Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

चूहों में वाई-भूलभुलैया बैरियर टास्क में क्रोनिक तनाव प्रयास से संबंधित विकल्प व्यवहार में बदलाव

Published: August 13, 2020 doi: 10.3791/61548
Automatic Translation
1,2, 1, 1,2
1Department of Psychology, Behavioral and Systems Neuroscience Area, The State University of New Jersey, 2Graduate Program in Neuroscience, Rutgers, The State University of New Jersey

Summary

वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य एक व्यवहार परीक्षण है जो इनाम के लिए प्रयास व्यय करने के लिए प्रेरणा की जांच करता है। यहां, हम इस व्यवहार के साथ क्रोनिक कोर्टिकोस्टेरोन और सामाजिक हार तनाव सहित कई अच्छी तरह से मान्य पुराने तनावों के परीक्षण पर चर्चा करते हैं, साथ ही उपन्यास पुरानी गैर-भेदभावपूर्ण सामाजिक हार तनाव (सीएनएसडीएस), जो महिलाओं में प्रभावी है।

Abstract

प्रमुख अवसादग्रस्तता विकार सहित मूड विकारों, पुराने तनाव से उपजी हो सकती है। वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य एक प्रयास से संबंधित विकल्प परीक्षण है जो प्रयास को व्यय करने और इनाम प्राप्त करने के लिए प्रेरणा को मापता है। चूहों में, क्रोनिक तनाव एक्सपोजर काफी प्रभावों प्रेरणा एक उच्च मूल्य इनाम के लिए काम करने के लिए जब एक कम मूल्य इनाम अनस्ट्रेस्ट चूहों की तुलना में स्वतंत्र रूप से उपलब्ध है । यहां हम पुरानी कोर्टिकोस्टेरोन प्रशासन प्रतिमान का वर्णन करते हैं, जो वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य में सरल प्रतिक्रिया में बदलाव पैदा करता है। वाई-भूलभुलैया कार्य में, एक हाथ में 4 खाद्य छर्रों होते हैं, जबकि दूसरे हाथ में केवल 2 छर्रे होते हैं। चूहों के बाद उच्च इनाम हाथ का चयन करने के लिए सीखना, उत्तरोत्तर बढ़ती ऊंचाई के साथ बाधाओं तो कई परीक्षण सत्रों पर उच्च इनाम हाथ में पेश कर रहे हैं । दुर्भाग्य से, अधिकांश पुराने तनाव प्रतिमान (कोर्टिकोस्टेरोन और सामाजिक हार सहित) पुरुष चूहों में विकसित किए गए थे और मादा चूहों में कम प्रभावी हैं। इसलिए, हम पुरानी गैर-भेदभावपूर्ण सामाजिक हार तनाव (सीएनएसडीएस) पर भी चर्चा करते हैं, एक तनाव प्रतिमान जो हमने विकसित किया है जो पुरुष और महिला चूहों दोनों में प्रभावी है। अनुवादात्मक रूप से प्रासंगिक व्यवहार कार्यों के बढ़ते उपयोग के साथ संयुक्त पुरुष और महिला चूहों में कई अलग-अलग पुराने तनावों के साथ परिणाम दोहराने से यह समझने में मदद मिलेगी कि क्रोनिक तनाव मूड विकारों को कैसे बढ़ा सकता है।

Introduction

अवसाद और चिंता जैसे मनोदशा विकार आज के समाज में अत्यधिक प्रचलित हैं। दशकों के कार्य ने इन जटिल विकारों का अध्ययन करने के लिए निरंतर बेहतर उपचार और प्रासंगिक कृंतक मॉडल की खोज कीहै 1. क्रोनिक स्ट्रेस डिप्रेशन जैसे मूड विकारों के लिए एक योगदान कारक है2. इसलिए, पुरानी सामाजिक पराजय तनाव (एसडीएस) और क्रोनिक कोर्टिकोस्टेरोन प्रशासन (कॉर्ट) जैसे पुराने तनाव प्रतिमान पुरुष चूहों में विकसित किए गए थे और अब व्यापक रूप से पुराने तनाव जोखिम के न्यूरोबायोलॉजिकल और व्यवहार प्रभावों का आकलन करने के लिए उपयोग किए जाते हैं। क्रोनिक तनाव प्रभावों का आकलन करने के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले व्यवहार परीक्षणों में परिहार व्यवहार से जुड़े कार्य शामिल हैं, जैसे कि ऊंचा प्लस भूलभुलैया, खुला क्षेत्र, और नवीनता दबा हुआ भोजन, या अवसादरोधी प्रभावकारिता के साथ, जैसे जबरन तैरना परीक्षण। हालांकि, कृंतक में इन व्यवहारों में यकीनन चेहरे की कमी है और अधिक महत्वपूर्ण बात यह है कि अवसाद जैसे मानव विकारों के लिए भविष्य कहनेवाला वैधता और अनुवादात्मक प्रासंगिकता।

एक लोकप्रिय क्रोनिक तनाव प्रतिमान, पुरानी अप्रत्याशित हल्के तनाव (CUMS), बड़े पैमाने पर इस तरह के सुक्रोज वरीयता3के रूप में व्यवहार का उपयोग कर मांय किया गया है । CUMS पानी की तुलना में 1% सुक्रोज समाधान के लिए वरीयता कम कर देता है और ऐतिहासिक रूप से अनहेडोनिया से संबंधित व्यवहार4,,5के रूप में व्याख्या की जाती है। हालांकि , सुक्रोज वरीयता में यह कमी मनुष्यों में प्रमुख अवसादग्रस्तता विकार6,7के साथ नहीं देखी जाती है । इसके अलावा, सुक्रोज वरीयता सरल इनाम प्रेरणा के अध्ययन के लिए अनुमति नहीं देती है।

हाल ही में, कुछ शोध ने प्रेरणा से जुड़े अन्य व्यवहारों पर ध्यान केंद्रित किया है और8, 9,को पुरस्कृतकियाहै। इन कार्यों में अनुवादात्मक मूल्य का वादा किया गया है क्योंकि अपेक्षाकृत समान व्यवहार आकलन मनुष्यों और कृंतक दोनों में आयोजित किया जा सकता है। यहां, हम एक वाई-भूलभुलैया बाधा व्यवहार कार्य में कॉर्ट और एसडीएस प्रतिमान और उनके प्रभावों का वर्णन करते हैं जो इनाम के लिए प्रयास करने के लिए प्रेरणा को मापता है। हम तो एक नया पुराने तनाव प्रतिमान है कि हम विकसित, पुरानी गैर भेदभावपूर्ण सामाजिक हार तनाव (CNSDS), जो दोनों पुरुष और महिला चूहों में प्रभावी है पर चर्चा ।

क्रोनिक कोर्टिकोस्टेरोन प्रशासन (कॉर्ट) वास्तविक तनाव एक्सपोजर के बिना पुराने तनाव की नकल करने के लिए डिज़ाइन किया गया एक प्रतिमान है। तनाव के कारण हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-एड्रेनल अक्ष की सक्रियता के परिणामस्वरूप मनुष्यों में अधिवृक्क स्टेरॉयड कोर्टिसोल10, 11,,,12 और कॉर्टिकोस्टेरोन में चूहों में1113,,14। वयस्क पुरुष चूहों के पीने के पानी के माध्यम से कम से कम 4 सप्ताह तक कॉर्टिकोस्टेरोन की डिलीवरी के परिणामस्वरूप खुले मैदान, ऊंचा प्लस भूलभुलैया, और नवीनता जैसे परिहार कार्यों में विकृत व्यवहार प्रतिक्रियाएं होती हैं, जो10, 11,,12, 13,11,14,,,15,,,16।15 दिलचस्प बात यह है कि कॉर्टवाद्य कार्यों 16 , 17,18,,1919में इनाम प्रसंस्करण को भी प्रभावित करता है । यहां वर्णित कॉर्ट प्रतिमान १०० एनजी/एमएल कॉर्ट से नीचे की एक सुसंगत सीरम एकाग्रता पैदा करता है, जो एक तीव्र तनाव द्वारा उत्पादित पांच गुना से अधिक कम है जैसे जबरन तैरना15। इसलिए, क्रोनिक कॉर्ट प्रशासन हाइपरकॉर्टिसोलेमिया का कारण बनने की संभावना नहीं है। जबकि क्रोनिक कॉर्ट केवल पुरुष चूहों20में प्रभावी है, हमने हाल ही में प्रदर्शन किया है कि यह वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य21में सरल प्रतिक्रिया में एक मजबूत बदलाव पैदा करता है। हमारे ज्ञान के लिए, यह पुरुष चूहों21में एक प्रयास से संबंधित विकल्प व्यवहार पर पुराने तनाव के प्रभाव की जांच करने के लिए पहले अध्ययनों में से एक था । पिछले एक अध्ययन में सबसे पहले चूहों में प्रयास आधारित निर्णय लेने पर तीव्र संयम तनाव के प्रभाव का प्रदर्शन कियागया 22। प्रयास से संबंधित विकल्प व्यवहार में, एक जानवर या तो एक उच्च मूल्य इनाम के लिए प्रयास लागू करने के लिए या एक कम मूल्य इनाम है कि अधिक स्वतंत्र रूप से उपलब्ध है स्वीकार चुनता है । मनुष्यों में, पुरस्कार कार्य (EEfRT) के लिए प्रयास-व्यय, चूहों23में प्रयास से संबंधित विकल्प कार्यों के अनुरूप विकसित एक कंप्यूटर गेम है। अवसाद के परिणामस्वरूप EEfRT में दुर्अनुकूली प्रतिक्रियाएं होती हैं (उच्च मूल्य वाले पुरस्कारों के लिए कठिन कार्यों को चुनने की संभावना कम हो गई है)। इसलिए, कृंतक में प्रयास से संबंधित विकल्प कार्य उनके अनुवाद प्रासंगिकता के कारण विशेष रूप से दिलचस्प हैं।

