, और synaptophysin आइएचसी (धनात्मक murine नियंत्रण के साथ) (स्केल बार = 50 µm) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Discussion

इस पांडुलिपि में हम सर्जिकल इंट्रा-स्थिर कैंसर सेल इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए प्रोटोकॉल रूपरेखा । हम एण्ड्रोजन पर निर्भर है और MYC-एक्सप्रेस (MYC एक्सप्रेस का उपयोग 80-90% मानव प्रोस्टेट कैंसर के39) murine प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन, MYC-कैप, मूल रूप से उच्च MYC माउस से अलग32 को देखा है ,33. इस सेल लाइन छुरा transduced था दोनों luciferase और mCherry व्यक्त करने के लिए, गैर के लिए vivo bioluminescent और फ्लोरोसेंट ट्यूमर इमेजिंग, में इनवेसिव क्रमशः । इसके अलावा, शल्य बधिया भी एण्ड्रोजन पर निर्भर ट्यूमर विकास के बाद किया गया था, ट्यूमर प्रतिगमन और बाद की पुनरावृत्ति के लिए अग्रणी. इसलिए, हम एक असुरक्षित मेजबान में दोनों orthotopic एण्ड्रोजन-निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी मॉडल के लिए विवरण प्रदान करते हैं ।

Myc-कैप कोशिकाओं चूहों के पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि में इंजेक्शन थे । माउस प्रोस्टेट पूर्वकाल, ventral, और dorsolateral प्रोस्टेट पालियों के होते हैं, और मानव प्रोस्टेट एक परिधीय क्षेत्र के होते हैं, संक्रमणकालीन क्षेत्र, और एक एकल पालि के भीतर केंद्रीय क्षेत्र40. जबकि पहले अध्ययन है anatomically और histologically मानव परिधीय क्षेत्र के लिए dorsolateral माउस पालि की तुलना में, प्रोस्टेट कैंसर के बहुमत की साइट41, और मानव केंद्रीय क्षेत्र के लिए पूर्वकाल माउस पालि42, 43, और अधिक हाल ही में व्यापक विश्लेषण का प्रदर्शन किया है कि पूर्वकाल पालि और dorsolateral पालि बारीकी से संबंधित जीन अभिव्यक्ति पैटर्न प्रदर्शन, के रूप में ventral पालि की तुलना में । 44 इसके अलावा, प्रोस्टेट कैंसर के विकास के40जवाहरात के पूर्वकाल पालि में मनाया गया है, और, अंतर-स्थिर प्रक्रिया के लिए, पूर्वकाल पालि कैंसर कोशिका समाधान की आवश्यक मात्रा के इंजेक्शन के लिए न्यूनतम रिसाव के साथ अनुमति देता है और परिवर्तनशीलता ।

एस॰सी॰ और ट्रांसजेनिक मणि कैंसर मॉडल का प्रयोग कई खामियों और सीमाएं हैं । एस॰सी॰ एक कृत्रिम टीएमई में उगाया ट्यूमर chemotherapies के लिए अंतर प्रतिक्रियाओं, एक ही सेल लाइनों और मानव रोग से दोनों orthotopic ट्यूमर के विपरीत है20,21,22। यह एस॰सी॰ ट्यूमर की बदल vasculature के कारण हो सकता है, के रूप में उदाहरण विरोधी angiogenic थेरेपी के लिए उनके अंतर प्रतिक्रिया द्वारा18,19। इसके विपरीत, orthotopic ट्यूमर एक उचित टीएमई के साथ विकसित, लिम्फ नोड्स draining, और vasculature, और murine सेल लाइनों के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है, जिससे भी ट्यूमर इम्यूनोलॉजी और immunotherapies के लिए प्रतिक्रिया के विश्लेषण के लिए अनुमति देता है ।

