Summary
여기, 우리는 vivo에서 암 모델 셀 시트 기술을 사용 하 여 개발 하는 프로토콜을 제시. 이러한 모델은 항 암 치료제의 평가 위한 매우 유용할 수 있었다.
Abstract
vivo 동물 모델을 모방한 인간의 암 중요 한 임상 정보를 제공 하는 다양 한 응용 프로그램을 가질 수 있습니다. Vivo에서 암 모델의 개발에 대 한 현재 사용 된 기술에는 상당한 제한이. 따라서, 본이 연구에서는 우리 셀 시트 기술을 vivo에서 암 모델 개발을 구현 하고자 합니다. 간세포 암 (HCC) 누드 쥐 HCC 셀 선 세포에서 만들어진 셀 시트를 사용 하 여 성공적으로 개발 됩니다. 암 셀 시트는 세포내 접착 및 세포 외 매트릭스 제어 층 상된 구조 형성을 통해 생성 됩니다. HCC 시트 이식 간 고 한 달 내 종양-베어링 동물 모델의 생성에 대 한 수 있습니다. 또한,이 암 모델 개발에서 중간 엽 줄기 세포 (MSC)의 역할은 조사. HCC 셀 라인 시트 외에 다른 두 셀 시트 만들어집니다: HCC 세포와 골 MSCs (BMMSCs)와 HCC 전지와 탯 MSCs (UCMSCs)의 시트의 시트. HCC 세포와 MSCs의 시트는 종양 방위 동물을 생산 할 수 있습니다. 그러나, MSCs의 추가 구성 된 종양의 크기 줄이고 종양 개발에 불리 한 영향이 사용된 MSCs의 소스에 따라 달라 집니다. 이 특정 MSC의 만든 셀 시트 종양 관리 및 제어에 활용 될 수 나타냅니다.
Introduction
HCC는 간 크게 빈약한 예 지와 관련 된 기본 암입니다. 매년, 거의 절반 백만 새로운 환자 진단 HCC, 간 암 환자 세계1의 85%를 대표 하는. Hepatocarcinogenesis는 단일 형태의 질병; 오히려, 그것은 이외에 다른 histopathological 기능 및 유전자와 게놈 다양성, 질병의 모음 다양 한 전조 결과1. 따라서, HCC에 대 한 효과적인 치료 전략의 개발의 주요 과제는 HCC 생물학의 제한 된 지식과이 복잡 한 질병을 이해 하는 것을 도울 수 있는 적합 한 실험 동물 모델의 부족. Vivo에서 동물성 모형 인간 암 모방 하는 후보 유전자를 선택 하 고 연루 조사 암 응답에 영향을 미칠 수 있는 다른 요인 뿐만 아니라 암 유도, 전조/예측 마커 식별에 필요한 치료 요원입니다.
시험관에 암 연구는 여전히 주요 한계에 연관 된다. 이 사실은 암 세포 기능의 그들의 비보에 문화에서 유지 될 때 많은 손실입니다. 세포 생체 외에서 결과 비보 전 설정에서 전체 조직 생리학의 부재에서 발생 하는 변경 합니다. 암 세포 세포 상호 작용 (실질, 면역, 맥 관 구조, 상피, 등) 종양 microenvironment 내 암 세포 특성2에 크게 반영합니다. 종양 microenvironment 암 세포 유전자/단백질 표정 및 angiogenetic 및 전이성 잠재력 phenotypic 특성을 변경할 수 있습니다. 2 차원 (2 차원) 생체 외에서 문화 시스템은 또한 종양의 진행을 조절 하는 데 필요한 적합 한 조직 매트릭스를 결여 된다. 따라서, 이러한 제한으로 인해 모델 vivo에서 항상 체 외에 모델의 예비 결과 지원 하기 위해 활용 되어야 합니다. 이 연구에서 우리는 vivo에서 동물 모델을 기본 HCC 완전 한 생물학 과정을 보통 개발 하 셀 시트 기술을 사용 합니다.