क्रोनिक सामाजिक हार तनाव (एसडीएस) पुरुष चूहों में अधिक व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले प्रीक्लिनिकल तनाव मॉडल में से एक है। यह एक 10 दिन प्रोटोकॉल है जहां बड़े, आक्रामक सेवानिवृत्त ब्रीडर सीडी-1 पुरुषों प्रयोगात्मक चूहों पर हमला, आम तौर पर C57BL/6J, 5 मिनट दैनिक सत्र24में । यह प्रयोगात्मक चूहों के सबसेट में एक मजबूत दुर्अनुकूली व्यवहार फेनोटाइप पैदा करता है। एक सामाजिक संपर्क परीक्षण के लिए लचीला या हार तनाव के लिए अतिसंवेदनशील आबादी में चूहों स्तरीकरण प्रयोग किया जाता है, और कई अध्ययनों SDS की इस अनूठी विशेषता का इस्तेमाल किया है आणविक और तंत्रिका सर्किट तनाव निर्भरता और संवेदनशीलता अंतर्निहित तंत्र की जांच । यहां हम वाई-भूलभुलैया बाधा व्यवहार कार्य के लिए कॉर्ट प्रतिमान और इसके कार्यान्वयन के विवरण का वर्णन करते हैं। हम वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य में एसडीएस प्रभावों पर भी चर्चा करते हैं। वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य टी-भूलभुलैया बाधा कार्य पर आधारित है, जिसका उपयोग मुख्य रूप से,चूहों में भूलभुलैया8,9,25की दो बाहों में मौजूद उच्च या निम्न पुरस्कारों के लिए प्रयास व्यय करने की प्रेरणा को मापने के लिए किया जाता है।, चूहों प्रशासित कैफीन या डोपामाइन विरोधी चूहों में सहज प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए भी यह कार्य लागू किया गयाहै। कृंतक या तो उच्च इनाम मूल्य के लिए भूलभुलैया के एक हाथ में उत्तरोत्तर बढ़ती ऊंचाई की बाधाओं पर चढ़ने से अधिक प्रयास कर सकते हैं, आम तौर पर 4 इनाम छर्रों, या भूलभुलैया के दूसरे हाथ में काफी कम प्रयास व्यय केवल 2 इनाम छर्रों9प्राप्त करने के लिए । 10 दिन के सामाजिक हार प्रतिमान अतिसंवेदनशील चूहों में एक मजबूत दुर्अनुकूल्य फेनोटाइप का उत्पादन करते हैं जो लगभग 30 दिनों तक रहता है, इसलिए हमने इस 30 दिन की समय सीमा24के भीतर सभी प्रयोगों को पूरा करने के लिए वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य को अधिक तेजी से प्रशिक्षित करने और जानवरों का परीक्षण करने के लिए संशोधित किया। इसलिए, यहां हम पुराने तनाव से उजागर चूहों में इनाम के लिए प्रयास व्यय करने के लिए प्रेरणा को मापने के लिए संघनित प्रशिक्षण सत्रों और एकल बाधा परीक्षण सत्रों वाले वाई-भूलभुलैया बाधा व्यवहार कार्य प्रोटोकॉल का भी विस्तार करते हैं।

दुर्भाग्य से, दोनों पुरानी कोर्टिकोस्टेरोन और पुरानी सामाजिक हार तनाव पुरुष चूहों में विकसित किए गए थे और मादा चूहों में कम प्रभावी हैं। यह अत्यधिक समस्याग्रस्त है क्योंकि महिलाओं को अवसाद जैसे मनोदशा विकारों का निदान करने के लिए पुरुषों की तुलना में अधिक संभावना होती है1. एसडीएस के चतुर अनुकूलन ने मादा चूहों में उपयोग की अनुमति दी है , लेकिन इसके लिए कठिन सर्जरी या थकाऊ मूत्र संग्रह26,27 कीआवश्यकता होती है । हमने हाल ही में एसडीएस प्रतिमान में एक सरल संशोधन का वर्णन किया है, जिसे क्रोनिक गैर-भेदभावपूर्ण सामाजिक हार तनाव (सीएनएसडीएस) कहा जाता है। सीएनएसडीएस28प्रायोगिक पुरुष और मादा चूहों दोनों के अतिसंवेदनशील और लचीला स्तरीकरण की अनुमति देता है । दोनों महिला और पुरुष अतिसंवेदनशील चूहों CNSDS के संपर्क में ऊंचा प्लस भूलभुलैया और खुले क्षेत्र में केंद्र के खुले हाथों से बचने और प्रदर्शन नवीनता में खाने के लिए विलंबता में वृद्धि हुई-खिला दबा दिया । सीएनएसडीएस एसडीएस में अन्य संशोधनों की तुलना में अधिक कुशल है, क्योंकि दोनों लिंगों को हार सत्रों में जोड़ा जाता है। इसके परिणामस्वरूप प्रोटोकॉल को पूरा करने के लिए आवश्यक समय और प्रयास में एक संबद्ध वृद्धि के बिना प्रयोगात्मक चूहों की उपज में वृद्धि होती है। इसलिए, हम इस पांडुलिपि को हाल ही में विकसित पुराने तनाव प्रतिमान की गहराई से प्रस्तुति के साथ समाप्त करते हैं।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

ये प्रयोग एनआईएच प्रयोगशाला पशु देखभाल दिशानिर्देशों के अनुपालन में किए गए थे और रटगर्स विश्वविद्यालय संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किए गए थे।

1. क्रोनिक कोर्टिकोस्टेरोन (कॉर्ट)

