Summary
يصف هذا البروتوكول طريقة فعالة لتحسين تكنولوجيا معالجة Tiebangchui المعالجة بنبيذ الشعير في المرتفعات بناء على سطح استجابة تصميم Box-Behnken جنبا إلى جنب مع طريقة الإنتروبيا.
Abstract
معالجة الأدوية العرقية السامة لها أهمية كبيرة لتطبيقها السريري الآمن. وبالتالي ، ينبغي معالجة قيود المعالجة التقليدية ، ويجب توحيد طريقة معالجة الأدوية العرقية باستخدام طرق البحث الحديثة. في هذه الدراسة ، تم تحسين تقنية معالجة الدواء التبتي الشائع الاستخدام Tiebangchui (TBC) ، الجذر المجفف لبندول Aconitum Busch ، المعالج بنبيذ الشعير في المرتفعات. تم استخدام محتوى قلويد ديستر-ديتيربينويد (DDA) (أكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، 3-أسيتيلاكونيتين) وقلويد أحادي-ديتيربينويد (MDA) (بنزويلاكونين) كمؤشرات تقييم ، وتم تحديد معامل الوزن لكل مؤشر تقييم بواسطة طريقة الإنتروبيا.
تم استخدام اختبار العامل الفردي وتصميم Box-Behnken في التحقيق في تأثير النسبة بين نبيذ الشعير في المرتفعات و TBC ، وسمك شريحة TBC ، ووقت المعالجة. تم إجراء تسجيل شامل وفقا للوزن الموضوعي لكل مؤشر تم تحديده بواسطة طريقة الإنتروبيا. كانت ظروف المعالجة المثلى ل TBC مع نبيذ الشعير في المرتفعات كما يلي: كمية نبيذ الشعير في المرتفعات هي خمسة أضعاف كمية TBC ، ووقت النقع 24 ساعة ، وسمك TBC 1.5 سم. أظهرت النتائج أن الانحراف المعياري النسبي بين اختبار التحقق والقيمة المتوقعة كان أقل من 2.55٪ وأن تقنية المعالجة المثلى ل TBC المعالجة بنبيذ الشعير في المرتفعات بسيطة وممكنة ومستقرة ، وبالتالي يمكن أن توفر مرجعا للإنتاج الصناعي.
Introduction
Tiebangchui (TBC) ، الجذر المجفف لبندول Aconitum Busch ، هو دواء تبتي معروف وتم تسجيله في البداية في الكتاب الطبي التبتي الكلاسيكي "أربعة التانترا الطبية"1,2. وفقا ل "معايير الأدوية لوزارة الصحة في جمهورية الصين الشعبية (الطب التبتي)" ، فإن TBC فعال في طرد البرد وتخفيف الألم وتبديد الرياح وتهدئة الصدمة ، ويستخدم بشكل شائع لعلاج التهاب المفاصل الروماتويدي في العيادات3،4،5.
يحتوي TBC بشكل أساسي على قلويدات ، بما في ذلك قلويدات ديستر-ديتيربينويد شديدة السمية (DDAs) ، وقلويدات أحادية الإستر ثنائية التربينويد متوسطة السمية (MDAs)6،7،8. هذه المكونات الكيميائية هي مكونات نشطة ذات تأثيرات طبية ولكنها سامة. أحد أشهر المكونات النشطة والسامة ، الأكونيتين ، يسبب التسمم عندما يتجاوز 1 ملغ9. لذلك ، قد يؤدي الاستخدام غير السليم أو المفرط ل TBC إلى التسمم وحتى الوفاة ، كما أن توهين السمية والاحتفاظ بفعالية TBC أمر بالغ الأهمية لتطبيقه السريريالآمن 10،11.
المعالجة هي طريقة فعالة لإزالة السموم TBC. وفقا لكتب الطب التبتي القديمة ، فإن المعالجة باستخدام نبيذ الشعير في المرتفعات هي طريقة فعالة لتخفيف السمية والحفاظ على فعالية TBC. ينقع TBC في نبيذ الشعير في المرتفعات ، ويخزن لليلة واحدة ، ويجفف ، ويضاف إلى الأدوية12. ومع ذلك ، نادرا ما يتم الإبلاغ عن تكنولوجيا المعالجة المحددة والعوامل المؤثرة المحتملة ، وغالبا ما تعتمد عملية المعالجة التقليدية على الخبرة وتفتقر إلى الأساليب الموحدة. وبالتالي ، هناك حاجة إلى الأساليب العلمية والتكنولوجية الحديثة لتحسين وتوحيد عملية المعالجة.
تستخدم طريقة تصميم Box-Behnken في التحقيق في التفاعلات بين العوامل المختلفة وتأثيرها على التسجيل الشامل من خلال التركيب متعدد الحدود التربيعي. يسمح هذا التصميم بالملاحظة البديهية للظروف المثلى وقد استخدم على نطاق واسع في مجال الصيدلة13. على سبيل المثال ، نجحت طريقة تصميم Box-Behnken ، القائمة على طريقة الإنتروبيا ، في تحسين تقنية معالجة القلي السريع بخل Curcuma Longa Radix14. في هذه الدراسة ، تم استخدام التصميم التجريبي لسطح استجابة Box-Behnken جنبا إلى جنب مع طريقة الإنتروبيا في تحسين تكنولوجيا معالجة TBC المعالجة بنبيذ الشعير في المرتفعات. من المتوقع أن تضمن تقنية المعالجة المحسنة مراقبة الجودة والاستخدام السريري الآمن.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
في هذه الدراسة ، تم تحسين تقنية معالجة TBC المعالجة بنبيذ الشعير في المرتفعات بتصميم Box-Behnken جنبا إلى جنب مع طريقة الإنتروبيا. تم استخدام محتوى DDA و MDA كمؤشرات تقييم ، وتم تحديد معامل الوزن لكل مؤشر تقييم بواسطة طريقة الإنتروبيا.
1. التحضير التجريبي
- تحضير نبيذ الشعير المرتفعات15.
- خذ 500.00 جم من أرز الشعير في المرتفعات السوداء وأضف خمسة أضعاف كمية الماء. يطهى الأرز حتى يتم امتصاص الماء المتبقي (~ 2 ساعة). اسكبه ، وانتظر حتى تنخفض درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية ، وأضف 4 جم من Jiuqu (انظر جدول المواد) ، واخلطها جيدا ، وأغلق العلبة ، ولف الحاوية بالصوف القطني ، واتركها تطهى لمدة 7 أيام.
- أضف 300 مل من الماء في اليوم السابع وأغلقه مرة أخرى. في اليوم 8 ، ابدأ في إزالة النبيذ واستبدله ب 300 مل من الماء بعد ذلك. ختم وتخمر لمدة 1 يوم ، واتخاذ النبيذ ، وإضافة 300 مل من الماء مرة أخرى. كرر هذا الإجراء ثلاث مرات والجمع بين المشروبات الكحولية.
- يغلى المزيج ، ثم تخفف الحرارة على نار هادئة ، ويستمر في الطهي حتى يتم امتصاص الماء المتبقي.