이상 10 년 전, 오 카노의 실험실 설립 셀 시트 기술3에 따라 조직 공학의 새로운 방법. 이 기술은 표면 hydrophobicity를 제어 하 여 가역 세포 접착/분리 수 있도록 온도 응답 문화 플라스틱을 이용 한다. 이 메서드는 잘된 세포 외 기질 (ECM) 및 셀 상호 그대로 3 차원 (3 차원) 형식 (i.e.,cell 시트), 배양된 세포의 부드러운 수확을 수 있습니다. 셀 시트 기술은 상업적으로 사용할 수 및 사용할 준비가 문화 요리 (PIPA) 오전, 온도 반응 중합체 poly(N-isopropylacrylamide) precoating을 해야 합니다. 온도 20 ° c에서 PIPA 오전 고분자 화 되 고 반면, 더 높은 온도 (37 ° C)에서 중합체 탈수 되 고 혼 탁 한 침전 변환 수성 솔루션에 용 해. 고분자는 친수성 아 미드 체인 및 소수 성 측 쇄 (이소프로필 그룹)를 포함합니다. 높은 온도에서 물 분자의 브라운 운동 강화입니다, 반면에, 낮은 온도에서 수산화 구조 분석의 이소프로필 그룹 및 소수 성 이소프로필 그룹을 둘러싼 물의 분자 집계 때문에 소수 성 상호 작용. 따라서, 고분자의 전체 체인 집계 하 고 침전 물이4.
제시 연구에서이 기술은 세 가지 다른 셀 시트를 사용 하 여 HCC 동물 모델 개발 채택 된다. 첫 번째 시트 고용 이루어져 HCC 셀 라인만, 반면 다른 두 시트 HCC 셀 라인 셀과 두 개의 서로 다른 소스에서 MSCs의 조합으로 구성: 골 MSCs (BMMSCs) 및 탯 MSCs (UCMSCs). MSCs는 비 조 혈 stromal 세포 adipocytes, 등 osteocytes, chondrocytes, myocytes5엽 혈통의 intocell 파생 상품을 차별화 할 수 있다. 암 셀 시트를 만들 때 이러한 세포를 사용 하는 우리가 하는 이유는 암에 MSCs의 효과에 일치 하지 않는 보고. MSCs가 두 가지 고기를 가질 수 있습니다 제안 되었습니다: "MSC1", proinflammatory 표현 형 및 "MSC2", 면역 표현 형6. MSCs는 수용 체 통행세 같이 (TLRs)를 표현 한다. MSCs의 TLR4 못쓰게 TLR3 못쓰게 면역 요인6의 그들의 분 비를 증가 하는 반면 proinflammatory 요인의 그들의 분 비를 증가 시킵니다. 이러한 두 고기의 생체 외에서 연구 보고 MSC2 공동 문화 반대 효과7를 했다 하는 동안 암 세포 라인 MSC1의 공동 문화 암 세포 성장를 감쇠. 이 연루 MSCs 프로 암 또는 항 암 제, 그들의 표현 형에 따라 될 수 있습니다. 따라서, 셀 시트 기술을 사용 하 여 HCC 동물 모델 개발, 뿐만 아니라 우리 종양 개발에 MSC 이식의 효과 탐험 하고자 이러한 세포를 사용 하 여 것입니다 향상 여부 등이 모델의 개발을 줄이기 위해.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
프로토콜의 킹 사우드 대학 윤리 위원회 동물 보호 지침을 따릅니다. 수술 절차, 마 취약, 그리고 동물에 이용 된 다른 약물 킹 사우드 대학 윤리 위원회에 의해 승인 됩니다. 모든 실험 작업은 적절 하 게 훈련 된 직원에 의해 수행 됩니다.
1. 셀 시트 건설
- Undiluted 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 문화 요리 (3.5 cm 온도 응답 문화 요리) 코트와 접시의 모든 표면을 커버를.
참고:이 단계는 단층에는 세포의 성장을 지원 하 고 셀 집계를 방지 이후 셀 시트의 분리에 대 한 중요 하다. - 포함 하는 5% CO2 와 95% 공기 습도 분위기에서 37 ° C에서 24 시간을 위한 요리를 품 어.