  1. बेतरतीब ढंग से उपचार समूहों के लिए चूहों आवंटित। बेतरतीब ढंग से वयस्क पुरुष C57BL/6J चूहों को वाहन और कोर्टिकोस्टेरोन (CORT) समूहों में विभाजित करें ।
    1. अलग पिंजरों में घर वाहन चूहों, और दूसरों में कॉर्ट चूहों, के रूप में उनके उपचार पिंजरे के पानी की बोतल के माध्यम से दिया जाता है ।
    2. लेबल विशेष पानी कार्ड पिंजरे में जगह है कि पशु देखभाल कर्मचारियों को सूचित करता है कि पानी की बोतलों प्रयोग के लिए आवश्यक समाधान होते हैं ।
  2. एक आकार 1 एल स्क्रू-टॉप ग्लास कंटेनर में 750 एमएल नल के पानी में बीटा-साइक्लोडेक्सट्रिन के 3.375 ग्राम को भंग करके वाहन समाधान बनाएं।
    1. इस घोल से वाहन पिंजरे की पानी की बोतलें भरें। सुनिश्चित करें कि बोतल तरल खपत को मापने के लिए रिसाव नहीं करता है।
    2. कंटेनर लेबल और प्रयोगशाला में शेल्फ पर कमरे के तापमान पर स्टोर। लगभग 1 सप्ताह के लिए पिंजरे की बोतलों को भरने के लिए वाहन समाधान का उपयोग करें।
    3. सप्ताह भर में वाहन की बोतलों को फिर से भरें। आवश्यक सप्ताह के दौरान पिंजरे की बोतलें 1x-2x फिर से भरें। सप्ताह की शुरुआत या अंत में प्रति सप्ताह एक ताजा बोतल 1x में बदलें।
      नोट: एक सप्ताह के बाद, बीटा-साइक्लोडेक्सट्रिन पानी की बोतल के अंदर कोट करना शुरू कर देगा और समाधान बादल बनाता है।
    4. सप्ताह में दो बार खपत तरल की मात्रा की निगरानी करें और रिकॉर्ड करें। प्रत्येक संबंधित बोतल और रिकॉर्ड का वजन करें, सावधान किसी भी तरल को फैल न दें। प्रत्येक बोतल को फिर से भरें और वापस करें।
      नोट: 5 चूहों का एक पिंजरा 3-4 दिनों में 80-120 एमएल तरल पी जाएगा।
  3. पहले 1 एल स्क्रू-टॉप ग्लास कंटेनर में 750 एमएल नल के पानी में बीटा-साइक्लोडेक्सट्रिन के 3.375 ग्राम को भंग करके कॉर्ट समाधान बनाएं। फिर 26.25 मिलीग्राम कोर्टिकोस्टेरोन जोड़ें।
    1. पानी में कॉर्ट को भंग करने के लिए सोनिकेट कॉर्ट समाधान। कंटेनर को अल्ट्रासोनिक क्लीनर वॉटर बाथ में रखें। लगभग 30 मिनट के लिए 40 किलोहर्ट्ज पर या जब तक कोर्टिकोस्टेरोन भंग नहीं हो जाता और तरल स्पष्ट दिखाई देता है।
      नोट: अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजर (टिप-स्टाइल) भी कॉर्ट को भंग करने के लिए प्रभावी हैं।
    2. समाधान के साथ सभी CORT पिंजरों के लिए पानी की बोतलें भरें। लेबल कंटेनर और प्रयोगशाला में शेल्फ पर कमरे के तापमान पर स्टोर। CORT समाधान के बारे में 1 सप्ताह के लिए पिंजरे की बोतलों को भरने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
      नोट: भूरे रंग के कांच के पानी की बोतलों या प्लास्टिक अपारदर्शी बोतलों का उपयोग करें, क्योंकि कॉर्ट प्रकाश-संवेदनशील है।
    3. सप्ताह में दो बार खपत तरल की मात्रा की निगरानी करें और रिकॉर्ड करें। प्रत्येक पिंजरे के भीतर चूहों के वजन के लिए भस्म तरल की तुलना करने के लिए साप्ताहिक सभी वाहन और कॉर्ट चूहों का वजन करें।
    4. तरल खपत (mL/g/day) की मात्रा निर्धारित करने के लिए, निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करें:
      (मात्रा पिंजरे पिछले 3-4 दिनों में पिया) /(पिंजरे में चूहों के औसत शरीर के वजन) दिन की एक्स संख्या के बाद से वाहन या CORT बोतल फिर से भरा गया है)
      नोट: n = 5 वयस्क पुरुष C57BL/6J चूहों के एक औसत पिंजरे औसत ०.२५-०.३० मिलीग्राम/g/day, जो आम तौर पर विज्ञापन libitum और भोजन से वंचित समय अवधि के माध्यम से सुसंगत रहता है पर भस्म हो जाएगा । इन सांद्रता के परिणामस्वरूप 24 मिलीग्राम/किलो/दिन बीटा-साइक्लोडेक्सट्रिन और ९.५ मिलीग्राम/किलो/दिन कॉर्ट15,,16की अनुमानित खुराक होती है ।
  4. सामाजिक हार तनाव (SDS)
    1. मानक सामाजिक पराजय तनाव प्रोटोकॉल का उपयोग करें जैसा कि24,29अन्य जगहों पर गहराई से वर्णित है ।
  5. वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य
    1. वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य के लिए खाद्य अभाव
      1. सामाजिक संपर्क परीक्षण पूरा करने के बाद दिन, सभी नियंत्रण और प्रयोगात्मक चूहों का वजन। यह उनके फ्री-फीडिंग बॉडी वेट होंगे।
        नोट: इसके साथ, हम एसडीएस नियंत्रण और एसडीएस प्रायोगिक चूहों दोनों का उल्लेख करने के लिए "नियंत्रण" और "प्रायोगिक" का उपयोग करते हैं, साथ ही संबंधित एसडीएस और कॉर्ट प्रतिमानों में वाहन और कॉर्ट प्रशासित चूहों के लिए।
      2. चूहों को वंचित करने के लिए, केवल प्रत्येक पिंजरे के C57BL/6J पक्ष से प्रयोगशाला चाउ को हटा दें ।
      3. सभी चूहों का वजन करें, साथ ही प्रयोगशाला चाउ की मात्रा जो दैनिक दी जाएगी, ताकि परीक्षण के दौरान लगभग 90% मुफ्त-फीडिंग वजन पर शरीर के वजन को ठीक से बनाए रखा जा सके।
        नोट: प्रत्येक माउस या चूहों के घर पिंजरे में दिया भोजन की मात्रा शरीर के वजन में उतार चढ़ाव और प्रशिक्षण या वाई भूलभुलैया में परीक्षण के प्रत्येक दिन में भस्म इनाम छर्रों की मात्रा पर निर्भर करेगा ।
      4. इनाम छर्रों के साथ अपनेपन की स्थापना। घर के पिंजरे में 20 मिलीग्राम अनाज आधारित खाद्य छर्रों (बायो-सर्व) के एक छोटे से स्कूपफुल डंप करें। यह छर्रों से परिचित होकर स्थापित होगा और चूहों को आदत और प्रारंभिक प्रशिक्षण सत्रों में वाई-भूलभुलैया में उपभोग करने के लिए प्रेरित करेगा।
  6. वाई-भूलभुलैया तंत्र
    1. अपारदर्शी सफेद 3/16 "चौड़ाई प्लेक्सीग्लास की वाई-भूलभुलैया संरचना का निर्माण करें, जिसमें तीन हथियार लंबाई में 26 सेमी, ऊंचाई में 20 सेमी और चौड़ाई में 7 सेमी मापते हैं।
    2. डिवाइडर का उपयोग करें कि वाई भूलभुलैया में स्लॉट के बीच स्लाइड करने के लिए एक शोधकर्ता के लिए शुरू बॉक्स जहां चूहों शुरू में रखा जाता है बंद करने के लिए अनुमति देते हैं, या या तो हाथ में माउस को नियंत्रित करने के लिए एक बार वे चयनित है और वाई भूलभुलैया के बाएं या सही बाहों में प्रवेश किया ।
    3. ऊर्ध्वाधर पक्ष के लिए तार जाल से कई 10, 15, और 20 सेमी लंबा वाई-भूलभुलैया बाधाएं बनाएं, और पीछे के कोण पर लगभग 45 डिग्री कोण पर प्लेक्सीग्लास के साथ। यह C57BL/6J चूहों को पकड़ और प्रत्येक बाधा के ऊर्ध्वाधर तार जाल पक्ष पर चढ़ने के लिए अनुमति देता है, और फिर बाधा के कोण Plexiglas पक्ष नीचे पार ।
      1. अधिक से अधिक कर्षण के लिए अनुमति देने के लिए कोण की ओर पतले कदम जोड़ें।
  7. वाई-भूलभुलैया आदत
    1. वाई-भूलभुलैया तंत्र के लिए सभी नियंत्रण और प्रयोगात्मक चूहों आदत।
      1. खाद्य अभाव के बाद दिन, 50 मिलीग्राम सेंट्रलाइज ट्यूब की टोपी में बड़ी संख्या में 20 मिलीग्राम अनाज आधारित खाद्य छर्रों (जैसे, बायो-सर्व) रखें और वाई-भूलभुलैया के प्रत्येक हाथ के सिरों पर रखें। ये टोपियां चूहों के लिए छोटे भोजन के पात्र के रूप में काम करती हैं, और चूहे आसानी से भोजन छर्रों को खाना सीखेंगे।
      2. प्रत्येक माउस को वाई-भूलभुलैया के स्टार्ट बॉक्स में जगह में स्टार्ट बॉक्स डिवाइडर के साथ रखें।
      3. कुछ सेकंड के बाद, डिवाइडर को हटा दें, प्रत्येक माउस को 15 मिनट के लिए वाई-भूलभुलैया का पता लगाने की अनुमति देता है। समय की यह राशि माउस को भूलभुलैया की सभी बाहों का पर्याप्त रूप से पता लगाने और उपकरण के साथ अपनेपन को स्थापित करने की अनुमति देती है।
        नोट: कुछ चूहों इस पहले आदत दिन में किसी भी खाद्य छर्रों का उपभोग नहीं कर सकते हैं।
    2. अगले दिन, एक समान प्रक्रिया का उपयोग करके एक दूसरे 15 मिनट वाई-भूलभुलैया की आदत को पूरा करें।
      1. किसी भी चूहों पर ध्यान दें जिन्होंने कोई छर्रों को नहीं खाया है। इन चूहों के लिए, अपने घर पिंजरों में छर्रों का एक और छोटा स्कूपफुल डंप करें।
  8. Y-भूलभुलैया मजबूर पसंद प्रशिक्षण
    1. प्रत्येक माउस के लिए उच्च इनाम (एचआर) और कम इनाम (एलआर) हाथ नामित करें।