- لإعداد المنتجات المصنعة ، تزن بدقة TBC في حاوية ، إضافة نبيذ الشعير المرتفعات ، ونقع لمدة 1 يوم. ثم تجف في فرن تجفيف كهربائي بدرجة حرارة ثابتة.
ملاحظة: يجب أن تكون درجة حرارة التجفيف أقل من 40 درجة مئوية لتجنب التغييرات في تكوين قلويد. - تحضير محلول عينة الاختبار.
- قم بوزن مسحوق المنتج المعالج TBC بدقة (2 جم) في دورق مخروطي ، وأضف محلول الأمونيا بنسبة 40٪ ، وقم بإجراء الاستخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية باستخدام مذيبات مختلطة من الأيزوبروبانول إيثيل (1: 1) (50 مل) (الطاقة: 200 واط ؛ التردد: 40 كيلو هرتز ؛ درجة الحرارة: 40 درجة مئوية) لمدة 30 دقيقة.
ملاحظة: لتحضير محلول الأمونيا بنسبة 40٪ ، انقل 40 مل من الأمونيا إلى دورق حجمي سعة 100 مل ثم خففه بالماء النقي. - اضبط المحلول المستخرج على الوزن الأصلي عن طريق إضافة خليط أسيتات الأيزوبروبانول والإيثيل (1: 1 فولت / فولت).
- انقل المحلول المستخرج بدقة (25 مل) إلى دورق مستدير القاع لاستعادة المذيب تحت ضغط منخفض حتى يجف.
- أخيرا ، انقل محلول حمض الهيدروكلوريك والميثانول بنسبة 0.05٪ لإذابة البقايا من الخطوة 1.3.3 في دورق حجمي سعة 5 مل وتخفيفه بمحلول هيدروكلوريد الميثانول 0.05٪. قم بتصفية المحلول من خلال مرشح غشاء صغير يسهل اختراقه 0.22 ميكرومتر قبل الحقن في أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC).
ملاحظة: تحضير 0.05٪ حمض هيدروكلوريد الميثانول عن طريق إضافة 0.05 مل من حمض الهيدروكلوريك إلى دورق حجمي 100 مل ، ثم تخفيفه بالميثانول.
- قم بوزن مسحوق المنتج المعالج TBC بدقة (2 جم) في دورق مخروطي ، وأضف محلول الأمونيا بنسبة 40٪ ، وقم بإجراء الاستخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية باستخدام مذيبات مختلطة من الأيزوبروبانول إيثيل (1: 1) (50 مل) (الطاقة: 200 واط ؛ التردد: 40 كيلو هرتز ؛ درجة الحرارة: 40 درجة مئوية) لمدة 30 دقيقة.
- قم بإعداد محلول قياسي عن طريق وزن 5.18 مجم من البنزولاكونين ، و 13.13 مجم من الأكونيتين ، و 10.05 مجم من 3-ديوكسياكونيتين ، و 10.09 مجم من 3-أسيتيلاكونيتين بدقة ، ثم ضع المواد الصلبة في دورق حجمي سعة 5 مل بشكل فردي. تمييع مع 0.05 ٪ محلول هيدروكلوريد الميثانول.
2. حالة الكروماتوغرافيا
- قم بإعداد الظروف الكروماتوغرافية كما هو موضح في الجدول 1 ل HPLC. وترد تفاصيل الأدوات المستخدمة في جدول المواد.
3. اختبار قدرة النظام على التكيف
- نطاق الخطية
ملاحظة: أولا ، استخدمنا HPLC لتحديد مناطق الذروة للبنزولاكونيتين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-أسيتيلاكونيتين في العينة ، ثم حددنا عشوائيا منطقة الذروة لتركيز واحد معروف من المحلول القياسي. بعد ذلك ، قارنا الفرق بين منطقتي ذروة (محلول العينة والمحلول القياسي) لتقدير تركيز البنزويلاكونيتين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-أسيتيلاكونيتين في عينات مختلفة ، ثم عدلنا المحلول القياسي إلى نطاق خطي لتضمين تركيز العينة في المنحنى. ويوضح الجدول 2 تركيزات المنحنى القياسي.- تحضير المحاليل المرجعية للبنزويلاكونيتين التي تحتوي على 1.036 ملغم / مل ، 0.518 ملغم / مل ، 0.2072 ملغم / مل ، 0.1036 ملغم / مل ، و 0.0518 ملغم / مل.
- تحضير المحاليل المرجعية للأكونيتين التي تحتوي على 1.313 ملغم / مل ، 0.5252 ملغم / مل ، 0.2626 ملغم / مل ، 0.1313 ملغم / مل ، و 0.05252 ملغم / مل.
- تحضير محاليل مرجعية 3-ديوكسياكونيتين تحتوي على 1.005 ملغم / مل ، 0.5025 ملغم / مل ، 0.201 ملغم / مل ، 0.1005 ملغم / مل ، و 0.402 ملغم / مل.
- تحضير محاليل مرجعية 3-أسيتيلاكونيتين تحتوي على 0.2018 مجم / مل ، 0.1009 مجم / مل ، 0.04036 مجم / مل ، 0.02018 مجم / مل ، و 0.01009 مجم / مل.
- تحقق من خطية كل مركب عن طريق رسم منطقة الذروة مقابل تركيز الحقن.
- لإجراء اختبار الدقة ، قم بحقن 10 ميكرولتر من كل محلول مرجعي في نظام HPLC ست مرات يوميا واستخدم نفس ظروف HPLC الموضحة في الخطوة 2.1 لتشغيل العينات سجل منطقة الذروة لكل مكون.
- قم بإجراء اختبار الثبات خلال اليوم عن طريق حقن 10 ميكرولتر من محلول العينة المحضر عبر الخطوة 1.3 وتحديد مناطق الذروة بعد 0 ساعة و 2 ساعة و 4 ساعات و 8 ساعات و 14 ساعة و 12 ساعة و 24 ساعة16.
- قم بإجراء اختبار قابلية التكاثر عن طريق أخذ ست عينات من نفس الدفعة من TBC لإعداد محلول عينة الاختبار ، وفقا للخطوة 1.3. قم بحقن 10 ميكرولتر من كل عينة في نظام HPLC وقم بتشغيل العينات كما هو موضح في الخطوة 2.1.