- 코팅된 요리에서 초과 FBS를 제거 하 고 요리 1 시간 이상 실 온 (RT)에서 건조를 허용 합니다.
- 3 셀 정지 준비: 1 x 106 HepG2 세포, BMMSCs, 1 x 106 HepG2 세포 및 (BMMSCs와 UCMSCs에 4: 1의 비율)에서 UCMSCs 가진 1 x 106 HepG2 세포.
- 씨 각 레이블이 접시에 적절 한 세포 현 탁 액.
- DMEM 배양 10 %FBS 1% 페니실린/스 보충에 있는 모든 셀을 일시 중단 합니다.
- 셀을 포함 하는 5% CO2 와 95% 공기 습도 분위기에서 37 ° C에서 품 어.
2. 셀 시트 분리
- 100% 셀 합류에서 37 ° C 배양 기에서 요리를 가져가 라.
- HepG2/BMMSC 및 HepG2/UCMSC 셀 시트 요리 포함 5% CO2 와 95% 공기 습도 분위기에서 20 ° C에서 30-40 분 동안 잠복기 동안에 RT, 1 시간에 대 한 HepG2 세포 시트 접시를 품 어.
참고:만 HepG2에서 만든 셀 시트는 깨지기 쉬운; 20 ° C에 온도 감소 하면 시트의 구조에 손상을.
3입니다. 수술의 성능
참고: 셀 시트 분리에 대 한 보육 시간 동안 동물 절차 시작.
-
수술의 준비에 대 한 지침
- 후드, 층 류 캐비닛, 등 무 균 수술 실, 실험실 내에서 살 균 별도 영역에서 모든 수술 절차를 수행 합니다. 수술의 모든 표면 비 다공성, 봉인, 내구성, 그리고 sanitizable 인지 확인 합니다.
- 스크럽, 장갑, 검, 및 머리 및 구두 덮개를 포함 하 여 적절 한 보호 장구를 착용 하십시오.
- 수술에 사용 하는 도구는 깨끗 하 고 소독 (압력가 마로 소독을통해 , 높은 압력에서 포화 줄기) 시작 부분에서의 수술.
- 장갑을 쥐 사이 변경 합니다.
-
수술에 대 한 동물의 준비
- 8 월에 12 주 된 누드 쥐를 사용 합니다.
- 쥐에 대 한 주사 마 취를 만듭니다.
- 마 취 솔루션을 준비, 케 타 민-xylazine, 2 mL의 마 취 제 (20 mg/mL의 농도)에 xylazine의 1 mL, 멸 균 생리 식 염 수 (예를 들어, 0.9% 염화 나트륨) 살 균 10 mL 혈 청 컬렉션 유리병에서의 1 mL를 혼합 하 고 전에 잘 흔들어 사용 하 여.
- 마 취를 적용 하려면 intraperitoneally 쥐의 몸 무게의 100 g 당 케 타 민 xylazine 솔루션의 0.2 mL를 주사.
참고: 솔루션의 총 복용량은 100 mg/kg의 마 취 제 및 xylazine의 10 mg/kg 이다.
- 수술 사이트에서 보이는 먼지/이물질을 제거 합니다.
- 페달 철수 반사 (두 뒷 발에 발 패드 핀치)을 테스트 하 여 마 취의 깊이 확인 합니다.
참고: 발 패드 핀치에 응답 하면 복용량의 0.05 mL/100 g (약 매 30 분), 반복 다음 마 취 깊이 다시 확인 합니다. - Povidone-요오드/소 프로 파 놀에 의해 2 단계 스크럽으로 수술 영역을 치료.
- 절 개의 오염을 피하기 위하여 무 균 드 레이프와 쥐를 커버.
- Buprenorphine (0.01-0.05 mg/kg)으로 쥐를 피하 주사8 절 개를 하기 전에.
- 살 균 메스를 사용 하는 7-하-10cm 스킨과 간 노출 기본 근육 사이 컷 확인 합니다.
- 메스의 편평한 뒤 가장자리 피부에서 복 부 근육을 구분 합니다.
- 조심 스럽게 찔 러는 교육 알바 메스를 사용 하 고 날카로운가 위 컷을 확장.