      1. बेतरतीब ढंग से दोनों नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों में चूहों को उच्च इनाम (एचआर) हाथ और दाहिने हाथ के रूप में कम इनाम (एलआर) हाथ, या इसके विपरीत के रूप में बाएं हाथ को असाइन करें। इस प्रकार, बाएं, एचआर आर्म में प्रत्येक परीक्षण में 4 छर्रों उपलब्ध होंगे, और दाएं, एलआर आर्म या विपरीत में उपलब्ध 2 छर्रों।
      2. दोनों नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूह में इन नामित एलआर और मानव संसाधन हथियारों प्रतिसंतुलन इतना है कि प्रत्येक समूह के लगभग आधे मानव संसाधन हाथ के रूप में बाएं हाथ था, और आधे मानव संसाधन हाथ के रूप में दाहिने हाथ था ।
    2. मजबूर विकल्प परीक्षण
      1. वाई-भूलभुलैया आदत के 2 दिनों के बाद, चूहों मजबूर पसंद प्रशिक्षण के 10 परीक्षणों के 3 दिन शुरू कर दिया है ।
      2. प्रत्येक जबरन पसंद परीक्षण के लिए, माउस को स्टार्ट बॉक्स में रखें, और फिर डिवाइडर को हटा दें, जिससे माउस 60 एस को बाएं या दाएं हाथ में प्रवेश करने और उपलब्ध छर्रों का उपभोग करने की अनुमति मिलती है। प्रत्येक मजबूर-विकल्प परीक्षण के लिए डिवाइडर के साथ विपरीत हाथ से ब्लॉक, माउस दूसरे हाथ का चयन करने के लिए मजबूर । एक मानव संसाधन मजबूर विकल्प परीक्षण के लिए, एलआर बांह, या इसके विपरीत करने के लिए उपयोग ब्लॉक ।
      3. परीक्षण के बाद माउस को हटा दें और खाए गए संबंधित छर्रों को फिर से भरें।
      4. प्रत्येक प्रशिक्षण दिवस में प्रत्येक माउस के लिए वैकल्पिक मजबूर विकल्प परीक्षण, ताकि चूहों 5 मानव संसाधन और 5 एलआर मजबूर पसंद परीक्षणों को पूरा करें।
        नोट: मजबूर पसंद परीक्षण चूहों को उच्च इनाम के साथ एक हाथ और दूसरे को कम इनाम के साथ संबद्ध करने के लिए प्रशिक्षित करते हैं ।
      5. माउस को अपने घर के पिंजरे में वापस रखें और फिर प्रत्येक माउस के लिए 5 मिनट इंटरट्रायल अंतराल बनाए रखने के लिए 3-5 बाद के चूहों से अधिक नहीं चलाएं।
  9. वाई-भूलभुलैया मुक्त विकल्प प्रशिक्षण
    1. मुफ्त विकल्प परीक्षण
      1. एक मानव संसाधन और एलआर हाथ मजबूर पसंद परीक्षण के साथ प्रत्येक मुक्त विकल्प सत्र शुरू करते हैं । इस प्रकार, चूहों को 10 मुफ्त विकल्प परीक्षणों की शुरुआत करने से पहले प्रत्येक हाथ में मजबूर होने का अनुभव होगा।
      2. प्रत्येक माउस को स्टार्ट बॉक्स में रखें और डिवाइडर को हटा दें। एक बार माउस एक हाथ का चयन किया है और यह अंत करने के लिए तय जहां छर्रों युक्त कप स्थित है, उस तरफ जगह में हाथ डिवाइडर जगह है, माउस में ताला लगा जब तक यह छर्रों भस्म हो गया है ।
      3. माउस को अपने घर के पिंजरे में वापस निकालें और बाद में 3-5 चूहों को चलाने के लिए उस चक्र में इस्तेमाल किया एक 5 मिनट अंतर परीक्षण अंतराल की अनुमति है ।
    2. निम्नलिखित डेटा रिकॉर्ड करें: पैलेट कप तक पहुंचने के लिए एक हाथ, हाथ चयन और विलंबता चुनने के लिए विलंबता।
      1. रिकॉर्ड जो माउस हाथ में प्रवेश करती है और पूरी तरह से गोली कप के लिए traverses । इसके अलावा उस हाथ का चयन करें और गोली कप तक पहुंचने के लिए विलंबता रिकॉर्ड।
      2. किसी भी परीक्षण पर विचार करें जहां एक माउस एक हाथ का चयन करने में विफल रहता है या एक लोप परीक्षण के रूप में सभी 4 या 2 छर्रों का उपभोग नहीं करता है।
    3. 70% मुफ्त विकल्प मापदंड
      1. रिकॉर्ड जो हाथ सभी 10 मुफ्त विकल्प परीक्षणों के लिए दैनिक चुना जाता है ।
      2. एक बार एक माउस एक मुक्त विकल्प प्रशिक्षण दिवस (७०% कसौटी) में 10 परीक्षणों में से 7 पर मानव संसाधन बांह का चयन किया है, बाधा परीक्षण सत्र पर माउस ले जाएँ ।
        नोट: सभी चूहों ७०% मानव संसाधन हाथ मापदंड तक पहुंचने के लिए मानव संसाधन और एलआर हथियारों के दोनों पर्याप्त भेदभाव सुनिश्चित करने तक पहुंचने तक मुफ्त विकल्प प्रशिक्षण जारी रखें और चूहों मानव संसाधन बांह के लिए समान वरीयता प्रदर्शित करता है ।
  10. वाई-भूलभुलैया बाधा परीक्षण
    1. 10 सेमी बैरियर टेस्ट सत्र
      1. वाई-भूलभुलैया में एचआर आर्म के आधे रास्ते में 10 सेमी बैरियर रखें।
      2. दोनों हथियारों के लिए कई मजबूर पसंद परीक्षणों के साथ शुरू करो । बाधा पर चढ़ने के लिए प्रतिरोधी चूहों को एक लंबे, पतले प्लेक्सीग्लास टुकड़े के साथ प्रेरित किया जा सकता है।
        नोट: अनुभव से, हम एक नई बाधा ऊंचाई पर प्रत्येक सत्र की शुरुआत में दोनों मानव संसाधन और एलआर हथियारों के लिए कम से कम 2 मजबूर पसंद परीक्षणों की सलाह देते हैं। हम परीक्षणों को रिकॉर्ड करने की सलाह देते हैं जहां माउस को बाधा पर चढ़ने का संकेत देना आवश्यक है यदि यह आवश्यक हो जाता है। चूहों आम तौर पर 10 सेमी बाधा है, जो इतना अधिक नहीं है कि वे खड़े नहीं है और उस पर देख सकते हैं, 1-2 परीक्षणों के भीतर पर चढ़ने के लिए सीखते हैं । बैरियर को चूहों के लिए दूसरी तरफ रखा जाना होगा, जिसमें विरोधी बांह को नामित एचआर आर्म के रूप में रखा जाएगा ।
      3. प्रत्येक माउस को स्टार्ट बॉक्स में रखें, डिवाइडर को हटा दें, और माउस को भूलभुलैया को पार करने और एचआर आर्म में 10 सेमी बैरियर वाले 10 मुफ्त विकल्प परीक्षणों के लिए एक हाथ का चयन करने की अनुमति दें।
      4. यदि माउस मानव संसाधन पक्ष चुनता है, तो यह अधिक से अधिक इनाम, 4 छर्रों को प्राप्त करने के लिए बाधा पर चढ़ जाएगा। अन्यथा, यह एलआर आर्म का चयन करेगा और बस कम इनाम, 2 छर्रों के लिए भूलभुलैया के फर्श को पार करेगा।
      5. चयनित हाथ रिकॉर्ड, और एक हाथ का चयन करने के लिए और सभी परीक्षणों के लिए गोली कप तक पहुंचने के लिए विलंबता। इसी तरह 5 मिनट के अंतर-परीक्षण अंतराल को बनाए रखने के लिए प्रति चक्र 4-6 कुल चूहों को घुमाएं।
        नोट: वाई-भूलभुलैया में 70% इथेनॉल स्प्रे करें और लगातार और प्रत्येक माउस के बीच में सूखी पोंछें।
    2. 15 सेमी बैरियर टेस्ट सत्र
      1. अगले दिन ऊपर (चरण 1.10.1) के रूप में सूचीबद्ध सभी चरणों को पूरा करें, लेकिन मानव संसाधन बांह में 15 सेमी लंबा बाधा के साथ।
    3. 20 सेमी बैरियर टेस्ट सत्र
      1. अगले दिन ऊपर (चरण 1.10.1) के रूप में सूचीबद्ध सभी चरणों को पूरा करें, लेकिन मानव संसाधन बांह में 20 सेमी लंबा बाधा के साथ।
        नोट: अनुभव से, 20 सेमी बाधा ऊंचाई से एसडीएस अतिसंवेदनशील या कॉर्ट प्रायोगिक चूहों (और यहां तक कि कई नियंत्रण चूहों) के बहुमत एलआर हाथ में अपनी प्रतिक्रियाओं को स्थानांतरित कर देंगे, क्योंकि वे लंबे 20 सेमी बाधा पर चढ़ने के लिए पर्याप्त प्रेरित नहीं हैं। इसके अलावा, वाई-भूलभुलैया दीवारों के किनारों पर इस बाधा के ऊपर से चढ़ने से चूहों को रोकने के लिए प्लेक्सीग्लास एडाप्टर का उपयोग करने की आवश्यकता हो सकती है। हम एक लम्बे वाई-भूलभुलैया के निर्माण की सिफारिश नहीं करते हैं, क्योंकि प्रयोगकर्ता के लिए प्रत्येक कप में छर्रों को फिर से भरना और प्रत्येक परीक्षण के बाद चूहों को हटाना अधिक कठिन हो जाता है।
    4. इनाम भेदभाव परीक्षण सत्र
      1. यह सुनिश्चित करने के लिए कि नियंत्रण और प्रायोगिक चूहों दोनों ही इनाम भेदभाव के पर्याप्त और समान लीवर प्रदर्शित करते हैं, भेदभाव परीक्षण सत्र का संचालन करते हैं ।
      2. उपरोक्त सभी चरणों (चरण 1.10.1) का पालन करें, लेकिन एलआर बांह में 10 सेमी बाधा रखें। अब, दोनों हथियारों में 10 सेमी बाधाएं होती हैं, और चूहों को 4 या 2 गोली इनाम प्राप्त करने के लिए या तो चढ़ने की आवश्यकता होगी।
      3. सभी 10 परीक्षणों के लिए रिकॉर्ड विलंबता और हाथ चयन।
        नोट: के रूप में चूहों को या तो इनाम प्राप्त करने के लिए एक ही प्रयास व्यय करना होगा, चूहों सबसे परीक्षणों में मानव संसाधन हाथ का चयन करना चाहिए । मानव संसाधन और एलआर हाथ का चयन करने के लिए विलंबता की जांच करने के लिए, प्रत्येक व्यक्ति माउस के लिए एक मतलब एचआर आर्म विलंबता और एक मतलब एलआर आर्म विलंबता की गणना करें। फिर, विलंबता की तुलना दो तरह के मिश्रित ANOVA का उपयोग कर दोनों हथियारों का चयन करने के लिए, एसडीएस (नियंत्रण, एसडीएस-अतिसंवेदनशील, एसडीएस-लचीला) के साथ बीच-विषय कारक के रूप में, और हाथ (एचआर आर्म, एलआर आर्म) के भीतर विषयों के कारक के रूप में ।