ट्रांसजेनिक जवाहरात एक असुरक्षित मेजबान में एक उचित टीएमई के साथ ट्यूमर का विकास, अभी तक इन मॉडलों को आम तौर पर एकल या कुछ आनुवंशिक परिवर्तन के साथ ट्यूमर के विकास के द्वारा मानव कैंसर को सरल29। Myc के एक विश्लेषण-कैप और अंय प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों से पता चला कि वे उच्च Myc चूहों और अंय जवाहरात से जो वे29प्राप्त थे से ट्यूमर की तुलना में बहुत अधिक दैहिक प्रतिलिपि संख्या परिवर्तन और गुणसूत्र परिवर्तन निहित । इसके अलावा, जवाहरात वृद्धि की लागत और चूहों प्रजनन के लिए आवश्यक समय पर्याप्त शक्ति के प्रयोगों प्रदर्शन द्वारा सीमित हैं । Orthotopic ट्यूमर मॉडलिंग इन सीमाओं को दूर कर सकते हैं । मानव और murine प्रोस्टेट कैंसर कोशिका लाइनों कई आनुवंशिक मानव रोग के लिए प्रासंगिक परिवर्तन होते हैं29, और, मानव कैंसर की तरह, भी व्यक्तिगत कोशिकाओं के बीच महान विविधता दिखाने के30. Orthotopic murine syngeneic ट्यूमर प्रतिरक्षा विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं, जबकि Orthotopic मानव xenogeneic ट्यूमर मानव कोशिकाओं पर चिकित्सकीय के विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं । अंत में, जवाहरात के साथ विपरीत, सेल लाइनों इंजेक्शन से पहले संशोधित किया जा सकता है, bioluminescent या फ्लोरोसेंट इमेजिंग अणुओं की अभिव्यक्ति के लिए ट्यूमर के विकास की निगरानी की अनुमति, प्रयोगात्मक समूहों के बीच ट्यूमर बोझ को सामान्य, उपचार के लिए प्रतिक्रिया की निगरानी, और सर्जिकल बधिया के बाद ट्यूमर प्रतिगमन और सीआरपीसी पुनरावृत्ति का पालन करें ।

इस प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदम का पता लगाने और externalizing लाभदायक पुटिका और अंय ऊतकों को नुकसान पहुंचाने या प्राथमिक पुटिका puncturing के बिना पूर्वकाल प्रोस्टेट पालि संलग्न, सेल के 30 µ एल के एक सफल इंट्रा-स्थिर इंजेक्शन प्रदर्शन शामिल रिसाव के बिना निलंबन, और ठीक से पेट भर गैर orthotopic ट्यूमर विकास को रोकने के लिए किसी भी रिसाव का संग्रह. अंतर-स्थिर इंजेक्शन की प्रमुख सीमा के लिए चूहों के बीच ट्यूमर परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए आवश्यक तकनीकी कौशल प्राप्त कर रहा है । यह खास तौर पर मॉडलिंग सीआरपीसी के लिए महत्वपूर्ण है, जिसमें सर्जिकल बधिया का जोड़ा चर है । अंतर-स्थिर इंजेक्शन और castrated चूहों भी बारीकी से वसूली और प्रतिकूल घटनाओं के लिए पीछा किया जाना चाहिए, के रूप में वे दो प्रमुख अस्तित्व सर्जरी आया है । एक और सीमा के प्रत्येक अंतरराज्यीय स्थिर इंजेक्शन के समय है । यह 20 मिनट के रूप में कम करने के लिए कम किया जा सकता है, और सर्जन सहायक वर्तमान माउस टांका जा रहा है के रूप में अगले माउस तैयार कर सकते हैं । अंत में, orthotopic Myc-कैप ट्यूमर आक्रामक हैं, तेजी से बढ़ ट्यूमर है कि लगभग 46 दिनों में अस्तित्व समापन बिंदु तक पहुंचने (और के रूप में 35 दिनों के रूप में जल्दी) प्राथमिक ट्यूमर द्रव्यमान के कारण । धीमी ट्यूमर के विकास या दीर्घकालिक उपचार की आवश्यकता के अध्ययन प्रारंभिक इंजेक्शन सेल गिनती और उपचार आहार के लिए empirically अनुकूलित किया जाना चाहिए । एस॰सी॰ ट्यूमर और जवाहरात की सीमाओं के विपरीत, orthotopic ट्यूमर मॉडल के ऊपर सीमाओं के सभी दूर किया जा सकता है, और प्रोटोकॉल के अतिरिक्त संशोधनों व्यक्तिगत प्रायोगिक जरूरतों के आधार पर किया जा सकता है ।