- قم بإجراء اختبار الاسترداد لتقييم دقة الطريقة. أضف 100٪ من المحلول القياسي لكل مكون من مكونات المؤشر (البنزويلاكونيتين ، الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، و 3-أسيتيلاكونيتين) في محلول الاختبار لحساب معدل الاسترداد ، على التوالي. على سبيل المثال ، نظرا لأن محتوى البنزويلاكونيتين هو 0.1524 مجم / مل في عينة TBC ، قم بوزن 0.1524 مجم بدقة من معايير البنزويلاكونيتين وأضفها إلى عينة TBC ، ثم قم بإعداد محلول عينة الاختبار وفقا للخطوة 1.3. قم بتشغيل هذه العينات بنفس شروط HPLC الموضحة في الخطوة 2.1. احسب معدل الاسترداد باستخدام المعادلة (1):
(1)
هنا ، A هي كمية المكون (بنزولاكونيتين ، أكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، أو 3-أسيتيلاكونيتين) ليتم قياسها في محلول العينة ، B هي كمية المعيار المضافة (بنزويلاكونيتين ، أكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، أو 3-أسيتيلاكونيتين) ، و C هي القيمة المقاسة للمحلول الذي يحتوي على المحلول القياسي ومحلول العينة (انظر الجدول 3). راجع الخطوة 2.1 للاطلاع على الشروط الكروماتوغرافية لتنفيذ الخطوات المذكورة أعلاه. يعكس معدل الاسترداد درجة فقدان المكون المستهدف (البنزويلاكونيتين ، الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، أو 3-أسيتيلاكونيتين) أثناء تحليل العينة. كلما ارتفع معدل الاسترداد ، انخفض فقدان المكون المستهدف.
(1)4. اختبار عامل واحد من TBC معالجتها مع نبيذ الشعير المرتفعات
ملاحظة: ستؤثر النسبة بين نبيذ الشعير في المرتفعات و TBC ، وسمك شريحة TBC ، ووقت النقع على انحلال المكونات الأكثر سمية (الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، و 3-أسيتيلاكونيتين) في TBC أثناء TBC المعالج بنبيذ الشعير في المرتفعات17. تم استخدام اختبار العامل الفردي وتصميم Box-Behnken للتحقيق في تأثير نسبة نبيذ الشعير في المرتفعات إلى TBC ، وسمك شريحة TBC ، ووقت النقع.
- قم بإجراء اختبار إضافة نبيذ الشعير في المرتفعات (أ) عن طريق إعداد خمس مجموعات من الاختبارات ، تحتوي كل منها على 30 جم من TBC ، حيث تكون كمية نبيذ الشعير في المرتفعات اثنين وثلاثة وأربعة وخمسة وستة أضعاف كمية TBC في الوصفة. مدة النقع 12 ساعة ، وسمك الشرائح 1.0 سم18.
ملاحظة: يجب معالجة كل مجموعة من نفس اختبار الحالة في ثلاث مجموعات متوازية. - قم بإجراء اختبار وقت النقع (B) عن طريق إعداد خمس مجموعات من الاختبارات ، تحتوي كل منها على 30 جم من TBC. أوقات النقع هي 12 ساعة و 24 ساعة و 36 ساعة و 48 ساعة. كمية نبيذ الشعير في المرتفعات هي خمسة أضعاف كمية TBC ، ويبلغ سمك الشرائح 1.0 سم19.
ملاحظة: يجب معالجة كل مجموعة من نفس تجربة الحالة في ثلاث مجموعات متوازية. - قم بإجراء اختبار سمك التقطيع (C) عن طريق إعداد خمس مجموعات من الاختبارات ، كل منها يحتوي على 30 جم من TBC. يبلغ سمك الشرائح 0.5 و 1.0 و 1.5 و 2.0 و 2.5 سم ، ووقت النقع 24 ساعة ، وكمية نبيذ الشعير في المرتفعات خمسة أضعاف كمية TBC20.
ملاحظة: يجب معالجة كل مجموعة من نفس تجربة الحالة في ثلاث مجموعات متوازية. - قم بوزن المنتجات المصنعة بدقة لكل مجموعة اختبار لإعداد محلول عينة الاختبار وفقا للخطوة 1.3. حدد مساحة الذروة لكل عينة بواسطة HPLC واستخدم المنحنى القياسي لتقدير كميات MDAs و DDAs. في المنحنى القياسي ، y هي منطقة الذروة و x هي المحتوى. محتوى MDAs هو البنزويل أكونيتين ، ومحتوى DDAs هو مجموع الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، و 3-أسيتيلاكونيتين.
- استخدام المحتوى الإجمالي ل DDAs ومحتوى MDAs كمؤشرات تقييم ، وتحديد معامل الوزن لكل مؤشر تقييم والتسجيل الشامل عبر طريقة الإنتروبيا (القسم 5).
تنبيه: TBC سامة ، وبالتالي يجب اتخاذ تدابير وقائية أثناء المعالجة.
5. طريقة الإنتروبيا لحساب التهديف الشامل
ملاحظة: نستخدم البيانات التجريبية لاختبار سمك التقطيع في اختبار العامل الفردي كمثال لتوضيح عملية الحساب بالتفصيل. نستخدم منطقة الذروة للمكونات في كل عينة في الجدول التكميلي S1 والمنحنى القياسي في الجدول 2 لحساب محتوى MDAs و DDAs (انظر الجدول التكميلي S2). في المعادلة الخطية ، y هي مساحة الذروة و x هي المحتوى. في هذه الدراسة ، تم استخدام MDA المعتدل السمية (البنزويلاكونيتين) كمؤشر إيجابي ، وتم استخدام المحتوى الكلي ل DDAs (الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، و 3-أسيتيلاكونيتين) ذات السمية العالية كمؤشر سلبي. محتوى MDAs هو البنزويل أكونيتين ، ومحتوى DDAs هو مجموع الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، و 3-أسيتيلاكونيتين. تحتوي كل عينة على مؤشرين للتقييم: i = 1,2,...,n ، و j = 1,2,... م21.
- استخدم المعادلة (2) لتوحيد محتوى MDAs22.
(2)
هكذا
ملاحظة: Xij هي قيمة مؤشر j-th لعينة i-th. Xij * هي القيمة القياسية ل Xij. على سبيل المثال ، i = 3 و j = 1 ، X31 يمثل قيمة المؤشر الأول للعينة الثالثة ، وهو
القيمة القياسية للمؤشر الأول في العينة الثالثة. 
- استخدم المعادلة (3) لتوحيد المحتوى الإجمالي ل DDAs23.
(3)
ملاحظة: هنا ، i = 3 ، j = 2 ، يمثل المؤشر الثاني للعينة الثالثة.
هي القيمة المعيارية للمؤشر الثاني في العينة الثالثة. 
في الجدول التكميلي S3. - استخدم المعادلتين (4) و (5) لتحديد قيمة الإنتروبيا (Hj) لكل مؤشر23.
- احسب احتمال تجربة j-th تحت مؤشر التقييم i-th Pij باستخدام المعادلة (4).
(4)
بالنسبة للرقم 3 ،
ملاحظة: قيم الاحتمال للمؤشر الأول والمؤشر الثاني للعينة الثالثة هي 0.2374 و 0.2812 على التوالي.
في الجدول التكميلي S3. - احسب إنتروبيا المعلومات Hj.
(5)
ملاحظة: H 1 هي إنتروبيا المؤشر الأول (MDAs) و H2 هي إنتروبيا المؤشر الثاني (DDAs) في اختبار سمك التقطيع.
- احسب احتمال تجربة j-th تحت مؤشر التقييم i-th Pij باستخدام المعادلة (4).
- استخدم المعادلة (6) لحساب أوزان المؤشر (Wj)23.