2. क्रोनिक गैर भेदभावपूर्ण सामाजिक हार तनाव (CNSDS)

  1. सीडी-1 चूहों में आक्रामक व्यवहार के लिए स्क्रीन
    1. 180 एस के लिए प्रत्येक सीडी-1 के घर पिंजरे में एक पुरुष और एक महिला C57BL/6J माउस रखें या जब तक सीडी-1 दोनों चूहों पर हमला करता है। इन C57BL6/J चूहों को भोले होने की जरूरत नहीं है, और किसी भी आगे के प्रयोगों में इस्तेमाल नहीं किया जाएगा । इस हमलावर स्क्रीनिंग चरण के दौरान, सीडी-1 चूहों के साथ C57BL/6J चूहों कोहाउस न करें।
      1. रिकॉर्ड विलंबता प्रत्येक सीडी-1 के लिए दोनों C57BL/6J चूहों पर हमला करने के लिए ।
      2. सभी सीडी-1 हमलावरों का चयन करें जो कुल 3 स्क्रीनिंग सत्रों में से लगातार सत्रों में 60 सेकंड के भीतर पुरुष और महिला C57BL/6J चूहों दोनों पर हमला करते हैं। दूसरों को घर पिंजरों में सह आवास के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
        नोट: सामाजिक हार का एक महत्वपूर्ण चेतावनी शारीरिक आक्रामकता का एक परिणाम के रूप में घायल होने की उपस्थिति है । स्क्रीनिंग और प्रयोगात्मक चरणों में प्रत्येक माउस को घावों के लिए जांचा जाना चाहिए और यदि छोटी त्वचा के घाव मौजूद हैं तो क्लोरो-हेक्साने कीटाणुनाशक के साथ इलाज किया जाना चाहिए। 1 सेमी से अधिक घाव वाले किसी भी माउस को प्रयोग से हटा दिया जाना चाहिए।
  2. चूहों को नियंत्रित करने और प्रयोगात्मक समूहों को असाइन करें।
    1. सभी भोले वयस्क पुरुष और महिला C57BL/6J चूहों इकट्ठा, साथ ही साथ सेवानिवृत्त पुरुष सीडी-1 प्रजनकों की जांच की, साथ ही सीडी-1 पुरुषों सह आवास में इस्तेमाल किया जाएगा ।
      1. बेतरतीब ढंग से वयस्क पुरुष और महिला C57BL/6J चूहों को नियंत्रित करने या प्रयोगात्मक स्थितियों को आवंटित करें । प्रत्येक पुरुष और महिला सीएनएसडीएस प्रायोगिक समूह में सभी सामाजिक हार सत्रों के लिए जोड़ा जाएगा । सीएनएसडीएस नियंत्रण समूह में पुरुष और महिलाएं प्रत्येक दिन घुमाएंगे।
      2. सीडी-1 पुरुषों को सामाजिक हार सत्रों में इस्तेमाल किया जा करने के लिए आवंटित करें या प्रत्येक सत्र के बाद प्रयोगात्मक पुरुषों और महिलाओं के साथ सह-घर में रखे जाएं, जो C57BL/6J पुरुष और महिला चूहों की प्रत्येक जोड़ी के लिए दैनिक वैकल्पिक होगा ।
  3. क्रोनिक गैर भेदभावपूर्ण सामाजिक हार तनाव (CNSDS)
    1. सभी सीडी-1 पुरुषों, सीएनएसडीएस नियंत्रण पुरुष और महिला C57BL/6J चूहों, और CNSDS प्रायोगिक पुरुष और महिला C57BL/6J चूहों सहित समर्पित सामाजिक हार कमरे में सभी चूहों लाओ ।
      1. सीडी के 4-6 पिंजरों संरेखित-C57BL/6J पुरुषों और महिलाओं के साथ सीडी-1 पिंजरों के साथ सामने और C57BL/6J पिंजरों के पीछे ।
      2. पिंजरे आईडी टैग के साथ इंगित करें कि किस माउस पर हमला किया जा रहा है और फिर सभी चूहों के संगठन को सुनिश्चित करने के लिए किस सीडी-1 के साथ सह-घर में रखा गया है।
        नोट: पहले दिन प्रयोगों शुरू करने के बाद, चूहों शेष 9 हार सत्रों के लिए घुमाया जा सकता है जैसे कि प्रत्येक C57BL/6J पुरुष और महिला जोड़ी प्रत्येक सत्र के लिए बाईं ओर एक पिंजरे घुमाया जाता है । यह हर सत्र में उपन्यास सीडी-1एस के साथ एक नई बातचीत के लिए अनुमति देता है।
    2. सीएनएसडीएस प्रायोगिक समूह प्रक्रिया
      1. एक वयस्क पुरुष और एक वयस्क महिला C57BL/6J माउस एक 5 मिनट सामाजिक हार सत्र के लिए प्रत्येक सीडी-1 हमलावर पुरुष के घर पिंजरे में रखें ।
      2. रिकॉर्ड हमले विलंबता और दोनों पुरुष और महिला प्रयोगात्मक C57BL/6J चूहों के लिए हमले की आवृत्ति ।
      3. 5 मिनट के बाद, पुरुष C57BL/6J माउस को हटा दें और सह-रखे गए सीडी-1 पुरुष के पिंजरे में रखें, जो एक स्पष्ट, छिद्रित प्लेक्सीग्लास बाधा से अलग है। एक समान स्पष्ट, छिद्रित प्लेक्सीग्लास बाधा के साथ अलग से हमला सीडी-1 और महिला C57BL/6J माउस। वैकल्पिक चाहे पुरुष या महिला C57BL/6J माउस हमलावर सीडी-1 प्रत्येक दिन के साथ रखे जाते हैं ।
        नोट: प्रत्येक दैनिक 5 मिनट की बातचीत के बाद प्रत्येक माउस चोटों और घावों के लिए मूल्यांकन किया जाएगा अगर 1 सेमी से कम इलाज किया । 1 सेमी से बड़ा कोई भी घाव माउस को हटाने और तत्काल इच्छामृत्यु में परिणाम देगा। इस प्रकार, दोनों पुरुष और महिला प्रयोगात्मक चूहों को 5 दिनों के लिए सीडी-1 हमलावर के साथ और शेष 5 दिनों के लिए हमले के सत्र में उपयोग नहीं किए गए उपन्यास सीडी-1 के साथ सह-घर में रखे जाते हैं। स्पष्ट, छिद्रित प्लेक्सीग्लास बाधाएं शारीरिक बातचीत को रोकती हैं लेकिन सत्रों के बीच 24 घंटों में सीडी-1 हमलावर के साथ संवेदी संपर्क की अनुमति देती हैं। योनि लावगे हर दिन हार के बाद लगभग 30 मिनट सभी मादा चूहों पर किया जा सकता है जैसा कि पहले28वर्णित है ।
    3. सीएनएसडीएस नियंत्रण समूह प्रक्रिया
      1. एक नियंत्रण पुरुष C57BL/6J माउस के घर पिंजरे में एक नियंत्रण महिला रखें ।
      2. 5 मिनट के बाद, चूहों को अलग करें और चूहों के बीच एक स्पष्ट, छिद्रित प्लेक्सीग्लास डिवाइडर रखें।
      3. कॉलोनी के कमरे में चूहों को वापस करें और सीएनएसडीएस प्रायोगिक पिंजरों के रूप में एक अलग शेल्फ पर रखें। कॉलोनी के कमरे में हमने अलमारियों को नामित किया है जहां तनावग्रस्त चूहों को कॉलोनी के कमरे में अन्य चूहों से अलग रखा जाता है। इसके अतिरिक्त, प्रभाव गैर में देखा जा सकता है जोर दिया चूहों अगर वे आक्रामकता जगह ले देखा, के रूप में vicarious सामाजिक हार प्रतिमान30 में देखा जाता है
      4. प्रत्येक नियंत्रण बातचीत के दौरान किसी भी हमले या बढ़ते व्यवहार पर ध्यान दें।
    4. नियंत्रण पुरुष और महिला चूहों बाद के दिनों में एक नई विशिष्ट के लिए शुरू किया जाएगा के रूप में पारंपरिक सामाजिक हार तनाव नियंत्रण समूहों में किया जाता है । सीएनएसडीएस नियंत्रण और प्रायोगिक सत्रों के लगातार 10 दिन पूरे करें।
      1. 10वें और अंतिम नियंत्रण या प्रयोगात्मक सीएनएसडीएस सत्र को पूरा करने के बाद, सभी चूहों को सह-घर करें और सभी व्यवहार परीक्षणों में इस सह-आवास को बनाए रखें। प्रत्येक पिंजरे में 2 चूहे शामिल होंगे जो संवेदी जोखिम की अनुमति देने के लिए प्लेक्सीग्लास डिवाइडर के दोनों ओर अलग होते हैं। नियंत्रण चूहों को अन्य विपरीत लिंग नियंत्रण चूहों के साथ रखे जाते हैं, जबकि प्रयोगात्मक चूहों को विपरीत लिंग प्रयोगात्मक चूहों के साथ सह-रखे जाते हैं।
      2. प्रत्येक नियंत्रण C57BL/6J महिला को नियंत्रण C57BL/6J पुरुष के साथ सह-घर में रखा गया है, जिसमें दो चूहों को अलग करने के लिए पिंजरे में रखा गया एक स्पष्ट, प्लेक्सीग्लास डिवाइडर था ।th
      3. अंतिम हार सत्र के लगभग 24 घंटे बाद यह निर्धारित करने के लिए एक मानक सामाजिक संपर्क परीक्षण चलाते हैं कि क्या सीएनएसडीएस नियंत्रण की तुलना में एक उपन्यास सीडी-1 माउस के साथ सामाजिक व्यवहार को कम करता है, और चूहों को तनाव24,,29के लिए "लचीला" या "अतिसंवेदनशील" स्तरित करता है।
    5. वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य सहित अन्य व्यवहारों में सीएनएसडीएस नियंत्रण और प्रायोगिक पुरुष और महिला चूहों का परीक्षण करें, और सीएनएसडीएस समूह को सीएनएसडीएस-लचीला और सीएनएसडीएस-अतिसंवेदनशील समूहों में स्तरीकृत करें।
  4. सामाजिक संपर्क परीक्षण
    1. सामाजिक इंटरैक्शन टेस्ट के लिए प्रारंभिक सेटअप
      1. अंतिम सीएनएसडीएस हार सत्र के 24 घंटे बाद, एक सामाजिक संपर्क परीक्षण आयोजित करें।
      2. सभी जोड़ी-रखे नियंत्रण और प्रयोगात्मक चूहों, साथ ही साथ एक उपन्यास सीडी-1 पुरुष सीएनएसडीएस प्रतिमान में इस्तेमाल नहीं ले लो, एक अलग व्यवहार कमरे में एक सामाजिक बातचीत परीक्षण चलाने के लिए ।
      3. एक समर्पित कंप्यूटर पर चल रहे व्यवहार ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर (जैसे, EthoVision) से जुड़े रिकॉर्डिंग कैमरे के नीचे एक मानक ओपन फील्ड चैंबर (75 सेमी x 75 सेमी) स्थापित करें।
      4. एक इंटरैक्शन कंटेनर (छोटे, छिद्रित प्लेक्सीग्लास कंटेनर लगभग 10 सेमी x 10 सेमी x 10 सेमी) के आसपास 24 सेमी x 24 सेमी सामाजिक संपर्क क्षेत्र के साथ एक नया प्रयोग स्थापित करें जो लगातार 2.5 मिनट के परीक्षणों के दूसरे में, खुले मैदान की एक दीवार के साथ उपन्यास सीडी-1 को घर देगा। इस प्रकार, एक इंटरैक्शन जोन 7 सेमी चौड़ा कंटेनर आवास उपन्यास सीडी-1 माउस को घेरे हुए है।
    2. सामाजिक संपर्क परीक्षण में एक माउस चल रहा है
      1. कोई सीडी-1 मौजूद के साथ एक 2.5 मिनट के परीक्षण के लिए खुले मैदान के एक दूर कोने में प्रत्येक माउस रखें और रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर प्रोग्राम शुरू करते हैं।
        नोट: ध्यान रखें कि बातचीत कंटेनर खुले क्षेत्र की एक दीवार के केंद्र में रखा जाना चाहिए और इस पहले परीक्षण के लिए कोई सीडी-1 माउस होते हैं ।
      2. 2.5 मिनट के बाद, माउस को अपने घर के पिंजरे में वापस हटा दें। 70% इथेनॉल के साथ खुले मैदान को साफ करें।
      3. उपन्यास सीडी-1 पुरुष को खुले मैदान की एक दीवार के बीच में एक दूसरे छिद्रित प्लेक्सीग्लास घन में रखें।
      4. फिर, माउस को दूसरे 2.5 मिनट के परीक्षण के लिए खुले मैदान के कोने में रखें, अब सीडी-1 के साथ मौजूद है, और रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर प्रोग्राम शुरू करें।
      5. माउस निकालें और इसे वापस अपने घर पिंजरे में रखें। सीडी-1 निकालें और इसे वापस अपने घर पिंजरे में रखें। 70% इथेनॉल के साथ खुले मैदान को साफ करें।
    3. शेष सीएनएसडीएस नियंत्रण और प्रायोगिक चूहों को चलाएं और इंटरैक्शन रेशियो की गणना करें।
      1. प्रत्येक सीएनएसडीएस नियंत्रण और प्रायोगिक माउस के लिए परीक्षण 1 और परीक्षण 2 दोनों में इंटरैक्शन जोन में बिताए गए समय की मात्रा निर्धारित करने के लिए अन्य सभी चूहों के साथ इस प्रक्रिया को दोहराएं।
      2. एक इंटरैक्शन अनुपात की गणना करने के लिए, निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके परीक्षण 2 (सीडी-1 वर्तमान) बनाम परीक्षण 1 (सीडी-1 अनुपस्थित) में सामाजिक इंटरैक्शन जोन में बिताए गए समय की तुलना करें:
        इंटरैक्शन रेशियो = (ट्रायल में इंटरेक्शन जोन में समय 2) /(ट्रायल में इंटरेक्शन जोन में समय 1)
    4. चूहों को "सीएनएसडीएस-लचीला" या "सीएनएसडीएस-अतिसंवेदनशील" के रूप में स्तरीकृत करें। लचीला चूहों का एक इंटरैक्शन अनुपात और 1.0 है, जबकि अतिसंवेदनशील चूहों का इंटरैक्शन अनुपात है <=1.0।
      1. वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य या अन्य व्यवहार परीक्षणों जैसे बाद के व्यवहार उपायों में, इन सीएनएसडीएस-लचीला और सीएनएसडीएस-अतिसंवेदनशील फेनोटाइप में सीएनएसडीएस प्रायोगिक चूहों को उप-विभाजित करें।
      2. इस प्रकार, महिलाओं के लिए, सीएनएसडीएस नियंत्रण, सीएनएसडीएस प्रायोगिक-लचीला, और सीएनएसडीएस प्रायोगिक-अतिसंवेदनशील समूहों के बीच एक तरफा एनओवीए आयोजित किया जा सकता है, जिसमें उचित समूहों के बीच मतभेदों को निर्धारित करने के लिए पोस्ट-हॉक तुलना की जा सकती है।
      3. सेक्स अंतर तुलना के लिए, सीएनएसडीएस (नियंत्रण, लचीला, अतिसंवेदनशील) और सेक्स (पुरुष, महिला) के साथ दो तरह के ANOVAs का संचालन के बीच विषयों कारकों के रूप में । जहां उचित हो, वहां तदर्थ तुलनाओं का उपयोग करें।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

क्रोनिक कॉर्ट को 4 सप्ताह के लिए प्रशासित किया गया था जिसके बाद वाई-भूलभुलैया बाधा प्रशिक्षण और परीक्षण(चित्रा 1A)था। एक अलग पलटन में, 10 दिन एसडीएस प्रतिमान इसी तरह प्रशिक्षण और वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य(चित्रा 1C)में परीक्षण के बाद किया गया था, पुरुष चूहों में प्रयास से संबंधित विकल्प व्यवहार पर इन पुराने तनाव प्रतिमान के प्रभाव का निर्धारण करने के लिए । क्रोनिक कॉर्ट और एसडीएस दोनों ने टी-टेस्ट(टेबल 1)द्वारा निर्धारित वाहन चूहों और एसडीएस नियंत्रण चूहों की तुलना में शरीर के वजन को कम किया। इन चूहों ने परीक्षण(तालिका 1)में कम मतलब घर पिंजरे लैब चाउ का भी सेवन किया।

कॉर्ट पलटन में, के बीच-विषयों के कारक और सप्ताह के रूप में CORT के साथ एक मिश्रित ANOVA के रूप में विषयों कारक से संकेत मिलता है कि वाहन और कॉर्ट प्रशासित चूहों ने उपचार के 4 सप्ताह के साथ-साथ व्यवहार परीक्षण के 3 सप्ताह (7 सप्ताह कुल)(चित्रा 1B)में तरल की एक समान मात्रा का सेवन किया । एसडीएस पलटन में, नियंत्रण और प्रायोगिक पुरुषों ने एसडीएस प्रोटोकॉल के 10 दिन पूरे किए, और एक सामाजिक संपर्क परीक्षण का उपयोग करके एसडीएस प्रोटोकॉल की संवेदनशीलता के लिए मूल्यांकन किया गया, जहां एक उपन्यास सीडी-1 पुरुष के साथ बातचीत करने में समय बिताया गया सीडी-1 वर्तमान24के बिना इंटरैक्शन जोन में समय की तुलना में समय की तुलना में किया गया था। एक तरह से ANOVA संकेत दिया है कि एसडीएस अतिसंवेदनशील चूहों (६०%), या तो लचीला चूहों (४०%) की तुलना में एक दुर्अनुकूल उत्पादन या एसडीएस(चित्रा 1D)के संपर्क में नहीं आने वाले चूहों को नियंत्रित करें। विशेष रूप से, एसडीएस-अतिसंवेदनशील चूहों एसडीएस-लचीला और नियंत्रण चूहों की तुलना में एक उपन्यास सीडी-1 माउस युक्त इंटरैक्शन जोन में बिताए गए समय में कमी प्रदर्शित करते हैं।