4. 셀 시트 이식
참고: 셀 시트 이식 간에 수행 됩니다.
- 문화 요리에서 셀 시트를 수집 합니다.
- 부드럽게 벤치 시트는 표면에서 분리를 통해 문화 접시를 누릅니다.
- 살 균 피 펫 팁을 사용 하 여 30 원에 시트의 가장자리를 된다고 하 여 접시의 표면에서 셀 시트를 구분 합니다.
- 부드럽게 문화 접시에서 전체 매체를 제거 합니다.
- 어떤 손상도 없이 그대로 시트 확인 그렇지 않으면, 그것은 수 없습니다 (그림 1)을 사용.
참고: 결과 시트를 직접 눈으로 감지할 수 있습니다.
- 셀 시트 접시에서 수확 살 균 막 (종이 필터)를 준비 합니다.
- 첫째, 일반적인 염 분으로 막 담가. 그런 다음, 메 마른 목화 패드와 함께 과잉 염 분을 제거 합니다.
- 주름과 기포 막과 셀 시트 사이 피하 면 서 젖은 막 셀 시트 장소.
- 막 그리고 그들을 쉽게 수집 하 셀 시트 정상적인 염 분의 몇 방울을 추가 합니다.
참고: 셀 시트를 위반을 피하기 위해, 하 하지 차가운 식 염 수를 사용 하 고 집게와 막 셀 시트를 올려. - 셀 시트는 막에 제대로 장착 되었는지 확인 하려면 몇 초 동안 막 두고 그것을 수집 합니다.
- 간 세포 시트 이식에 대 한 준비.
- 간 표면 살 균 목화 패드와 함께 부드럽게 그것을 활용 하 여 건조 하다 다는 것을 확인 하십시오.
- 소독 집게를 사용 하 여 셀 시트와 막 쥐의 간 단일 엽 놓습니다.
- 살 균 염 분의 몇 방울을 추가 하 고 그것에서 셀 시트 분리 막에 부드러운 압력을 적용.
- 신중 하 게 막 제거 하기 전에 5 분 기다립니다.
참고:이 셀 시트 제대로 간 연결 위해 수행 됩니다. - 마지막으로, 기본 근육 닫고 5-0 나일론 봉합 절 개 피부.
- Povidone-요오드와 수술 영역을 치료.
참고: 그림 2 누드 쥐의 간장에 셀 시트 이식 절차의 다이어그램을 보여 줍니다.
5. 수술 후 관리
- 즉시 수술 후, 식인 풍습 또는 질 식, 방지 하려면 개별적으로 쥐를 집 고 그것은 정기적으로 (매 15 분) 모니터링 의식과 완전히 ambulant 때까지.
- 그런 다음, post-operatively, 합병증을 매일 5-14 d, 5 d 이상에 대 한 쥐를 평가 합니다. 매일 평가 하는 동안 다음의 있는지 확인 합니다.
- 상처가 닫히고는 봉합 지나치게 꽉 되지 않고 그대로 있습니다.
- 과도 한 열, 등 절 개 사이트에서 감염의 흔적은, 붓기 또는 purulent 방전.
- 통증, 음식 및 물 소비를 감소, 체중 감소, 탈수, 피부 tenting, 또는 빠르고 오픈 입 호흡 등와 관련 된 흔적을 확인 하 고 있습니다. 제어 심한 수술 후 통증에 적당 한 경우, 주사 쥐 피하 buprenorphine (0.01-0.05 mg/kg)으로 최소 48-72 h에 대 한 모든 6-8 h9 postoperatively.
6입니다. 이식된 지역 분석
- Scarifice 쥐 이식 후 한 달에 대 한 이식된 지역 수집 조직학 및 immunohistochemical 분석.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
쥐에 이식된 셀 시트 tumorigenicity:
이식 후 1 개월 쥐의 간은에서 모든 이식된 셀 시트 종양 (그림 3)를 개발 했습니다. HepG2, HepG2/BMMSC, HepG2/UCMSC 셀 시트에서 개발 된 종양의 평균 크기 4.5 cm, 4 cm, 및 2.5 cm, 각각10했다.