orthotopic ट्यूमर मॉडल के रूप में इन विट्रो-संभाला कोशिकाओं का उपयोग शामिल है, इन कोशिकाओं को अध्ययन की जरूरतों के आधार पर संशोधित किया जा सकता है । यहाँ, हम इन कोशिकाओं को छुरा व्यक्त करने के लिए संशोधित luciferase और mCherry के लिए vivo ट्यूमर निगरानी में . हम भी ट्यूमर शमनकर्ता PTENके एक CRISPR-Cas9 नॉकआउट प्रदर्शन किया है, एक और अधिक आक्रामक, नैदानिक प्रासंगिक सेल लाइन है कि orthotopic ट्यूमर (समीक्षा में पांडुलिपि) के रूप में तेजी से बढ़ता उत्पंन करने के लिए । orthotopic ट्यूमर मॉडल के लाभ के साथ, दोनों एण्ड्रोजन पर निर्भर प्रोस्टेट कैंसर और सीआरपीसी का अध्ययन करने की क्षमता, और इमेजिंग मोडल या पछाड़ना या एक्सप्रेस का चयन जीन एक्सप्रेस करने की क्षमता, इस प्रोटोकॉल सभी के लिए एक मूल्यवान संसाधन के रूप में कार्य करता है प्रोस्टेट कैंसर अनुसंधान ।

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस कार्य के लिए राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान के संस्थानों द्वारा प्रवीण Thumbikat (NIDDK R01 DK094898), सरकी Abdulkadir (NCI R01 CA167966, NCI R01 CA123484, NCI P50 CA180995), और जोनाथन Anker (NCI F30 CA203472) को समर्थन दिया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Myc-CaP cell line ATCC CRL-3255 Verify as mycoplasma-free before use
Micro-dissecting scissors Roboz RS-5910
Graege forceps Roboz RS-5135
Graefe tissue forceps Roboz RS-5150
Olsen-Hegar needle holder with suture cutters FST 12002-12
50 µL Syringe 705 RN SYR Hamilton 7637-01 Sterilize by ethylene oxide gas
28-gauge Needles Small Hub RN Hamilton 7803-02 Point style 4, Angle 45°, Length 0.75 in. Sterilized by ethylene oxide gas
RPMI Gibco 18875-093
FBS Gibco 10437-028
Pencillin/Streptomycin Gibco 15140-122
PBS Gibco 14190-144
0.25% trypsin-EDTA Gibco 25200-056
Matrigel basement membrane matrix, phenol red-free, LDEV-free Corning 356237 Thaw on ice in 4°C overnight before use
Isoflurane Henry Schein 11695-0500-2 Acquired from Northwestern University Center for Comparative Medicine (CCM)
26 5/8-gauge syringe BD 309597 For meloxicam and buprenorphine injections
Buprenorphine hyrochloride 0.3 mg/mL 12496-0757-5 Controlled substance, acquired from Northwestern University CCM
Ophthalmic ointment lubrication Akron 17478-162-35
Betadine surgical scrub (povidone-iodine, 7.5%) Purdue Products 67618-151-16
Sterile non-adhering pads Moore Medical 10775
Sterile alcohol wipes Fisher Scientific 22-363-750
Surgical microscope Stemi DV4 Zeiss
Sterile polyester tipped applicators Puritan 25-806 1PD
5-0 vicryl absorbable reverse cutting needle sutures eSutures J493G
4-0 nylon monfilament non-absorbable reverse cutting needle sutures eSutures 699H
Glass bead sterilizer Fine Science Tools 18000-45
Sterile saline 0.9% sodium chloride Hospira 0409-4888-02
Meloxicam (Eloxiject) 5 mg/mL Henry Schein 11695-6925-1 Acquired from Northwestern University CCM
D-luciferin Firefly, sodium salt monohydrate Goldbio LUCNA
IVIS Spectrum Imaging System PerkinElmer
Cauery surgical pen Bovie Medical Corporation AA01
CD3ε antibody (clone 2GV6) Ventana 790-4341
Caliper Fisher Scientific 14-648-17
Androgen receptor antibody Thermo Scientific RB-9030-P1 1:500 staining dilution
Synaptophysin antibody (clone Z66) Life Technologies 18-0130 1:200 staining dilution

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कैंसर अनुसंधान अंक 133 प्रोस्टेट कैंसर syngeneic माउस मॉडल orthotopic प्रोस्टेट ट्यूमर अंतर स्थिर इंजेक्शन शल्य बधिया शल्य चिकित्सा एण्ड्रोजन-निर्भर प्रोस्टेट कैंसर बधिया-प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर मूत्रविज्ञान चिकित्सा ट्यूमर microenvironment vivo इमेजिंग में
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Anker, J. F., Mok, H., Naseem, A. F., Thumbikat, P., Abdulkadir, S. A. A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer. J. Vis. Exp. (133), e57301, doi:10.3791/57301 (2018).

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