फिर, हम दोनों CORT (प्रयोगात्मक और नियंत्रण चूहों) और एसडीएस (अतिसंवेदनशील और नियंत्रण) Y-भूलभुलैया बाधा कार्य(चित्रा 2A)में साथियों को प्रशिक्षित किया । हम परीक्षणों की संख्या है कि नियंत्रण और प्रयोगात्मक चूहों के लिए एक 4 गोली इनाम के लिए एक बाधा पर चढ़ने के प्रयास व्यय होगा मापा, बनाम Y-भूलभुलैया जो केवल 2 छर्रों निहित है, लेकिन चढ़ाई करने के लिए कोई बाधा विशेष रुप से प्रदर्शित की दूसरी बांह का चयन । एसडीएस के लिए, एसडीएस (नियंत्रण, एसडीएस-अतिसंवेदनशील, एसडीएस-लचीला) के साथ एक दो तरह से मिश्रित ANOVA के साथ बीच-विषय कारक के रूप में, और हाथ (एचआर आर्म, एलआर आर्म) के रूप में भीतर-विषयों के कारक का उपयोग वाई-भूलभुलैया में सरल प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए किया गया था। क्रोनिक कॉर्ट के लिए, कॉर्ट प्रशासन (वाहन, कॉर्ट) के साथ एक दो तरह से मिश्रित ANOVA, बीच-विषयों के कारक के रूप में, और हाथ (एचआर, आर्म, एलआर आर्म) के भीतर के विषयों के कारक के रूप में। पुरानी कॉर्ट और एसडीएस दोनों ने सरल जवाब में बदलाव का उत्पादन किया जब बाधा ऊंचाई 15 सेमी और 20 सेमी(चित्रा 2B और चित्रा 2C)तक बढ़ गई । न तो जवाब दिया जब केवल एक 10 सेमी बाधा मानव संसाधन बांह में था । इसके अलावा, परीक्षण के बाद एक इनाम भेदभाव सत्र में, सभी चूहों मानव संसाधन बांह के लिए इसी तरह जवाब दिया जब एक 10 सेमी बाधा दोनों मानव संसाधन और एलआर बाहों में रखा गया था । अंत में, के बीच विषयों कारक और मानव संसाधन या एलआर हाथ के रूप में के रूप में CORT या एसडीएस के साथ दो तरह ANOVAs के भीतर विषयों कारक से पता चलता है कि एचआर और एलआर हाथ 15 सेमी बाधा के साथ विलंबता CORT प्रशासन द्वारा प्रभावित नहीं था, और दोनों एलआर और मानव संसाधन हथियारों(चित्रा 3)के साथ दोनों समूहों के लिए समान था । इस प्रकार, क्रोनिक कॉर्ट और एसडीएस पुरुष चूहों में वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य में सरल प्रतिक्रिया को मजबूती से स्थानांतरित करते हैं।

महत्वपूर्ण बात, यदि क्रोनिक कॉर्ट या एसडीएस वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य(चित्रा 4)के सीखने को बाधित करता है, तो ये चूहे बाधा परिणामों की बाद की व्याख्या को प्रभावित करते हुए मुफ्त विकल्प प्रशिक्षण सत्रों में मापदंड तक पहुंचने में विफल हो सकते हैं। इसलिए, हम इस अंतर को प्रदर्शित करने वाले संभावित नकारात्मक प्रतिनिधि परिणाम दिखाते हैं, जो अलग-अलग स्वतंत्र नमूनों टी-परीक्षणों(चित्रा 4)का उपयोग करके मूल्यांकन किया जाता है।

सीएनएसडीएस प्रक्रिया पुरुष और महिला C57BL/6J अतिसंवेदनशील चूहों(चित्रा 5A)दोनों में एक मजबूत कुरूप फेनोटाइप पैदा करती है । चूहों को लचीला (38.3%) और अतिसंवेदनशील (61.7%) आबादी (चित्रा 5B),जो आगे सेक्स द्वारा उप विभाजित किया जा सकता है (पुरुषों: ४३.३% लचीला, ५६.७% अतिसंवेदनशील; महिलाओं: ३६.७% लचीला, ६३.३% अतिसंवेदनशील), CNSDS नियंत्रण, CNSDS प्रयोगात्मक लचीला, और CNSDS प्रयोगात्मक-अतिसंवेदनशील समूहों के बीच एक तरह से ANOVAs का उपयोग कर । हालांकि यह संशोधित प्रतिमान परिहार व्यवहार28में एसडीएस के रूप में इसी तरह के दुर्अनुकूली प्रभाव पैदा करता है, यह अभी तक अनुवाद-प्रासंगिक इनाम और प्रेरणा से संबंधित व्यवहार परीक्षणों जैसे वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य के संयोजन में लागू किया जाना है। पुरुषों और महिलाओं दोनों में वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य जैसे अनुवादात्मक प्रासंगिक व्यवहारों पर सीएनएसडीएस जैसे तनावों के प्रभावों का आकलन करना भविष्य के अध्ययनों के लिए आवश्यक है।

क्रोनिक कॉर्ट समूह शरीर का वजन (जी)   दैनिक भोजन दिया (जी)  
    मतलब एसईएम मतलब एसईएम
वाहन 26.3 0.75 2.8 0.086
कॉर्ट 22.4 0.58 2.4 0.065
सामाजिक हार तनाव
नियंत्रण 27.5 0.67 2.9 0.088
एसडीएस 23.8 0.66 2.5 0.074

तालिका 1: शरीर का वजन और भोजन की मात्रा दैनिक प्रदान की जाती है। वाहन और कॉर्ट प्रशासित चूहों, साथ ही नियंत्रण और एसडीएस चूहों को साप्ताहिक रूप से तौला गया और भोजन की मात्रा दर्ज की गई । औसत शरीर के वजन (जी) Y-भूलभुलैया परीक्षण भर में, और मतलब दैनिक भोजन (जी) दिया संकेत दिया जाता है ।

Figure 1
चित्रा 1: एसडीएस कम सामाजिक बातचीत की विशेषता एक अवसादग्रस्तता फेनोटाइप लाती है।
(क)योजनाबद्ध कॉर्ट और वाई-भूलभुलैया बाधा प्रोटोकॉल के लिए समय रेखा का चित्रण । (ख)वाहन और कॉर्ट प्रशासित चूहों में मात्रा खपत (एमएल/जी/डे) दिखाने वाले प्रतिनिधि डेटा । (ग)योजनाबद्ध एसडीएस और वाई-भूलभुलैया बाधा प्रोटोकॉल के लिए समय रेखा का चित्रण । (घ)एक प्रतिनिधि सामाजिक संपर्क परीक्षण में, एसडीएस अतिसंवेदनशील चूहों को कम समय या तो एसडीएस लचीला या नियंत्रण चूहों की तुलना में एक उपन्यास माउस के साथ बातचीत खर्च प्रदर्शित करते हैं । बार्स का मतलब है ± SEM. * पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: CORT और एसडीएस एक वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य में सरल प्रतिक्रिया बदलाव ।
}Aकॉर्ट और एसडीएस के लिए वाई-भूलभुलैया बैरियर टास्क की टाइमलाइन । (ख)क्रोनिक कॉर्ट 15 सेमी और 20 सेमी बैरियर हाइट्स पर एचआर आर्म सेलेक्शन को कम करता है । इस आंकड़े को डाइटरिच एट अल से संशोधित किया गया है । २०२०२१। (ग)प्रतिनिधि परिणाम यह प्रदर्शित करते हैं कि एसडीएस-अतिसंवेदनशील चूहे नियंत्रण या एसडीएस-लचीला चूहों की तुलना में 15 सेमी और 20 सेमी बैरियर ऊंचाई पर एचआर आर्म के चयन को कम करते हैं । बार्स का मतलब है ± SEM. * पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: वाई-भूलभुलैया विलंबता क्रोनिक कॉर्ट से प्रभावित नहीं है।
क्रोनिक कॉर्ट वाई-भूलभुलैया में या तो एलआर या एचआर हथियारों का चयन करने के लिए विलंबता को प्रभावित नहीं करता है। इसके अलावा, वाहन और कॉर्ट दोनों चूहे समान विलंबताओं के साथ एलआर या एचआर आर्म का चयन करते हैं। यह आंकड़ा Dieterich एट अल से फिर से मुद्रित है २०२०21। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: क्रोनिक कॉर्ट और एसडीएस मुफ्त विकल्प एचआर आर्म चयन को ख़राब करते हैं।
प्रतिनिधि परिणाम दिखा रहा है कि चूहों या तो पुरानी CORT या एसडीएस उजागर मुक्त विकल्प प्रशिक्षण में चूहों को नियंत्रित करने की तुलना में उच्च इनाम हाथ चयन की संख्या को कम करने, परिणामों की जटिल व्याख्या और/ बार्स का मतलब है ± SEM. * पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5: सीएनएसडीएस-उजागर पुरुष और महिला चूहों का स्तरीकरण अतिसंवेदनशील और लचीला आबादी में।
(क) सीएनएसडीएस प्रायोगिक और नियंत्रण प्रतिमान की योजनाबद्ध । यह आंकड़ा योह्न एट अल से फिर28से मुद्रित किया गया है। (ख) सीएनएसडीएस सीएनएसडीएस-लचीली (आरईएसएस) और सीएनएसडीएस-अतिसंवेदनशील (एसयूएस) चूहों का मजबूत स्तरीकरण करता है । यह आंकड़ा योह्न एट अल से फिर28से मुद्रित किया गया है। बार्स का मतलब ± SEM. * p< 0.05, **p< 0.01, ***p< 0.001, ****p< 0.0001। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

जबकि पुरानी कॉर्ट प्रतिमान पीने के पानी में एक निरंतर कॉर्ट खुराक प्रदान करता है, अनुभव से चूहों द्वारा खपत की गई मात्रा में कुछ परिवर्तनशीलता हो सकती है। इसके अलावा, खपत केवल कुल पिंजरे के लिए मूल्यांकन किया जा सकता है, और एक औसत पिंजरे में चूहों की संख्या के आधार पर लिया । इसके अतिरिक्त, बोतलों का वजन करते समय बिखराव हो सकता है, चूहों को व्यवहार परीक्षण के लिए स्थानांतरित करना, या ताजा पिंजरे में बदलते समय। हालांकि, ट्रैकिंग वाहन और कॉर्ट खपत अभी भी उपचार और व्यवहार परीक्षण के सप्ताह भर में संभव और सटीक है । हम दृढ़ता से प्रति सप्ताह या तो वाहन या कॉर्ट एक बार युक्त एक ताजा बोतल में बदलने की सलाह देते हैं, साथ ही बोतलों को तौलने और विनिमय करने के लिए निर्धारित समय को बनाए रखते हैं। उदाहरण के लिए, बोतलों का वजन और रिफिलिंग करते समय ताजा बोतलों में बदलना सोमवार को किया जा सकता है, और फिर गुरुवार या शुक्रवार को फिर से किए गए सभी बोतलों का वजन और रिफिलिंग करना। इसी तरह, प्रत्येक सप्ताह एक निर्धारित दिन पर एक ही समय में सभी चूहों का वजन करना सबसे अच्छा है। अंत में, यह बताना महत्वपूर्ण है कि यह कॉर्ट प्रतिमान एचपीए अक्ष द्वारा कोर्टिकोस्टेरोन के अंतर्जात उत्पादन को कुंद करता है। इस प्रकार, चूहों को व्यवहार परीक्षण के दौरान कॉर्ट पर रहना चाहिए जब तक कि उनका बलिदान न हो जाए। यदि चूहों को कॉर्ट से दूर ले जाया जाता है, तो उन्हें तीव्र अधिवृक्क अपर्याप्तता के एडिसोनियन संकट का सामना करना पड़ सकता है। वैकल्पिक प्रक्रियाओं ने 2-3 सप्ताह के कॉर्ट एक्सपोजर का उपयोग किया है, जिसके बाद कॉर्ट को प्रगतिशील रूप से प्रातः किया गया है और फिर लगभग 3-4 सप्ताह की व्यवहार परीक्षण खिड़की के रूप में अंतर्जात कॉर्ट का स्तर सामान्य17, 19,परलौटताहै।