(6)
= 33.3٪
= 66.7٪
ملاحظة: Wjهو معامل الوزن لكل مؤشر. في اختبار سمك التقطيع ، يكون معامل الوزن للمؤشر الإيجابي (MDAs) والمؤشر السلبي (DDAs) 33.3٪ و 66.7٪ على التوالي. - استخدم المعادلة (7) لحساب الدرجات الشاملة للمؤشرات23.
(7)
بالنسبة للرقم 3 ،
ملاحظة: Si هو التسجيل الشامل لكل عينة. نحن بحاجة إلى الحصول على أعلى الدرجات كنقطة مركزية في تصميم Box-Behnken. وترد في الجدول التكميلي S3 S 1 و S 2 و S 3 و S 4 و S 5.
(2)
القيمة القياسية للمؤشر الأول في العينة الثالثة. 
(3)
هي القيمة المعيارية للمؤشر الثاني في العينة الثالثة. 
في الجدول التكميلي S3.
(4)
في الجدول التكميلي S3.
(5)
(6)
= 33.3٪
= 66.7٪
(7)
6. تصميم بوكس بينكن
- من خلال اختبار العامل الفردي ، استخدم الحالة ذات أعلى درجات شاملة (انظر الجدول 4 والجدول 5 والجدول 6 والشكل 2) كنقطة مركزية لسطح الاستجابة. استخدم كمية نبيذ الشعير في المرتفعات (A) ، ووقت النقع (B) ، وسمك شريحة TBC (C) كعوامل مؤثرة والتسجيل الشامل كقيمة استجابة24.
ملاحظة: استنادا إلى بيانات العامل الفردي في الجدول 4 والجدول 5 والجدول 6 ، يتم حساب أعلى درجة شاملة بواسطة المعادلات (2) و (3) و (4) و (5) و (6) و (7) في القسم 5 ، ويتم الحصول على أفضل نقطة. كانت كمية نبيذ الشعير في المرتفعات خمسة أضعاف كمية TBC ، وكان وقت النقع 36 ساعة ، وكان سمك التقطيع 1.0 سم.
7. خطوات تشغيل برنامج تصميم Box-Behnken
- افتح البرنامج (انظر جدول المواد) وحدد تصميم جديد | تصميم Box-Behnken (انظر الخطوة 5.1; الملف التكميلي 1).
- أدخل عدد العوامل المؤثرة وأدخل معلومات المستوى (ثلاثة مستويات ثلاثة عوامل ؛ انظر الجدول 7). يتكون تصميم Box-Behnken من 17 تجربة في هذه الدراسة. وأخيرا، انقر فوق متابعة (انظر الخطوة 5.2; الملف التكميلي 1).
- قم بتعيين النتيجة الشاملة (Y) بواسطة المعادلات (2) و (3) و (4) و (5) و (6) و (7) في القسم 5 كاستجابة. أدخل عدد قيم الاستجابة (تظهر الصورة قيمة استجابة واحدة فقط) وانقر فوق إنهاء (راجع الخطوة 5.3; الملف التكميلي 1).
- قم بمعالجة TBC مع نبيذ الشعير في المرتفعات وفقا لنتائج التصميم وأكمل التجربة بناء على 17 سيناريو مصممة لسطح الاستجابة.
- قم بإعداد حلول العينة باتباع الخطوة 1.3 وحساب المحتوى الإجمالي ل MDAs و DDAs بواسطة نظام HPLC.
- احسب النتيجة الشاملة لكل مجموعة عن طريق المعادلات (2) و (3) و (4) و (5) و (6) و (7) في الخطوة 5 ، وأدخل نتائج النتيجة (انظر الخطوة 5.4 ؛ الملف التكميلي 1).
- انقر فوق تحليل لتحليل معلومات التاريخ والطراز (انظر الخطوة 5.4.1; الملف التكميلي 1).
- إجراء التحقق الإحصائي من المعادلات متعددة الحدود وتحليل سطح الاستجابة المرسومة في مؤامرات نموذج 3D التي حصل عليها البرنامج.
- انقر فوق ANOVA في القائمة العلوية ولاحظ جدول النتائج.
- انقر فوق التحسين لعرض ظروف العملية المثلى المتوقعة (راجع الخطوة 5.4.2; الملف التكميلي 1).
8. اختبار التحقق من الصحة
- وفقا للنتائج المتوقعة من تصميم سطح استجابة Box-Behnken ، في الخطوة 7.3 ، حدد حالة المعالجة المثلى ل TBC. هنا ، هو كما يلي: ينقع TBC لمدة 24 ساعة في خمسة أضعاف كمية نبيذ الشعير في المرتفعات ، وسمك TBC هو 1.5 سم. خذ المستوى الأمثل للعوامل المؤثرة كظروف معالجة وقم بإعداد ثلاث مجموعات متوازية من التجارب للتحقق من استقرار تقنية المعالجة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في هذه الدراسة ، أشارت الدقة والاستقرار والتكرار واستعادة عينة TBC إلى أن الطريقة ممكنة. كان لمكونات المؤشر الأربعة في TBC علاقة خطية جيدة ضمن نطاق تركيز محدد. يوضح الشكل 1 مخططات كروماتوجرام نموذجية. أظهرت نتائج اختبار الدقة (الجدول 8) أن الانحراف المعياري النسبي (RSD) لمناطق الذروة كان 2.56٪ و 1.49٪ و 2.03٪ للبنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين على التوالي و 0.21٪ ل 3-أسيتيلاكونيتين ، مما يشير إلى أن دقة الأداة كانت جيدة. أشارت دراسة الثبات التي أجريت لمدة 24 ساعة (ن = 6) إلى قيم انحراف معياري نسبي تبلغ 2.76٪ و 2.21٪ و 2.98٪ و 2.31٪ للبنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-أسيتيلاكونيتين على التوالي (الجدول 9) ، مما يشير إلى أن محلول العينة كان مستقرا لمدة 24 ساعة. أظهرت نتائج اختبار التكرار (الجدول 10) أن RSDs لمناطق الذروة من البنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين كانت 2.80٪ و 2.92٪ و 2.92٪ و 2.07٪ على التوالي ، مما يدل على أن تكرار هذه الطريقة كان جيدا. أشارت نتائج تجربة الاسترداد إلى أن متوسط معدلات استرداد البنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين كانت 99.7٪ و 100.84٪ و 103.27٪ و 100.92٪ على التوالي.
كشف اختبار العامل الفردي ل TBC المعالج بنبيذ الشعير في المرتفعات أن كمية نبيذ الشعير في المرتفعات كانت خمسة أضعاف كمية TBC ، وكان وقت النقع 36 ساعة ، وكان سمك التقطيع 1.0 سم (الشكل 2). ويبين الجدول 11 التصميم التجريبي ونتائج نموذج سطح الاستجابة. تظهر نتائج ANOVA التجريبية في الجدول 12. يتم تركيب العوامل عن طريق الانحدار للحصول على معادلة الانحدار التربيعية متعددة الحدود (8). ج: إضافة نبيذ الشعير في المرتفعات ؛ ب: وقت النقع. ج: سمك التقطيع. أظهرت النتائج أن النموذج كان مناسبا جيدا وكان قادرا على التنبؤ بالعلاقة بين التسجيل الشامل لإضافة نبيذ الشعير في المرتفعات ، ووقت النقع ، وسمك الشريحة. كان ترتيب العوامل حسب قوة التأثيرات هو إضافة نبيذ الشعير في المرتفعات > سمك شريحة الأعشاب الطبية > وقت النقع.