간 조직의 조직학 분석:
되며 고 오신 (H & E) 비 이식 쥐 hepatocytes와 간은 서로 anastomose 접시에 배열 하 고 핵 했다 라운드, 하나 또는 두 개의 저명한 nucleoli의 얼룩. 반면, 종양 섹션 수집 가능한 염증 및 괴 사 성 피하 hepatocytes, 불규칙 한 핵 윤곽을의 가장자리 그리고 변성 (그림 4) 취소.
그림 1: 3.5 cm 온도 응답 문화 접시를 사용 하 여 셀 시트의 제조. (A)이이 패널 이식에 적합 하지 않은 손상 된 세포의 시트를 보여줍니다. (B)이이 패널 그대로 셀 시트,이 식을 위한 준비를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 셀 시트 이식 절차 누드 쥐에서. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 쥐의 간 세포 시트 이식의 한 달 뒤에 종양 개발. 종양 (A)는 HepG2 세포 시트에서 생성 된 (크기: 4.5 cm), (B) HepG2 및 BMMSC 셀 시트 (크기: 4 cm), 및 (C) UCMSC 및 HepG2 세포 시트 (크기: 2.5 c m). 블루 서클 종양 영역을 표시. 이 그림은 이전에 게시 작업10에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : 쥐의 간 조직학 분석. H & E 얼룩 쥐의 간, 셀 시트 이식 후 4 주. (A)이 패널 쇼 정상 쥐 간 세포. (B)이이 패널은 암 세포 이식 후 간 형태를 보여줍니다. 검은색 화살표 간장 암, 녹색 화살표 표시 정상적인 hepatocytes, 파란색 화살표, 염증된 세포를 나타냅니다 나타내고 주황색 화살표 괴 HCC 셀을 나타냅니다. 눈금 막대는 20 배 확대를 나타냅니다. 이 그림은 이전에 게시 작업10에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
연구의 광범위 한 금액은 적절 한 비보에 전 임상 동물 모델 인간의 암과 유사한 개발에 전념 하 고 있습니다. 현재, 암 동물 모델을 만드는 데 사용 하는 주요 접근 유전 공학 및 세포 이식11를 포함 한다. 유전자 변형된 동물 모델 식별 및 기본 약물 유발 독성 분자 메커니즘을 이해 뿐만 아니라 대상 유전자의 유효성 검사에 대 한 좋은 도구입니다. 그러나,이 모델은 관련 된 몇 가지 제한 사항이; 예를 들어, 주어진된 유전자의 수정 예상된 형12항상 발생 하지 않습니다. 세포 이식 접근은 더 일반적으로 동물, 암 유발 하는 데 사용 됩니다 그리고 그것은 암 세포 현 탁 액의 주입을 포함 한다. 그러나,이 간단 하 고 편리한 접근에는 그것의 자신의 단점이 있습니다. 세포 현 탁 액을 생성 하는 효소 소화 단계는 암 세포를 수확 하 사용 됩니다. 이 줄어 듭니다 engraftment 효율 이식된 세포의 접착 단백질의 일부의 손실에 결과. 따라서, 거기 보장은 없습니다 이식된 암 세포 유발된 종양의 크기를 조정의 어려움을 언급 하지 않기 위하여 암 조직을 형성할 것 이다. 또한,이 방법은 혈액 순환 또는 비 대상 기관13에 셀 engraftment 이식된 세포의 급속 한 전환을 또 다른 심각한 단점은 있다.