वाई-भूलभुलैया बाधा कार्य में, एसडीएस प्रोटोकॉल(चित्रा 2 ए)का तुरंत पालन करते हुए भूलभुलैया आदत और प्रशिक्षण शुरू करना महत्वपूर्ण है। इस प्रयोगात्मक समय रेखा की एक संभावित चेतावनी यह है कि चूहों को पहले से ही हेरफेर के बाद प्रशिक्षित किया जाता है, जहां उन्हें प्रशिक्षण प्रदर्शन के आधार पर समान रूप से विभाजित किया जा सकता है। हालांकि, हमारे अनुभव प्रशिक्षण में बनाम से पहले कॉर्ट प्रशासन के बाद महत्वपूर्ण वाद्य व्यवहार16प्रभाव नहीं है । सभी चूहों को अच्छी तरह से प्रशिक्षित किया जाता है और बाधा परीक्षण के लिए आगे बढ़ने से पहले मानदंड (>70% एचआर आर्म चयन मुक्त विकल्प सत्रों में) तक पहुंचते हैं। चूहों को पहले भूलभुलैया के लिए ठीक से अभ्यित किया जाना चाहिए, इसलिए यह एक परिचित उपकरण बन जाता है, क्योंकि हमने पाया है कि यह बाद के प्रशिक्षण चरण में मदद करता है। जब प्रत्येक माउस को प्रशिक्षित करते हैं, तो प्रत्येक माउस के लिए डिज़ाइन किए गए उच्च और कम इनाम हथियारों को बनाए रखना महत्वपूर्ण है, इसलिए एक माउस 4 छर्रों की उम्मीद करने वाले हाथ को पार नहीं करता है और 2, या इसके विपरीत खोजता है। हम सभी नियंत्रण और एसडीएस चूहों के लिए प्रतिसंतुलित उच्च और कम इनाम हथियारों का संकेत देने वाली बड़ी कच्ची डेटा फ़ाइलों की कागज और डिजिटल प्रतियां दोनों रखने की सलाह देते हैं।

हमें विश्वास नहीं होता कि भूलभुलैया आकार (वाई-भूलभुलैया बनाम टी-भूलभुलैया) के सटीक विनिर्देशों के कारण भूलभुलैया के प्रदर्शन में अंतर है, और विश्वास है कि शोधकर्ताओं ने या तो प्रयास से संबंधित विकल्प व्यवहार प्रयोगों में उपयोग कर सकते हैं । इसके अलावा, हम पहले वाहन प्रशासित चूहों21में 10 सेमी की तुलना में 15 सेमी पर मानव संसाधन हाथ चयन में मामूली वृद्धि की सूचना दी है । हालांकि, शोधकर्ताओं को इसी तरह या कम मानव संसाधन हाथ चयन की उम्मीद करनी चाहिए क्योंकि बाधा ऊंचाई पिछले 15 सेमी बढ़ जाती है, क्योंकि 20 सेमी बैरियर चूहों द्वारा शायद ही कभी एचआर आर्म21का चयन किया जाता है।

इसके अलावा, भूलभुलैया को साफ करने और हर सत्र के बाद अवशिष्ट गंध को हटाने के लिए 70% इथेनॉल स्प्रे का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। हम चूहों को लगातार फैशन में चलाने की भी सलाह देते हैं ताकि सभी चूहों के लिए अपेक्षाकृत निरंतर अंतर-परीक्षण अंतराल हो। हम एक समय में लगभग 4-6 चूहों को साइकिल चलाने का सुझाव देते हैं, जो लगभग 5 मिनट का अंतराल देना चाहिए। अंत में, पिछले मुक्त विकल्प सत्र में, और सभी बाधा परीक्षण सत्रों में, सभी परीक्षणों में या तो हाथ का चयन करने के लिए विलंबता रिकॉर्ड करना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, चूहे कभी-कभी प्लेक्सीग्लास दीवारों के शीर्ष पर कूदने का प्रबंधन करते हैं, या बाधाओं के ऊपर से अधिक बार। यदि ऐसा होता है तो हम भूलभुलैया के किनारों के साथ लंबे प्लेक्सीग्लास दीवार एडाप्टर की सलाह देते हैं। ये प्लेक्सीग्लास के आयताकार टुकड़े (20 सेमी की चौड़ाई, 80 सेमी की लंबाई) हो सकते हैं। हम किसी भी परीक्षण को चिह्नित करते हैं जहां एक माउस 60 सेकंड के भीतर एक हाथ का चयन करने में विफल रहता है या एक हाथ का चयन करता है लेकिन एक लोप परीक्षण के रूप में भोजन छर्रों को नहीं खाता है। अंत में, दोनों पुरानी CORT और एसडीएस शरीर के वजन को कम कर सकते हैं जो परीक्षण के सप्ताह भर में खपत भोजन की मात्रा को प्रभावित करता है21। शोधकर्ताओं को नियमित रूप से चूहों का वजन करना चाहिए और घर के पिंजरे में दिए गए भोजन की मात्रा को समायोजित करने के लिए उनके मुक्त खिला शरीर के वजन के लगभग ९०% पर चूहों को बनाए रखने चाहिए ।

यहां हम पुरुष और महिला चूहों (चित्रा 5B) में तनाव अतिसंवेदनशील और लचीला आबादी को प्रेरित करने के लिए हाल ही में विकसित प्रतिमान, पुरानी गैर-भेदभावपूर्ण सामाजिक हार तनाव (सीएनएसडीएस)(चित्रा 5A)पर भी चर्चाकरते हैं। सीएनएसडीएस प्रतिमान का उपयोग तनाव या मनोदशा विकारों में रुचि रखने वाले पूर्व नैदानिक शोधकर्ताओं द्वारा किया जा सकता है। सीएनएसडीएस प्रतिमान में यह महत्वपूर्ण है कि प्रयोगात्मक महिलाओं पर प्रति सत्र कम से कम एक बार हमला किया जाता है। लगभग सभी सामाजिक हार सत्रों में प्रयोगात्मक पुरुषों पर कई बार हमला किया जाता है। प्रत्येक सीडी-1 हमलावर को सीएनएसडीएस प्रोटोकॉल शुरू करने से पहले पुरुष और महिला C57BL/6J चूहों दोनों के साथ कड़ाई से जांच की जानी चाहिए, साथ ही प्रत्येक सत्र में किसी भी और सभी हमलों को रिकॉर्ड करना चाहिए। जबकि हम सीएनएसडीएस पद्धति में दोहरी सेक्स नियंत्रण स्थिति का वर्णन करते हैं जहां एक पुरुष और एक महिला बातचीत करते हैं, तो कुछ के लिए इन नियंत्रण बातचीत के लिए एक अतिरिक्त पुरुष को शामिल करना उचित हो सकता है, इस प्रकार सीएनएसडीएस प्रक्रिया में उपयोग किए जाने वाले दो पुरुषों और एक महिला की नकल करना। यह वैकल्पिक नियंत्रण प्रक्रिया28से बचने के व्यवहार में चूहों के व्यवहार को प्रभावित नहीं करती है । इसके अतिरिक्त, एक सामाजिक संपर्क परीक्षण 10 दिन की हार प्रोटोकॉल के 24 घंटे बाद लागू किया जाना चाहिए दोनों विधि की प्रभावशीलता सुनिश्चित करने के लिए और या तो लचीला या CNSDS24के लिए अतिसंवेदनशील के रूप में पुरुष और महिला चूहों स्तरीय ।

सामाजिक संपर्क परीक्षण के आधार पर लचीला और अतिसंवेदनशील आबादी में चूहों को विभाजित करने के ऐतिहासिक दृष्टिकोण का उपयोग करने में एक मुद्दा यह है कि वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करके सभी घृणा व्यवहारों को सही ढंग से मापा नहीं जा सकता है। एक बातचीत स्कोर और gt;1 के साथ "लचीला" चूहों सीडी 1 माउस31आवास कंटेनर के आसपास विनम्र व्यवहार का प्रदर्शन किया जा सकता है । क्षेत्र के लिए सॉफ्टवेयर विकसित करना महत्वपूर्ण है जो ऐसे माइक्रोमोथियर्स को बेहतर तरीके से ट्रैक करता है। सरल व्यवहार विश्लेषण (सिम्बा32)जैसे उपकरण, जिन्हें गोल्डन लैब द्वारा कृंतक में जटिल सामाजिक व्यवहार के लिए व्यवहार वर्गीकृत करने की अनुमति देने के लिए विकसित किया गया था, इस संबंध में उपयोगी साबित हो सकता है।

सीएनएसडीएस प्रोटोकॉल के दौरान कुछ बढ़ते हो सकते हैं। हालांकि हमने इस प्रतिमान में कोई गर्भधारण नहीं देखा है, शोधकर्ताओं को इस संभावना के बारे में पता होना चाहिए ।

सीएनएसडीएस सहित सामाजिक हार प्रोटोकॉल की एक और सीमा, सामाजिक हार सत्रों को पूरा करने के बाद व्यवहार पर तनाव प्रभाव की जांच करने के लिए कथित तौर पर सीमित समय खिड़की है। इस प्रकार, हमने सभी आदत, प्रशिक्षण और परीक्षण सत्रों को 30 दिन की समय सीमा में फिट करने के लिए मौजूदा भूलभुलैया बाधा प्रोटोकॉल को अनुकूलित किया। हालांकि, यह कुछ चूहों के लिए समग्र प्रशिक्षण में तेजी आ सकती है, जो मुफ्त विकल्प सत्र(चित्रा 4)को पूरा करने के लिए आवश्यक उच्च इनाम हाथ चयन के लिए 70% मानदंड तक पहुंचने के लिए संघर्ष कर सकते हैं। इसके अलावा, उचित योजना के बिना किसी भी अन्य व्यवहार परीक्षणों को पूरा करने के लिए सीमित दिन उपलब्ध हैं। हालांकि, हाल के अध्ययनों से संकेत मिलता है कि सामाजिक हार तनाव मस्तिष्क और व्यवहार पर अधिक लगातार प्रभाव पैदा कर सकता है । मिज़ेक लैब के अध्ययनों से पता चलता है कि सामाजिक पराजय के 10 दिन तनाव चूहों में स्वैच्छिक शराब की खपत को कम से कम 4 सप्ताह तक चलने वाले31,33तक बढ़ा सकता है । सामाजिक हार प्रोटोकॉल हार सत्र का उपयोग करें जो 5-10 मिनट से कहीं भी रहते हैं। हम प्रयोगात्मक C57BL/6J चूहों28में चोटों की संभावना को कम करने के लिए सीएनएसडीएस के लिए 5 मिनट एक्सपोजर का उपयोग करते हैं । सीएनएसडीएस प्रोटोकॉल न्यूमैन और सहयोगियों द्वारा विकसित सामाजिक हार प्रोटोकॉल के लिए महिलाओं में तुलनीय परिणाम पैदा करता है, जिसमें C57BL/6J महिला चूहों निवासी स्विस वेबर चूहों28के संपर्क में हैं । सीएनएसडीएस के समान, सामाजिक हार प्रोटोकॉल की यह भिन्नता एक पुरानी तनाव फेनोटाइप को प्रेरित करने के लिए 5 मिनट की बातचीत के 10 दिनों का उपयोग करती है।