(8)
وفقا للمعادلة (8) ، يتم استخدام برنامج تحليل Design-Expert 8.0.6 لرسم منحنى ثلاثي الأبعاد عبر الخطوة 7.2.1 (الشكل 3). يشير الميل الأكثر انحدارا لسطح الاستجابة إلى تفاعل أفقي أقوى للعوامل ، والميل اللطيف هو عكس ذلك. توضح القيمة p (p < 0.0001) للنموذج في الجدول 12 أن النموذج مهم ، مع R2 من 0.9754 ومصطلح غير مناسب (p = 0.7253) ، مما يشير إلى أن النموذج مناسب تماما ويعكس بشكل أفضل العلاقة بين إضافة نبيذ الشعير في المرتفعات ، ووقت النقع ، وسمك شريحة الأعشاب الطبية ، والنتيجة الإجمالية.
وفقا للوزن الموضوعي لكل مؤشر تحدده طريقة الإنتروبيا التحليلية ، تم إجراء تسجيل شامل ، وتم تحديد حالة المعالجة المثلى ل TBC على النحو التالي: ينقع TBC لمدة 24 ساعة في خمسة أضعاف كمية نبيذ الشعير في المرتفعات ، وسمك TBC هو 1.5 سم. أظهرت نتائج اختبار التحقق أن إجمالي DDAs كان 0.6963 و 0.6793 و 0.7023 mg / g ، على التوالي ، وكان محتوى MDA في ثلاث مجموعات من الاختبارات المتوازية 0.2096 و 0.2237 و 0.2109 mg / g. وكان متوسط التهديف الشامل 83. كان تحديد وضع اللاجئ بين اختبار التحقق والقيمة المتوقعة أقل من 1.8٪ ، مما يشير إلى أن تقنية المعالجة المثلى ل TBC المعالجة بنبيذ الشعير في المرتفعات بسيطة وممكنة ومستقرة ، مما يوفر مرجعا للإنتاج الصناعي.
الشكل 1: كروماتوجرام تمثيلي للمكونات الأربعة المميزة بعد ضبط الشروط الكروماتوغرافية المذكورة في الخطوة 2.1 (ن = 1). أ: الكروماتوجرام النموذجي للمحلول المرجعي. الذروة 1 هي البنزويلاكونين ، والذروة 2 هي الأكونيتين ، والذروة 3 هي 3-ديوكسياكونيتين ، والذروة 4 هي 3-أسيتيلاكونيتين. ب: الكروماتوجرام النموذجي لمحلول العينة. الذروة 1 هي البنزويلاكونين ، والذروة 2 هي الأكونيتين ، والذروة 3 هي 3-ديوكسياكونيتين ، والذروة 4 هي 3-أسيتيلاكونيتين. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: التسجيل الشامل لاختبار العامل الفردي ل TBC المعالج بنبيذ الشعير في المرتفعات (ن = 3). (أ) كمية نبيذ الشعير في المرتفعات (مرات) ؛ (ب) وقت النقع (ح)؛ (ج) سمك الشريحة (سم). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: خريطة سطح الاستجابة ثلاثية الأبعاد لتأثير تفاعل العوامل المختلفة على التسجيل الشامل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| شرط | البارامتر |
| عمود كروماتوغرافي | الطراز النهائي ODS-3 C18 (4.6 مم × 250 مم، 5 ميكرومتر) |
| المرحلة المتنقلة | الأسيتونيتريل (أ) - 0.04 مول / لتر محلول أسيتات الأمونيوم (ب) درجة الحموضة = 8.5 ± 0.5 |
| شطف التدرج | 0-10 دقيقة ، 0٪ -70٪ أ ؛ 10-15 دقيقة ، 70-50٪ أ ؛ 15-30 دقيقة ، 50-40٪ أ ؛ 30-38 دقيقة ، 40-15٪ أ ؛ 38-45 دقيقة ، 15-15٪ أ ؛ 45-55 دقيقة، 15-70٪ أ |
| معدل التدفق | 1 مل / دقيقة |
| درجة حرارة العمود | 30 درجة مئوية |
| الكشف عن الطول الموجي | 235 نيوتن متر |
| حجم العينة | 10 ميكرولتر |
الجدول 1: الظروف الكروماتوغرافية المحددة في هذه التجربة. تفاصيل حول العمود الكروماتوغرافي ، والطور المتحرك ، وشطف التدرج ، ومعدل التدفق ، ودرجة حرارة العمود ، والطول الموجي للكشف ، وحجم العينة.
| مكونات الفهرس | معادلة خطية | نطاق الخطية (ملغم / مل) | ر2 |
| بنزويلاكونين | ص=11,658,706.1677x +19,717.0872 | 1.036-0.0518 | 0.9995 |
| الأكونيتين | ص=11,199,784.3030x -67,641.2429 | 1.313-0.05252 | 0.9999 |
| 3-ديوكسياكونيتين | ص=11,214,550.3140x +59,795.9119 | 1.005-0.0402 | 0.9999 |
| 3-أسيتيلاكونيتين | ص=9,887,511.9074x +26,713.6359 | 0.2018-0.01009 | 0.9994 |
جدول 2: العلاقة الخطية لمكونات المؤشر في TBC. كان لمكونات المؤشر الأربعة في TBC علاقة خطية جيدة في نطاق تركيز محدد.
| مكونات الفهرس | المحتوى المعروف (ملغ) | إضافة الكمية (ملغ) | قياس الكمية (ملغ) | حالات الاسترداد (٪) | متوسط حالات الاسترداد (٪) | تحديد وضع اللاجئ (٪) |
| بنزويلاكونين | 0.1558 | 0.1295 | 0.2901 | 96.4 | 99.7 | 3.14 |
| 0.1574 | 0.1295 | 0.2849 | 98.46 | |||
| 0.156 | 0.1295 | 0.2871 | 101.24 | |||
| 0.1574 | 0.1295 | 0.2923 | 104.95 | |||
| 0.1449 | 0.1295 | 0.2736 | 99.38 | |||
| 0.1566 | 0.1295 | 0.2839 | 98.3 | |||
| الأكونيتين | 0.3099 | 0.3283 | 0.645 | 102.07 | 100.84 | 2.02 |
| 0.3153 | 0.3283 | 0.6371 | 98.02 | |||
| 0.2928 | 0.3283 | 0.6314 | 103.14 | |||
| 0.2969 | 0.3283 | 0.6325 | 102.23 | |||
| 0.3035 | 0.3283 | 0.6343 | 100.76 | |||
| 0.3094 | 0.3283 | 0.6339 | 98.84 | |||
| 3-ديوكسياكونيتين | 0.1789 | 0.201 | 0.3788 | 99.45 | 103.27 | 2.65 |
| 0.1793 | 0.201 | 0.3845 | 102.09 | |||
| 0.1741 | 0.201 | 0.3774 | 101.14 | |||
| 0.1635 | 0.201 | 0.3753 | 105.37 | |||
| 0.1708 | 0.201 | 0.383 | 105.57 | |||
| 0.1653 | 0.201 | 0.3783 | 105.97 | |||
| 3-أسيتيلاكونيتين | 0.0169 | 0.02 | 0.0374 | 102.5 | 100.92 | 1.15 |
| 0.0168 | 0.02 | 0.037 | 101 | |||
| 0.0166 | 0.02 | 0.0366 | 100 | |||
| 0.0161 | 0.02 | 0.0365 | 102 | |||
| 0.017 | 0.02 | 0.0369 | 99.5 | |||
| 0.0171 | 0.02 | 0.0372 | 100.5 |
الجدول 3: نتائج قياس معدل استرداد العينة. كان RSD لمعدل استرداد البنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-أسيتيلاكونيتين 3.14٪ و 2.02٪ و 2.65٪ و 1.15٪ على التوالي.
| رقم | اختبار إضافة نبيذ الشعير في المرتفعات (مرات) | محتوى MDAs (ملغم / جم) | محتوى DDAs (ملغم / ز) | تسجيل شامل / نقاط |
| 1 | 2 | 0.1875 | 0.8254 | 58.98421777 |
| 2 | 3 | 0.1099 | 0.9847 | 0.056898711 |
| 3 | 4 | 0.2296 | 0.8487 | 71.12048666 |
| 4 | 5 | 0.2161 | 0.6894 | 94.6966946 |
| 5 | 6 | 0.2006 | 0.7472 | 78.22537224 |
الجدول 4: نتائج اختبار العامل الواحد للنسبة بين نبيذ الشعير في المرتفعات و TBC.
| رقم | اختبار وقت النقع (ح) | محتوى MDAs (ملغم / جم) | محتوى DDAs (ملغم / ز) | تسجيل شامل / نقاط |
| 1 | 6 | 0.236292609 | 1.047811476 | 59.67501032 |
| 2 | 12 | 0.193880685 | 1.164420534 | 23.10718817 |
| 3 | 24 | 0.229606225 | 0.848736346 | 53.86313899 |
| 4 | 36 | 0.151447388 | 0.701045217 | 79.15664943 |
| 5 | 48 | 0.193311963 | 0.767427412 | 68.88872066 |
الجدول 5: نتائج اختبار العامل الفردي لوقت النقع.
| رقم | اختبار سمك التقطيع (سم) | محتوى MDAs (ملغم / جم) | محتوى DDAs (ملغم / ز) | تسجيل شامل / نقاط |
| 1 | 0.5 | 0.1043 | 0.6190 | 66.96 |
| 2 | 1 | 0.1709 | 0.6992 | 75.05 |
| 3 | 1.5 | 0.1507 | 0.6954 | 66.23 |
| 4 | 2 | 0.1459 | 0.8347 | 20.66 |
| 5 | 2.5 | 0.1451 | 0.8298 | 21.79 |
الجدول 6: نتائج اختبار العامل الواحد لسمك شريحة TBC.
| مستوى | عامل | ||
| أ (كمية نبيذ الشعير في المرتفعات ، مرات) | ب (وقت النقع ، ح) | C (سمك الشريحة ، سم) | |
| 1.0000 | 4.0000 | 24.0000 | 0.5000 |
| 2.0000 | 5.0000 | 36.0000 | 1.0000 |
| 3.0000 | 6.0000 | 48.0000 | 1.5000 |
الجدول 7: جدول عامل مستوى سطح استجابة تصميم Box-Behnken.
| منطقة الذروة في مكونات المؤشر | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | تحديد وضع اللاجئ (٪) |
| بنزويلاكونين | 1281252 | 1290912 | 1198912 | 1256056 | 1256704 | 1266738 | 2.56% |
| الأكونيتين | 2861208 | 2881686 | 2785022 | 2790990 | 2859024 | 2799395 | 1.50% |
| 3-ديوكسياكونيتين | 2356317 | 2328383 | 2429059 | 2350987 | 2406114 | 2450374 | 2.04% |
| 3-أسيتيلاكونيتين | 2008110 | 2021560 | 2014519 | 2015881 | 2015209 | 2012529 | 0.22% |
الجدول 8: نتائج القياس الدقيق. كان RSD لمناطق الذروة من البنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-أسيتيلاكونيتين 2.56٪ و 1.49٪ و 2.03٪ و 0.22٪ على التوالي (ن = 6).
| منطقة الذروة في مكونات المؤشر | 0 | 2 | 4 | 8 | 12 | 24 | تحديد وضع اللاجئ (٪) |
| بنزويلاكونين | 191657 | 189590 | 193934 | 205135 | 196159 | 195954 | 2.76 |
| الأكونيتين | 312259 | 310240 | 294331 | 309104 | 312199 | 305360 | 2.22 |
| 3-ديوكسياكونيتين | 230174 | 246787 | 239760 | 249302 | 248806 | 243396 | 2.98 |
| 3-أسيتيلاكونيتين | 17086 | 16953 | 16826 | 16914 | 16979 | 17896 | 2.31 |
الجدول 9: نتائج اختبار الثبات. كان RSD لمناطق الذروة من البنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-أسيتيلاكونيتين 2.76٪ و 2.21٪ و 2.98٪ و 2.31٪ على التوالي (ن = 6).
| منطقة الذروة لمكونات المؤشر | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | تحديد وضع اللاجئ (٪) |
| بنزويلاكونين | 191067 | 192795 | 191058 | 192907 | 179103 | 192008 | 2.79 |
| الأكونيتين | 308142 | 313754 | 290487 | 294740 | 301515 | 307654 | 2.92 |
| 3-ديوكسياكونيتين | 249021 | 249456 | 243963 | 232781 | 240524 | 234661 | 2.92 |
| 3-أسيتيلاكونيتين | 17465 | 17451 | 17247 | 16691 | 17608 | 17686 | 2.07 |
الجدول 10: نتائج اختبار التكاثر. كان RSD لمناطق الذروة من البنزويلاكونين والأكونيتين و 3-ديوكسياكونيتين و 3-أسيتيلاكونيتين 2.79٪ و 2.92٪ و 2.92٪ و 2.07٪ على التوالي (ن = 6).
| رقم | أ (إضافة نبيذ الشعير في المرتفعات ، مرات) | ب (وقت النقع ، ح) | C (سمك التقطيع ، سم) | محتوى MDAs (ملغم / جم) | محتوى DDAs (ملغم / ز) | تسجيل شامل / نقاط |
| 1 | 4 | 36 | 0.5 | 0.1032 | 0.6882 | 28.2 |
| 2 | 5 | 48 | 1.5 | 0.1688 | 0.6588 | 56.49 |
| 3 | 6 | 24 | 1 | 0.1236 | 0.6535 | 33.02 |
| 4 | 5 | 24 | 1.5 | 0.2201 | 0.692 | 87.23 |
| 5 | 5 | 36 | 1 | 0.2094 | 0.6199 | 70.71 |
| 6 | 5 | 24 | 0.5 | 0.1809 | 0.5689 | 48.56 |
| 7 | 4 | 24 | 1 | 0.2016 | 0.7744 | 90.74 |
| 8 | 5 | 36 | 1 | 0.2169 | 0.6889 | 85.15 |
| 9 | 5 | 36 | 1 | 0.2103 | 0.6802 | 80.5 |
| 10 | 6 | 36 | 0.5 | 0.1036 | 0.5072 | 0.36 |
| 11 | 6 | 36 | 1.5 | 0.1089 | 0.5062 | 2.86 |
| 12 | 4 | 48 | 1 | 0.1789 | 0.6789 | 64.6 |
| 13 | 6 | 48 | 1 | 0.1036 | 0.5536 | 7.55 |
| 14 | 5 | 36 | 1 | 0.2062 | 0.6084 | 67.33 |
| 15 | 4 | 36 | 1.5 | 0.1832 | 0.6954 | 69.31 |
| 16 | 5 | 48 | 0.5 | 0.1759 | 0.5569 | 44.21 |
| 17 | 5 | 36 | 1 | 0.2161 | 0.6894 | 84.82 |
الجدول 11: تصميم ونتائج اختبار تصميم سطح الاستجابة.
| مصدر | مجموع المربعات | مدافع | متوسط مربع | F - القيمة | القيمة الاحتمالية |
| نموذج | 14403.27 | 9 | 1600.36 | 30.8 | <0.0001 |
| A | 5463.26 | 1 | 5463.26 | 105.15 | <0.0001 |
| B | 939.61 | 1 | 939.61 | 18.08 | 0.0038 |
| C | 1117.7 | 1 | 1117.7 | 21.51 | 0.0024 |
| AB | 0.11 | 1 | 0.11 | 0.00216 | 0.9642 |
| مكيف هواء | 372.68 | 1 | 372.68 | 7.17 | 0.0316 |
| ه. | 174.11 | 1 | 174.11 | 3.35 | 0.1099 |
| أ 2 | 4133.52 | 1 | 4133.52 | 79.55 | <0.0001 |
| ب2 | 28.63 | 1 | 28.63 | 0.55 | 0.482 |
| ج2 | 1890.1 | 1 | 1890.1 | 36.38 | 0.0005 |
| المتبقيه | 363.71 | 7 | 51.96 | ||
| عدم الملاءمة | 93.28 | 3 | 31.09 | 0.46 | 0.7253 |
| خطأ خالص | 270.43 | 4 | 67.61 | ||
| كور توتال | 14766.99 | 16 |
الجدول 12: ANOVA لنموذج الانحدار.
الملف التكميلي 1: دليل مفصل لبرنامج تصميم Box-Behnken. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.
الجدول التكميلي S1: عينة منطقة الذروة لاختبار سمك التقطيع بواسطة HPLC. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.
الجدول التكميلي S2: محتوى MDAs (البنزويلاكونين) و DDAs (الأكونيتين ، 3-ديوكسياكونيتين ، 3-أسيتيلاكونيتين) في اختبار سمك التقطيع. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.
الجدول التكميلي S3: تسجيل شامل لاختبار سمك التقطيع. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
كدواء تبتي شائع الاستخدام له تأثيرات سامة ، فإن التأثير المخفف للسمية للمعالجة مهم للغاية للتطبيق السريري ل TBC25. في هذه الدراسة ، تم تحسين تقنية معالجة TBC المعالجة بنبيذ الشعير في المرتفعات. من خلال مراجعة المكونات النشطة الرئيسية وربط التأثيرات الدوائية ل TBC ، وجدنا أن قلويدات TBC لها تأثيرات مضادة للالتهابات ومسكنات ويمكن استخدامها لعلاج التهاب المفاصل الروماتويدي. في هذه الدراسة ، تم استخدام MDA السامة المعتدلة كمؤشر إيجابي. واستخدم المحتوى الإجمالي لاتفاقات نزع السلاح كمؤشر سلبي. تم استخدام طريقة الإنتروبيا في حساب أوزان المؤشر وتحسين تقنية المعالجة26.
خلال التجربة ، يجب ملاحظة نقطتين بشكل خاص. أولا ، هناك حاجة إلى ثلاث مجموعات متوازية من التجارب لكل حالة من عامل واحد لتحسين دقة النتائج اللاحقة. ثانيا ، في حساب الدرجات الشاملة ، يتم ضرب القيم الموحدة لكل مؤشر بعامل الترجيح بدلا من البيانات الأولية. يضمن هذا الإجراء دقة نتائج الحساب. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن تكون قيمة R2 في ANOVA قريبة قدر الإمكان من قيمة واحدة ؛ خلاف ذلك ، فإن مستويات العوامل قريبة للغاية ، ولها تأثير ضئيل على النتائج ؛ يجب أن يكون الفرق بين المستويات واسعا إلى حد ما.
على الرغم من أن استخدام التسجيل الشامل متعدد المؤشرات جنبا إلى جنب مع طريقة سطح الاستجابة يضمن التنبؤ الدقيق لعملية معالجة TBC ، إلا أن له قيودا. أولا ، عندما تستخدم المختبرات HPLC لقياس المكونات المشار إليها في المواد الطبية ، قد يحدث خطأ بشري بسبب صغر حجم التجارب. يمكن الحصول على نتائج أكثر إقناعا إذا تم إجراء تقييم تجريبي في مصنع معالجة الأعشاب كبير الحجم. ثانيا ، طريقة تصميم Box-Behnken ليست مناسبة لتحسين العملية برمتها. بعد استيراد البيانات التجريبية إلى برنامج سطح الاستجابة ، يجب أن يكون مصطلح النموذج كبيرا (p < 0.05) ، ويجب أن يكون عدم الملاءمة غير مهم (p > 0.05) في بيانات ANOVA. إذا تم عكس النتيجة ، فإن العملية غير مناسبة للتحسين بهذه الطريقة.
في الختام ، بالمقارنة مع اختبار العامل الفردي الشائع الاستخدام ، والتصميم الموحد ، والتصميم المتعامد ، وتصميم نقطة النجوم ، فإن نهج سطح استجابة Box-Behnken هو طريقة تصميم تحسين تجريبية تستخدم نموذج مصطلح خطي وتربيعي متعدد المتغيرات يناسب27. النموذج الذي تنبأت به طريقة سطح استجابة Behnken له استمرارية ودقة تجريبية عالية ، ويتنبأ بالنقاط المثلى28,29. في التجربة الحالية ، تم تحديد العملية المفضلة ل TBC من خلال التسجيل الشامل بناء على اختبار العامل الفردي ، ولم ينحرف اختبار التحقق النهائي كثيرا عن القيمة المتوقعة ، مما يشير إلى أن النموذج المختار معقول ويمكن أن يوفر مراجع لتكنولوجيا معالجة TBC المعالجة بنبيذ الشعير في المرتفعات. يمكن أن توفر تقنية المعالجة المثلى معلومات وإرشادات لدراسة التأثير المخفف للسمية لتجهيز الأدوية العرقية السامة الأخرى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
Acknowledgments
تم دعم هذا العمل ماليا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82130113) ، ومؤسسة علوم ما بعد الدكتوراه الصينية (رقم 2021MD703800) ، ومؤسسة العلوم للشباب في قسم العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (رقم 2022NSFSC1449) ، وبرنامج تعزيز أبحاث "علماء Xinglin" بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم. BSH2021009).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS000905 | |
| 3-Acetylaconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS010552 | |
| 3-Deoxyaconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS011258 | |
| Benzoylaconine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS010300 | |
| Circulating water vacuum pump | Gongyi City Yuhua Instrument Co., Ltd | SHZ-DIII | |
| Design-Expert | State-East Corporation | 8.0.6 | |
| Electric constant temperature drying oven | Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd | 101-3-BS | |
| Electronic analytical balance | Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd. | FA1004 | |
| High performance liquid chromatography | Shimadzu Enterprise Management (China) Co., Ltd | shimadzu 2030 | |
| Highland barley rice | Kangding City, Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture, Sichuan Province | 20221015 | |
| Millipore filter | Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd | φ13 0.22 Nylon66 | |
| Rotary evaporator | Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory | RE-2000A | |
| Starter of liquor-making | Angel Yeast CO., Ltd | BJ22-104 | |
| Ultra pure water systemic | Merck Millipore Ltd. | Milli-Q | |
| Ultrasonic cleansing machine | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200 DTS |
References
- Zhang, J., et al. Study of quality standards for Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 40 (9), 2100-2103 (2018).
- Liu, X. F., et al. Study on toxicity reduction and effect preservation of the compatibility of Tibetan medicine Aconitum pendulum Busch and Terminalia chebula Retz. Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica. 13 (3), 69-72 (2022).
- Luo, D. S. Chinese Tibetan herbs. 63, Ethnic publishing House. Beijing. (2007).
- Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum Busch and A. flavum Hand-Mazz: A narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. Journal of Ethnopharmacology. 292, 115216 (2022).
- Yu, L. Q., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Frontiers in Pharmacology. 13, 938915 (2022).
- Zhang, Y., Fu, X. Y. UPLC Simultaneous determination of six esteric alkaloids components in Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 16 (5), 62-65 (2020).
- Wang, Y. J., et al. Determination of alkaloid content in different medicinal parts of the folk medicine. Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 32 (8), 1390-1393 (2010).
- Shao, C. L., Fu, J. L., Fu, S. X., Ma, H. W., Sun, X. D. Toxicity research and processing methods of Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 10 (2), 32-34 (2014).
- Chan, T. Y. K.
- Li, S. L., et al. An insight into current advances on pharmacology, pharmacokinetics, toxicity and detoxification of aconitine. Biomedicine & Pharmacotherapy. 151, 113115 (2022).
- Zhao, M. Y. Study on identification and processing attenuation of Tibetan drug Bangna. Southwest Jiaotong University. , (2018).
- Tibet Autonomous Region Food and Drug Administration. Tibetan herbal medicine concoction specification. , Tibetan People's Publishing House. Lhasa. 135 (2008).
- Abd-El-Aziz, N. M., Hifnawy, M. S., El-Ashmawy, A. A., Lotfy, R. A., Younis, I. Y. Application of Box-Behnken design for optimization of phenolics extraction from Leontodon hispidulus in relation to its antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activities. Scientific Reports. 12 (1), 8829 (2022).
- Quan, L., et al. Optimization of processing technology of stir-frying with vinegar of Curcuma Longa Radix by orthogonal design and Box-Behnken design-response surface based on entropy method. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 49 (8), 1823-1828 (2018).
- Jia, F. C., et al. Research on the brewing technology of Tibetan traditional barley liquor based on response surface method. Food and Fermentation Industries. 45 (22), 171-178 (2019).
- Zhao, X. H., et al. Determination of osthol in different traditional Chinese medicines by HPLC. Chinese Journal of Pharmaceutics. 19 (5), 154-158 (2021).
- Feng, Z. G., et al. Processing methods and the underlying detoxification mechanisms for toxic medicinal materials used by ethnic minorities in China: A review. Journal of Ethnopharmacology. 305, 116126 (2023).
- Wang, D. M., Lu, Z. J., Wang, Y. H., Zhang, C. S. Applying grading methods of synthesizing multiple guidelines to optimizing alcohol-steam processing technology from Ploygonatum odordatum. Journal of Zhejiang A & F University. 30 (1), 100-106 (2013).
- He, N. L., Bao, M. L., Ba, G. N. Study on the best processing technology of Terminalia Decoction soaking iron. Journal of Medicine & Pharmacy of Chinese Minorities. 20 (9), 36-38 (2014).
- Liu, C., et al. Optimization of processing technology for Saposhnikoviae Radix by Box-Behnken design-response surface methodology. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 20 (5), 18-21 (2014).
- Ferreira, S. L. C., et al. Box-Behnken design: an alternative for the optimization of analytical methods. Analytica Chimica Acta. 597 (2), 179-186 (2007).
- Dong, R., Lu, Y., Wang, P. The process optimization of vinegar roasting of Bupleurum chinense by entropy weight method combined with Box-Behnken response surface method and its protective effect on mice liver injury. Science and Technology of Food Industry. 42 (23), 209-217 (2021).
- Li, W. J., et al. Analysis on the times of Polygonati Rhizoma steamed by multiple times based on entropy weight and gray relative analysis method. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 36 (11), 6764-6769 (2021).
- Huang, B. J., Liu, X. T., Mao, Y. M., Qi, B., Liu, L. Response surface methodology combined with analytic hierarchy process to optimize the processing technology of Custutae semen with wine. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 33 (8), 1890-1894 (2022).
- Wang, J., Meng, X. H., Chai, T., Yang, J. L., Shi, Y. P. Diterpenoid alkaloids and one lignan from the roots of Aconitum pendulum Busch. Natural Products and Bioprospecting. 9 (6), 419-423 (2019).
- Xie, H. H., et al. Metabolomics study of aconitine and benzoylaconine induced reproductive toxicity in Be Wo cell. Chinese Journal of Analytical Chemistry. 43 (12), 1808-1813 (2015).
- Han, Y. F., et al. Optimization of extraction process for Yangyin Runmu granules by Box-Behnken design based on entropy weight method-analytic hierarchy process method. Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy. 39 (7), 896-903 (2022).
- Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Clinamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (8), 1838-1842 (2022).
- Pan, Y. L. Optimization of stir-baking process of Coix lacryma-Jobi Var.Mayuen Kernel by Box-Behnken response surface methodology. Shandong Chemical Industry. 51 (14), 73-75 (2022).