새로운 셀 시트 기술은 이러한 단점을 극복 하기 위해 개발 되었습니다. 스즈키 외. 14 대 장, 간, 그리고 췌 장 종양 베어링 동물 암 세포 시트 이식 방법을 사용 하 여 만들었습니다. 비해 종양 생성 을 통해 암 세포 이식 방법,이 종양 크고 더 안정적 이었다. 작은 종양 조직 이식 종양을 유발 하는 동물에는 높은 효소 소화 단계를 요구 하지 않는 이식 방법의 사용에 의존 합니다. 분해 효소에 손상을 세포 외 매트릭스 셀 상호 작용에 영향을 미치는. 셀 시트 기술 그것의 관련 된 세포 외 매트릭스 및 성장 요인15함께 그대로 단층 셀 시트의 컬렉션을 수 있도록 침략 수확 방법을 사용 하 여이 제한을 극복 한다. 셀 시트 기술 또한 장기 engraftment16,17에 대 한 수 있습니다. 이것은 vivo에서 학문에 큰 가치 있는 세포 조직의 인생17의 전체 기간에 대 한 호스트의 조직으로 engraft 할 수 있어야 합니다. 또한,이 기술은 생 분해성 건설 기계3,15의 사용 없이 조직 공학의 새로운 방법의 개발을 사용할 수 있습니다. 그러나,이 방법은 여전히는 몇 가지 제한이 있습니다. 셀 시트 기술을 사용 하 여, 이식할된 조직의 중앙 부분 괴는 이식 너무 크면 가능 하 게 될 수 있습니다. 반대로, 작은 경우에 이식 너무 이식의 성공 기회를 줄일 수 있습니다. 또한, 하려면 종양의 후속 성장 제어, 이식 조직의 크기 되어야 합니다 균일 한 모든 실험에서. Transplantable 조직의 크기 2 mm3 때문에 불 쌍 한 산소 환경18괴 사 유도 결과로 제한 됩니다.
이 연구에는 HCC 동물 모델 성공적으로 만들었습니다 비 계 없는 이식 셀 시트를 사용 하 여. 셀 시트의 세 가지 유형으로 쥐의 간을 이식 했다: 라인 셀 셀 HCC의 셀 시트, 세포 라인 세포 및 BMSCs, HCC의 셀 시트와 세포 라인 세포 및 UCMSCs HCC의 셀 시트. 모든 세 개의 셀 시트 이식 받는 사람 쥐에서 종양을 유발 하기에 충분 했다. 그러나, 그것은 그 형성된 된 종양의 크기 감소는 시트를 MSCs 추가 지적 했다. 이 MSCs를 사용 하 고, 특히 UCMSCs, 종양 개발에 불리 한 영향을 나타냅니다. 결론, 암 세포 시트 이식 단단한 종양 동물 모델을 생성 하는 효율적인 방법을 제공 합니다. Vivo에서 모델 같은 데 하는 것은 상당한 응용 프로그램 중요 한 임상 정보 귀 착될 수 있었다. 또한, 종양 크기 감소에 의해 명백한 UCMSCs는 종양 개발 및 전파를 제한합니다. 이 암 치료에 대 한 일부 MSC 하위 셀 기반 접근 방식에 사용 될 수를 나타냅니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
저자는 그들의 협력 및 지원-특히 후세인 Almukhayzim, Hisham Aloudah에 대 한 실험적인 수술과 킹 사우드 대학, 의학 대학에서 동물 실험실의 직원을 감사 하 고 싶습니다. 저자 또한 시각을 준비 하기 위한 킹 사우드 빈 압둘 아지즈 대학에서 미디어 팀을 인정 하 고 싶습니다 자료 특히 Muath 빈 Ghannam 및 Abdulwahab Alsulami.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| FBS | Gibco/Invitrogen | 10270106 | |
| DMEM high glucose | Sigma | D5671-500ML | |
| Penicillin/streptomycin | Life Technology | 15070063 | |
| Sterile physiologic saline | Sigma | S0817-1GA | |
| Human HepG2 cell line | ATCC, USA | HB-8065 | |
| Human bone marrow MSCs cell line | PromoCell, USA | C-12974 | |
| human umbilical cord tissue MSCs | PromoCell, USA | C-12971 | |
| Ketamine 50% | Rompun, Bayer | ||
| Xylazine 2% | Rompun | 23076-35-9 | |
| Alphadine® solution. | Riyadh Pharma | LBL0816 | |
| Disposables: | |||
| 15mL Polypropylene High Clarity PP Centrifuge Tube | Falcon | 352097 | |
| 3.5 cm sterile UpCell culture dishes with the filter paper (membrane) | Sigma | 174904-1CS | |
| 100-1000 µl Pipette Tips | Sigma | CLS4868-1000EA | |
| Basic Procedure Drape | Thermofisher | PMD5293.0 | |
| Equipment | |||
| Plus pipette, variable volume | Eppendorf® Research® | Z683779-1EA | |
| Tissue culture incubator 37 °C, 5% CO2 | Any brand | ||
| Biological safety cabinet | Any brand | ||
| Tissue culture incubator 20 °C, 5% CO2 | Any brand | ||
| Sterile surgical tools and nude rats: | |||
| Forceps | |||
| Scissors | |||
| scalpel | |||
| Nylon Suture 5-0 | Accutome | AB-3854S | Monofilament, Lancet |
| 1 ml Tuberculin Syringes | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Nude rats | Charles river |
References
- Marra, M., et al. Molecular targets and oxidative stress biomarkers in hepatocellular carcinoma: an overview. Journal of Translational Medicine. 9, 171 (2011).
- Yamada, K. M., Cukierman, E. Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D. Cell. 130 (4), 601-610 (2007).
- Kushida, A., et al. Decrease in culture temperature releases monolayer endothelial cell sheets together with deposited fibronectin matrix from temperature-responsive culture surfaces. Journal of Biomedical Materials Research. 45 (4), 355-362 (1999).
- Okano, T., Yamada, N., Sakai, H., Sakurai, Y. A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly (N-isopropylacrylamide). Journal of Biomedical Materials Research Part A. 27 (10), 1243-1251 (1993).
- Chamberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing. Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).
- Waterman, R. S., Tomchuck, S. L., Henkle, S. L., Betancourt, A. M. A new mesenchymal stem cell (MSC) paradigm: polarization into a pro-inflammatory MSC1 or an Immunosuppressive MSC2 phenotype. PLoS One. 5 (4), e10088 (2010).
- Waterman, R. S., Henkle, S. L., Betancourt, A. M. Mesenchymal stem cell 1 (MSC1)-based therapy attenuates tumor growth whereas MSC2-treatment promotes tumor growth and metastasis. PLoS One. 7 (9), e45590 (2012).
- Curtin, L. I., et al. Evaluation of buprenorphine in a postoperative pain model in rats. Comparative Medicine. 59 (1), 60-71 (2009).
- Nowland, M. H. Guidelines on Anesthesia and Analgesia in Rats - ULAM Guidelines and SOPs - Michigan Medicine Confluence. , https://wiki.med.umich.edu/display/ULAMGSOP/Guidelines+on+Anesthesia+and+Analgesia+in+Rats (2017).
- Alshareeda, A. T., Sakaguchi, K., Abumaree, M., Mohd Zin, N. K., Shimizu, T. The potential of cell sheet technique on the development of hepatocellular carcinoma in rat models. PLoS One. 12 (8), e0184004 (2017).
- Russo, J., Russo, I. H. Atlas and histologic classification of tumors of the rat mammary gland. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 5 (2), 187-200 (2000).
- Lin, J. H. Applications and limitations of genetically modified mouse models in drug discovery and development. Current Drug Metabolism. 9 (5), 419-438 (2008).
- Driscoll, J. S. The preclinical new drug research program of the National Cancer Institute. Cancer Treatment Reports. 68 (1), 63-76 (1984).
- Suzuki, R., Aruga, A., Kobayashi, H., Yamato, M., Yamamoto, M. Development of a novel in vivo cancer model using cell sheet engineering. Anticancer Research. 34 (9), 4747-4754 (2014).
- Chen, G., et al. Application of the cell sheet technique in tissue engineering. Biomedical Reports. 3 (6), 749-757 (2015).
- Matsuura, K., Haraguchi, Y., Shimizu, T., Okano, T. Cell sheet transplantation for heart tissue repair. Journal of Controlled Release. 169 (3), 336-340 (2013).
- Matsuura, K., Shimizu, T., Okano, T. Toward the development of bioengineered human three-dimensional vascularized cardiac tissue using cell sheet technology. International Heart Journal. 55 (1), 1-7 (2014).
- Folkman, J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent? Journal of the National Cancer Institute. 82 (1), 4-6 (1990).