इन तरीकों का उपयोग यह जांचने के लिए किया जा सकता है कि चूहों में पुरानी तनाव प्रसंस्करण और प्रेरणा को कैसे प्रभावित करता है। दोनों इनाम प्रसंस्करण, और महिला विषयों, ऐतिहासिक रूप से पूर्व नैदानिक मूड विकार क्षेत्र में कम अध्ययन कर रहे हैं । भविष्य के अध्ययनों को पुरुष और महिला इनाम प्रेरणा पर पुराने तनाव के प्रभाव को निर्धारित करना चाहिए और लचीला बनाम अतिसंवेदनशील चूहों(चित्रा 5B)को स्तरीकृत करना चाहिए। यह जानना मूल्यवान होगा कि क्या यह स्तरीकरण वाई-भूलभुलैया बाधा प्रदर्शन पर अलग प्रभाव पैदा करता है जैसा कि परिहार व्यवहार में देखा जाता है, जैसे खुला मैदान, ऊंचा-प्लस भूलभुलैया, और नवीनता-दबा हुआ भोजन। भविष्य के अध्ययन इन पद्धतियों को अन्य तकनीकों, जैसे ऑप्टोजेनेटिक्स या ड्रेड तकनीक के साथ जोड़ सकते हैं, ताकि तंत्रिका सर्किटरी की जांच की जा सके जो तनाव प्रतिक्रिया या इनाम प्रेरणा की मध्यस्थता करते हैं।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखक वाई-भूलभुलैया, बाधाओं, और सामाजिक हार पिंजरों के निर्माण के लिए थॉमस ग्रेस का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । लेखक जे ली, करीना स्टेच्यू और प्राची श्रीवास्तव को डेटा संग्रह के साथ सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं । इस काम को एनआईएमएच ग्रांट आर01 MH112861 (बीएएस) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acrylic Sheet McMaster Carr 8560K215 Clear, 3/16" thick, 24" X 36"
Beta-cyclodextrin Sigma-Aldrich C4767 500 mg
C57BL/6J Mice Jackson Labs 000664 Adults age 7-8 weeks
Corticosterone Sigma-Aldrich C2505 or C27840 100 or 500 mg
Male CD-1 Mice Charles River 022 "Retired Breeders"
PVC Acrylic Sheet McMaster Carr 8560K215 White, 3/16" thick, 48" X 48"
Solidstate Ultrasonic Cleaner Fisher Scientific FS-28 Must reach 40 kHz
Steel Wire Cloth McMaster Carr 9219T143 1 ft X 2 ft

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kessler, R. C., et al. Lifetime and 12-month prevalence of DSM-III-R psychiatric disorders in the United States. Results from the National Comorbidity Survey. Arch Gen Psychiatry. 51 (1), 8-19 (1994).
  2. Breslau, N., Davis, G. C. Chronic stress and major depression. Archives of General Psychiatry. 43 (4), 309-314 (1986).
  3. Willner, P. Chronic mild stress (CMS) revisited: consistency and behavioural-neurobiological concordance in the effects of CMS. Neuropsychobiology. 52 (2), 90-110 (2005).
  4. Monleon, S., et al. Attenuation of sucrose consumption in mice by chronic mild stress and its restoration by imipramine. Psychopharmacology (Berl). 117 (4), 453-457 (1995).
  5. Willner, P., Towell, A., Sampson, D., Sophokleous, S., Muscat, R. Reduction of sucrose preference by chronic unpredictable mild stress, and its restoration by a tricyclic antidepressant. Psychopharmacology (Berl). 93 (3), 358-364 (1987).
  6. Berlin, I., Givry-Steiner, L., Lecrubier, Y., Puech, A. Measures of anhedonia and hedonic responses to sucrose in depressive and schizophrenic patients in comparison with healthy subjects. European psychiatry: the journal of the Association of European Psychiatrists. 13 (6), 303-309 (1998).
  7. Fawcett, J., Clark, D. C., Scheftner, W. A., Gibbons, R. D. Assessing Anhedonia in Psychiatric Patients: The Pleasure Scale. Archives of General Psychiatry. 40 (1), 79-84 (1983).
  8. Pardo, M., et al. Adenosine A2A receptor antagonism and genetic deletion attenuate the effects of dopamine D2 antagonism on effort-based decision making in mice. Neuropharmacology. 62 (5-6), 2068-2077 (2012).
  9. Salamone, J. D., Cousins, M. S., Bucher, S. Anhedonia or anergia? Effects of haloperidol and nucleus accumbens dopamine depletion on instrumental response selection in a T-maze cost/benefit procedure. Behav Brain Res. 65 (2), 221-229 (1994).
  10. Dienes, K. A., Hazel, N. A., Hammen, C. L. Cortisol secretion in depressed, and at-risk adults. Psychoneuroendocrinology. 38 (6), 927-940 (2013).
  11. Gotlib, I. H., Joormann, J., Minor, K. L., Hallmayer, J. HPA axis reactivity: a mechanism underlying the associations among 5-HTTLPR, stress, and depression. Biol Psychiatry. 63 (9), 847-851 (2008).
  12. Knorr, U., Vinberg, M., Kessing, L. V., Wetterslev, J. Salivary cortisol in depressed patients versus control persons: a systematic review and meta-analysis. Psychoneuroendocrinology. 35 (9), 1275-1286 (2010).
  13. Joels, M., Karst, H., Sarabdjitsingh, R. A. The stressed brain of humans and rodents. Acta Physiol (Oxf). 223 (2), 13066 (2018).
  14. Samuels, B. A., et al. Modeling treatment-resistant depression. Neuropharmacology. 61 (3), 408-413 (2011).
  15. David, D. J., et al. Neurogenesis-dependent and-independent effects of fluoxetine in an animal model of anxiety/depression. Neuron. 62 (4), 479-493 (2009).
  16. Dieterich, A., et al. Chronic corticosterone administration induces negative valence and impairs positive valence behaviors in mice. Translational psychiatry. 9 (1), 1-13 (2019).
  17. Gourley, S. L., Taylor, J. R. Recapitulation and reversal of a persistent depression-like syndrome in rodents. Current Protocols in Neuroscience. 49 (1), 31-39 (2009).
  18. Gourley, S. L., et al. Regionally specific regulation of ERK MAP kinase in a model of antidepressant-sensitive chronic depression. Biol Psychiatry. 63 (4), 353-359 (2008).
  19. Gourley, S. L., Wu, F. J., Taylor, J. R. Corticosterone regulates pERK1/2 map kinase in a chronic depression model. Annals of the New York Academy of Sciences. 1148 (1), 509-514 (2008).
  20. Mekiri, M., Gardier, A. M., David, D. J., Guilloux, J. P. Chronic corticosterone administration effects on behavioral emotionality in female c57bl6 mice. Experimental and clinical psychopharmacology. 25 (2), 94 (2017).
  21. Dieterich, A., et al. Chronic corticosterone shifts effort-related choice behavior in male mice. Psychopharmacology (Berl). , (2020).
  22. Shafiei, N., Gray, M., Viau, V., Floresco, S. B. Acute Stress Induces Selective Alterations in Cost/Benefit Decision-Making. Neuropsychopharmacology. 37 (10), 2194-2209 (2012).
  23. Treadway, M. T., Buckholtz, J. W., Schwartzman, A. N., Lambert, W. E., Zald, D. H. Worth the 'EEfRT'? The effort expenditure for rewards task as an objective measure of motivation and anhedonia. PLoS One. 4 (8), (2009).
  24. Golden, S. A., Covington, H. E., Berton, O., Russo, S. J. p. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nature protocols. 6 (8), 1183 (2011).
  25. Yohn, S. E., et al. The VMAT-2 inhibitor tetrabenazine alters effort-related decision making as measured by the T-maze barrier choice task: reversal with the adenosine A2A antagonist MSX-3 and the catecholamine uptake blocker bupropion. Psychopharmacology (Berl). 232 (7), 1313-1323 (2015).
  26. Harris, A. Z., et al. A novel method for chronic social defeat stress in female mice. Neuropsychopharmacology. 43 (6), 1276 (2018).
  27. Takahashi, A., et al. Establishment of a repeated social defeat stress model in female mice. Scientific Reports. 7 (1), 1-12 (2017).
  28. Yohn, C. N., et al. Chronic non-discriminatory social defeat is an effective chronic stress paradigm for both male and female mice. Neuropsychopharmacology. 44 (13), 2220-2229 (2019).
  29. Krishnan, V., et al. Molecular adaptations underlying susceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131 (2), 391-404 (2007).
  30. Iñiguez, S. D., et al. Vicarious Social Defeat Stress Induces Depression-Related Outcomes in Female Mice. Biol Psychiatry. 83 (1), 9-17 (2018).
  31. Newman, E. L., Leonard, M. Z., Arena, D. T., de Almeida, R. M., Miczek, K. A. Social defeat stress and escalation of cocaine and alcohol consumption: Focus on CRF. Neurobiology of Stress. 9, 151-165 (2018).
  32. Nilsson, S. R., et al. Simple Behavioral Analysis (SimBA) - an open source toolkit for computer classification of complex social behaviors in experimental animals. bioRxiv. , (2020).
  33. Newman, E. L., Leonard, M. Z., Arena, D. T., de Almeida, R. M. M., Miczek, K. A. Social defeat stress and escalation of cocaine and alcohol consumption: Focus on CRF. Neurobiology of Stress. 9, 151-165 (2018).

Tags

व्यवहार अंक १६२ अवसाद पुरानी तनाव प्रयास से संबंधित विकल्प सामाजिक हार तनाव कोर्टिकोस्टेरोन मूड विकार इनाम सेक्स मतभेद
चूहों में वाई-भूलभुलैया बैरियर टास्क में क्रोनिक तनाव प्रयास से संबंधित विकल्प व्यवहार में बदलाव
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dieterich, A., Yohn, C. N., Samuels, … More

Dieterich, A., Yohn, C. N., Samuels, B. A. Chronic Stress Shifts Effort-Related Choice Behavior in a Y-Maze Barrier Task in Mice. J. Vis. Exp. (162), e61548, doi:10.3791/61548 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter